MYC是一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子,隸屬于bHLH-LZ家族,其常與Max相互作用形成二聚體靶向特定DNA序列（CACGTG）調(diào)控眾多基因轉(zhuǎn)錄,因其介導(dǎo)了超過30%的腫瘤發(fā)生而作為經(jīng)典癌基因?yàn)槿藗兯熘�。大部分腫瘤如卵巢癌、乳腺癌及結(jié)腸癌等都存在MYC的基因擴(kuò)增和異常激活。人類基因組約15%的基因受MYC轉(zhuǎn)錄調(diào)控,例如E2F2、CDKN1A、CCND1等。MYC通過調(diào)控眾多基因的轉(zhuǎn)錄,在促進(jìn)血管形成、促進(jìn)腫瘤發(fā)生,以及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞惡性增殖和分化及等方面占據(jù)重要地位。最近研究表明,MYC能夠調(diào)控腫瘤細(xì)胞代謝。雖然大量研究解析了 MYC在腫瘤中的生物學(xué)功能,也有眾多靶基因陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)。但是仍然存在很多機(jī)制沒有闡明。2015年Nature文章報(bào)道MYC介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞依賴剪接體生存,MYC與剪接因子BUD31存在合成致死效應(yīng),靶向剪接體可有效殺死MYC介導(dǎo)的腫瘤,但是MYC依賴剪接體生存的機(jī)制在該文章中并沒有闡明。本課題論證了 MYC能夠通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控致癌剪接因子的表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞存活。剪接是指pre-mRNA內(nèi)含子被剪掉,外顯子被拼接的過程。其發(fā)生在細(xì)胞核中,由snRNP識(shí)別pre-mRNA剪接位點(diǎn),經(jīng)兩次轉(zhuǎn)... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１Ａ）；通過ＧＥＰＩＡ２網(wǎng)站對(duì)ＭＹＣ的預(yù)后進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)ＭＹＣ高表??達(dá)的高級(jí)別漿液性卵巢癌患者預(yù)后較差（圖１Ｂ）

．?＿＿■＿???ｉｍ?—．??■■?ｓ?？？？■．■．＿．■■?＿＿＇．ｖ．＇．－＿ｔ．，?．，．－１．＇．．＇?１?■■■．＿■■？■＂??猶．＿?‘；，■？．：？?－＇＊：：■＊??ＭＶＣ＇?ｊ??■＊＝■４＊?ｍ??ＰＯＬＲ２Ａ?ｊ！??－：．全?＿＿？■？？，■＊？氣《４?■—?，?Ｉ?？？？?■?Ａ?ｉ?１?．＿■＿＿＿?！蠱？?ｍ?－ｊｍｍＪＫｍＪｋｍｊｋ＿＊?＿■？?ｍ?ｍ？ｍ?？＿？??？＿？???圖１：?ＭＹＣ在ＨＧＳＯＣ中拷貝數(shù)增加并與剪接因子關(guān)系密切??Ａ．?ＴＣＧＡ數(shù)據(jù)庫(kù)分析卵巢癌患者中ＭＹＣ表達(dá)量的遺傳變化。Ｂ．?ＭＹＣ轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)??行ＧＯ分析對(duì)各項(xiàng)事件發(fā)生數(shù)量排序，其中選擇性剪接事件改變占第三位。Ｃ．ＨＧＳＯＣ中??ＭＹＣ高表達(dá)與預(yù)后不良相關(guān)。Ｄ．ＣｈＩＰ－ｓｅｑ分析預(yù)測(cè)ＭＹＣ對(duì)ＰＱＢＰ１和ＳＨＢ１有潛在調(diào)控。??２．ＭＹＣ過表達(dá)和敲低細(xì)胞系的構(gòu)建??為驗(yàn)證ＭＹＣ對(duì)剪接因子ＰＱＢＰ１和ＳＦ３Ｂ１是否存在調(diào)控作用，我們構(gòu)建了??ＭＹＣ過表達(dá)和敲低細(xì)胞系。過表達(dá)病毒載體購(gòu)買自吉?jiǎng)P公司，敲低病毒載體為??實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建。敲低細(xì)胞系的建立，從Ｓｉｇｍａ官網(wǎng)獲�。螅椋停伲眯蛄�，ＰＣＲ擴(kuò)增后??克隆到ＰＬＫＯ／Ｔｅｔ－ｏｎ載體。慢病毒的包裝使用經(jīng)典慢病毒三質(zhì)粒包裝體系，包括??—個(gè)目的質(zhì)粒ＰＬＫＯ－ｓｈ－ＭＹＣ和兩個(gè)包裝質(zhì)粒ｐｓＰＡＸ－２和ＰＭＤ２Ｇ。使用ｌｉｐｏ２０００??轉(zhuǎn)染２９３Ｔ細(xì)胞，然后４８?ｈ、７２?ｈ后收兩次病毒液，０．４５?ｐＭ濾器過濾病毒液備??用。�。�?ｍＬ病毒液感染Ａ２７８０、ＳＫＯＶ３、ＨＥＹ、ＨＯ８９１０等卵巢癌

圖４：?ＭＹＣ轉(zhuǎn)錄調(diào)控ＰＱＢＰＫ?ＳＦ３Ｂ１??


本文編號(hào)：3024355