發(fā)布時(shí)間：2021-02-09 05:49

　　背景和目的根據(jù)GLOBOCAN 2018統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù),目前全球范圍內(nèi)癌癥發(fā)病率和死亡率依然處于迅速增長階段。無論是從發(fā)病率還是死亡率來看,肝癌都高居榜首,分別達(dá)到84萬人、78萬人。肝癌的發(fā)生和眾多因素有關(guān),包括乙型肝炎,丙型肝炎,酒精濫用等。眾所周知,乙醇已被歸類為致癌物質(zhì),其代謝產(chǎn)物乙醛是一種極具危險(xiǎn)性物質(zhì)。在乙醛代謝過程中,乙醛脫氫酶2（ALDH2）發(fā)揮著重要的作用。它能夠?qū)⒁胰┐x為乙酸鹽,乙酸鹽經(jīng)腸道排出體外,從而消除乙醛的毒性作用。rs671是ALDH2中最常見的突變位點(diǎn),rs671位點(diǎn)的突變可以顯著降低ALDH2的活性,從而減弱其代謝酒精的能力。其突變類型又細(xì)分為ALDH2雜合突變（ALDH2*1/*2）和純合突變類型（ALDH2*2/*2）,分別使其酶活降低至45%和5%。根據(jù)現(xiàn)有報(bào)道,ALDH2基因突變和肝細(xì)胞癌（Hepatocellular carcinoma cell,HCC）關(guān)系仍存在爭議。慢性重度飲酒是導(dǎo)致HCC發(fā)病的最重要的環(huán)境因素之一。而ALDH2基因的突變與環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)因素相互作用后,能夠明顯增加HCC的發(fā)病。據(jù)報(bào)道,ALDH2基因在東亞人群中的突變率較高。但是... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．１．１?ＡＬＤＨ２在正常肝組織中的表達(dá)情況

４８７Ｌｙｓ）?？?ＫＴｕｍａｒ（ｎｏ．ｍｕｔａ）??．■ｓ?Ｉ?■?Ｔｕｍｏｒ（ｎｏ－ｍｕｔａ）?＾?Ｉ?圈?Ｔｕｍｏ『｛Ｇｌｕ４８７Ｌｙｓ｝??■?ｌ??Ｇ??Ｆ?ｉ５〇１?ｒ＾ｚ：——??一?ｕ〇ｉ???■?Ｎｏｒｍａｌ?之?？???１２０Ｊ?丁?Ｔｕｍｏｒｔｎｏ－ｍｕｔａ）?＾?１００＜??．＾ｉ〇〇?｜?■ＴｕｍｏｒｔＧｌｕ４８７Ｌｙｓ）?ｆ??ｉｌ－Ｂ??〇ｉ—??■?－ｉ?■?－?Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｈｕｈ－１?ＨｅｐＧ２??圖３．１．２?：?ＡＬＤＨ２在肝癌組織和細(xì)胞中呈現(xiàn)出低表達(dá)和低酶活性。Ａ－Ｂ．組織芯片檢測??ＡＬＤＨ２蛋白表達(dá)情況。Ｃ－Ｄ．?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測正常肝組織，ＡＬＤＨ２野生型肝癌組織和??ＡＬＤＨ２＊２肝癌組織中ＡＬＤＨ２蛋白表達(dá)情況。Ｅ．?ＲＴ－ＰＣＲ檢測這三組中ＡＬＤＨ２?ｍＲＮＡ??水平。Ｆ．ＡＬＤＨ２試劑盒檢測這三組標(biāo)本中ＡＬＤＨ２酶活力情況。ＧＡＬＤＨ２試劑盒檢??測肝癌細(xì)胞中ＡＬＤＨ２酶活性的表達(dá)（Ｖ?＜０．０５，?＊＊尸＜０．０１，＊＊＊尸＜０．００１?）。??３．１．３?ＡＬＤＨ２抑制肝癌細(xì)胞的增殖能力和克隆形成能力。??為了確定ＡＬＤＨ２對(duì)肝癌細(xì)胞的影響，我們運(yùn)用基因編輯的技術(shù)成功構(gòu)??建了穩(wěn)定的ＡＬＤＨ２表達(dá)細(xì)胞株和ＡＬＤＨ２點(diǎn)突變細(xì)胞株（如圖３．１．３．１Ａ）。??接下來，我們進(jìn)一步檢測了?ＡＬＤＨ２酶活性，結(jié)果顯示，過表達(dá)的ＡＬＤＨ２??細(xì)胞株ＡＬＤＨ２活性明顯增強(qiáng)，對(duì)于ＡＬＤＨ２點(diǎn)突變的細(xì)胞株，ＡＬＤＨ２的活??性相對(duì)于過表達(dá)的細(xì)胞株明顯減低（如圖３．１．３．１Ｂ）。接下來，我們檢測了??ＡＬＤＨ２對(duì)肝癌細(xì)胞

