研究背景及目的:結(jié)直腸癌是臨床中常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤。在我國(guó),其發(fā)病率居惡性腫瘤前三位。結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)受多個(gè)基因、多重步驟調(diào)控的復(fù)雜過(guò)程,其中最重要的三類基因變化為:染色體的不穩(wěn)定性、微衛(wèi)星的不穩(wěn)定和Cp G島甲基化表型（CIMP）。其中DNA甲基化作為最重要的表觀遺傳學(xué)改變之一,在惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中的作用受到越來(lái)越多的重視,尤其是基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化作為影響基因表達(dá)的機(jī)制已被廣泛研究。近來(lái),Ⅰ型血小板結(jié)合蛋白基序的解聚蛋白樣金屬蛋白酶（A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs,ADAMTS）與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系成為研究熱點(diǎn)。其中ADAMTS14基因是在我們前期研究中篩選得到的在食管癌中高甲基化的基因。而作為金屬蛋白酶,ADAMTS14在調(diào)節(jié)細(xì)胞與細(xì)胞和細(xì)胞與基質(zhì)的相互作用中至關(guān)重要。并且在以往研究中發(fā)現(xiàn),ADAMTS家族中的一些成員在多種腫瘤中表達(dá)沉默,并且其表達(dá)沉默與基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)有關(guān)。因此,我們的研究目的是檢測(cè)結(jié)直腸癌細(xì)胞中ADAMTS14啟動(dòng)子區(qū)的甲基化水平以... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)
1 引言
2 材料和方法
    2.1 儀器設(shè)備和試劑
        2.1.1 儀器設(shè)備
        2.1.2 主要生物化學(xué)試劑
        2.1.3 主要抗體
    2.2 細(xì)胞系和組織樣本
        2.2.1 細(xì)胞系
        2.2.2 組織樣本
    2.3 自配緩沖液的配制方法
        2.3.1 Western Blot10×Tris-甘氨酸電泳緩沖液的配制
        2.3.2 Western Blot轉(zhuǎn)膜緩沖液的配制
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 細(xì)胞DNA抽提
        2.4.2 基因組DNA亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化
        2.4.3 焦磷酸測(cè)序
        2.4.4 5-Aza-2’-deoxycytidine（5-Aza-d C）進(jìn)行細(xì)胞系處理
        2.4.5 細(xì)胞總RNA提�。═RIzol試劑一步法）
        2.4.6 逆轉(zhuǎn)錄與熒光定量PCR
        2.4.7 細(xì)胞的遷移侵襲實(shí)驗(yàn)
        2.4.8 CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.4.9 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        2.4.10 載體構(gòu)建
        2.4.11 質(zhì)粒抽提
        2.4.12 shRNA病毒包裝
        2.4.13 Western blot
        2.4.14 免疫組織化學(xué)
        2.4.15 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 人結(jié)直腸癌細(xì)胞中ADAMTS14 的表達(dá)及異常甲基化的研究
        3.1.1 人結(jié)直腸癌細(xì)胞系中ADAMTS14 啟動(dòng)子區(qū)甲基化情況
        3.1.2 ADAMTS14 在人結(jié)直腸癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況
    3.2 5-Aza-d C對(duì)人結(jié)直腸癌細(xì)胞ADAMTS14 的表達(dá)及甲基化的影響
    3.3 ADAMTS14 在結(jié)直腸癌細(xì)胞中的功能研究
        3.3.1 ADAMTS14 過(guò)表達(dá)載體和sh RNA載體的驗(yàn)證
        3.3.2 ADAMTS14 促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的侵襲遷移
        3.3.3 ADAMTS14 對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖與凋亡的影響
    3.4 結(jié)直腸癌組織中ADAMTS14 的表達(dá)情況與預(yù)后的研究
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 ADAMTS家族在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用及研究進(jìn)展
    綜述參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)歷及在讀期間所取得科研成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2015年中國(guó)惡性腫瘤流行情況分析[J]. 鄭榮壽,孫可欣,張思維,曾紅梅,鄒小農(nóng),陳茹,顧秀瑛,魏文強(qiáng),赫捷.  中華腫瘤雜志. 2019 (01)
[2]ADAMTS14基因單核苷酸多態(tài)性與漢族女性顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎的相關(guān)性研究[J]. 王丹丹,甘業(yè)華,馬緒臣,孟娟紅.  北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2018(02)
[3]DNA甲基化檢測(cè)方法及其在腫瘤研究中的應(yīng)用[J]. 林潔,朱益民,來(lái)茂德.  中華病理學(xué)雜志. 2009 (02)



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