?實(shí)驗(yàn)結(jié)果???Ｅ?１４０１?Ｉ???１?酬?Ｍｏｃｋ????１?￡?１２０－?＿Ｌ＿?ＡＬＤＨ２??ｌ？１００??ＨｅｐＧ２?丁??ｐ?ｉ：Ｈ???，，?－ＭＯＣＫ??？Ｉ?一１２０?丁?ＡＬＤＨ２（Ｇｌｕ４８７Ｌｙｓ）??－｜３１００－?ＢＩＡＬＤＨ２??Ｈｕｈ－１?■ｓｉ８０?ｔ??Ｌ——ＩＩ?ＩＩ?！�。。骸觯撸�??Ｍｏｃｋ?ＡＬＤＨ２（Ｇｌｕ４８７Ｌｙｓ）?ＡＬＤＨ２?Ｊ??圖３．１．３．１?：過表達(dá)ＡＬＤＨ２對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響。Ａ．?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ鑒定ＨｅｐＧ２和??Ｈｕｈ－１細(xì)胞系的ＡＬＤＨ２過表達(dá)和點(diǎn)突變后穩(wěn)定細(xì)胞株ＡＬＤＨ２的表達(dá)。Ｂ．?ＡＬＤＨ２過??表達(dá)和點(diǎn)突變后ＡＬＤＨ２酶活力的檢測。Ｃ．?ＭＴＴ檢測過表達(dá)ＡＬＤＨ２后對(duì)肝癌細(xì)胞生??長存活的影響。Ｄ．平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測過表達(dá)ＡＬＤＨ２過表達(dá)后對(duì)細(xì)胞生長增殖的影響。??Ｅ．軟瓊脂克隆實(shí)驗(yàn)檢測過表達(dá)基因后對(duì)肝癌細(xì)胞集落形成能力和增殖能力的影響??（＊ｐ＜０．０５；?＊＊ｐ＜０．０１；?＊＊＊／？＜０．００１?）。??Ａ?Ｂ??，Ｓ９ＲＮＡ??／?＼?＾?＼?Ｍｏｃｋ?＃１?＃２?Ｍ??［ｒ?＾?Ｖ）?＿２瞻＿…＇??、?ｊ?Ｍ＾ｃｔｌｎ?？？??Ｃ?Ｄ??ＨｅｐＧ２?ＨｅｐＧ２???ｔ??０．８ｉ??１５０－１??ｊ??ＩＨＭｏｃｋ?”?＋?Ｍｏｃｋ??１?Ｈ?－Ｓ９＃１?Ｉ０－６＇?Ａ?：：??Ｉ?１〇°＇?ｍ?ｌ?ｆ?＾?ＡＬＤＨ２??ＩＪ?；ｖ??〇Ｊ－＾Ｈ????ＯＨ?２４Ｈ?４８Ｈ?７２Ｈ??圖３．１．３．２?：敲除ＡＬＤＨ２

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]p53和γ-H2AX作為乙醛引起DNA損傷早期生物標(biāo)記物的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 周學(xué)賢,Penny Jones,Paul Carmichael,郝衛(wèi)東.  癌變.畸變.突變. 2014(02)



本文編號(hào)：3025154