人的ARID1A是SWI/SNF家族的一員,在調(diào)節(jié)染色體結(jié)構(gòu)和基因的表達(dá)方面發(fā)揮著重要作用。ARID1A的抑癌作用已經(jīng)被明確確定,其轉(zhuǎn)錄活性在很多腫瘤中都被抑制。在腫瘤細(xì)胞中,ARID1A表達(dá)的下調(diào)可能與基因組缺失、DNA甲基化和microRNA介導(dǎo)的抑制作用有關(guān),能否將恢復(fù)ARID1A的轉(zhuǎn)錄活性作為抗癌藥物的研制思路有待證實(shí)。G-四鏈體結(jié)構(gòu)廣泛存在于基因組中,對染色體DNA復(fù)制和RNA剪切及其穩(wěn)定性等方面有重要的調(diào)節(jié)作用,而靶向存在于啟動子區(qū)域G-四鏈體結(jié)構(gòu)治療疾病的研究并不多,還有很大的研究空間。在本研究中我們利用多種實(shí)驗(yàn)方法證實(shí)了在ARID1A啟動子區(qū)域形成了 G-四鏈體結(jié)構(gòu),同時發(fā)現(xiàn)G-四鏈體結(jié)構(gòu)可以激活A(yù)RID1A基因轉(zhuǎn)錄,以此提供了一種治療癌癥的思路。具體研究結(jié)果如下:1.利用QGRS Mapper方法預(yù)測到人的ARID1A啟動子區(qū)域可能存在G-四鏈體結(jié)構(gòu);根據(jù)ARID1A啟動子可能形成G-四鏈體區(qū)域的序列合成寡核苷酸,通過圓二色性以及熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)評估了對這些寡核苷酸形成G-四鏈體的影響,利用非變性聚丙烯凝膠電泳,驗(yàn)證不同條件下這些寡核苷酸形成結(jié)構(gòu)差異:染色質(zhì)免疫共沉淀證實(shí)... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１?Ｇ－四鏈體的模式圖［７４】??

?復(fù)制過程中發(fā)生的錯誤。當(dāng)解旋酶的作用失調(diào)時，基因組編碼信息的完整性會受到影??響，這不僅會導(dǎo)致復(fù)制或者轉(zhuǎn)錄發(fā)生錯誤，還會引起細(xì)胞衰老、死亡、癌變、組織水平??的老化以及神經(jīng)相關(guān)的病變［７４］。某些轉(zhuǎn)朵丨Ａ：］子的結(jié)合位點(diǎn)與形成Ｇ－四鏈體區(qū)域的部分??序列相同，因此這些調(diào)控因子對基因表達(dá)的調(diào)節(jié)會受到啟動子Ｋ域是否形成Ｇ－四鏈體??結(jié)構(gòu)的影響，這些Ｇ－四鏈體結(jié)構(gòu)對基因的調(diào)節(jié)有可能是促進(jìn)作用（作為轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)??合位點(diǎn)）也有可能是抑制作用（作為一種屏障或者破壞雙鏈結(jié)合位點(diǎn)）［１（）７］（圖１－２）。??Ａ?＇⑶?８??Ｉ?ｖ?１１?ｔＴｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔ?ｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔｔ?＇ｉＶＶＷＶｉｉ?ｒＴＴ＾＾＾＾ＴＴＴｍ??ｔｌｌｌｌｌｉｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｉｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｉｌｌｌｌｌｌｌｌ?１?ｉ?金?Ｉ?１?Ｉ?１?Ｉ?Ｉ?Ｉ?皇?Ｉ?Ｉ?１?Ｉ?Ｉ?Ｉ?１?１?１?Ｉ?Ｉ?１?Ｉ?Ｉ?１?１?童?Ｉ?ｉ?ｉ?里?Ｉ?Ｉ??Ｉｔｊ??ｃ?ｍ．?ｄ??１?＇?＊?＊?ｋ?＇?＇?１?＇?＇?＇?１?？?ｉ?？?１?＇?＇?、’?ｐＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴ?ｉＷＩｉｉＨｉｉｉＩＩｉｉＩｉｉＴ?＾ＴＴ?．ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴ??ｌｉｉｌｌｌｉｉ?里?１魚量．１１１１１皇１息１?魚魚？？？ｔｉｉｉｉ?皇?ｉｉｉｉｉｉ??圖１－２?ＤＮＡ的Ｇ－四鏈體結(jié)構(gòu)在ＲＮＡ聚合酶參與轉(zhuǎn)錄過程中可能＃在的作用［７４】??Ａ．?［？１１斷轉(zhuǎn)泌（橙色表�。遥危辆酆厦福�。Ｂ．促進(jìn)轉(zhuǎn)珙。Ｃ．激活轉(zhuǎn)氽（藍(lán)色表示與Ｇ－四鏈體結(jié)合的轉(zhuǎn)??錄因子）。Ｄ．轉(zhuǎn)錄抑制：Ｇ－四鏈體結(jié)構(gòu)ｉｉｆ以結(jié)合轉(zhuǎn)氽抑制蛋白（綠色）

植物的同源結(jié)構(gòu)一鋅指結(jié)構(gòu)域，并且都是作為??核小體重塑以及組蛋白脫乙酰酶復(fù)合物中的亞基發(fā)揮作用的［１１４，?１１６］。而第三個亞科包括??ＣＨＤ５、ＣＨＤ６、ＣＨＤ７、ＣＨＤ８和ＣＨＤ９［Ｕ１］。ＣＨＤ家族的大多數(shù)基因在人類組織中廣??泛表達(dá)，但是這里只有ＣＨＤ５的表達(dá)主要局限于神經(jīng)元中［１１４＿＿。??１．４．２．２?ＣＨＤ２與ＣＨＤ８的生物功能??ＣＨＤ２作為一種ＡＴＰ依賴性酶，可以重塑染色質(zhì)結(jié)構(gòu)［１１７］。ＣＨＤ２由Ｎ端的兩個功??能域、一個ＡＴＰ結(jié)合域和一個ＤＮＡ結(jié)合域構(gòu)成（圖１－３）。通過研宄發(fā)現(xiàn)ＣＨＤ２的Ｎ－??末端區(qū)域是ＣＨＤ２發(fā)揮染色質(zhì)重塑功能的必須結(jié)構(gòu)域。ＣＨＤ２現(xiàn)在己經(jīng)廣泛被用作癲癇??病基因鑒定的靶基因，尤其是兒童期嚴(yán)重癲癇病的發(fā)作與ＣＨＤ２基因缺失密不可分??［１１８］。含有ＣＨＤ２基因突變的純合子小鼠會死亡，雜合子小鼠的存活率也會顯著的降低??［１１９］。利用基因敲除技術(shù)產(chǎn)生的ＣＨＤ２基因雜合的斑馬魚會發(fā)生癲癇并且生長發(fā)育遲緩??［１２＜）］。在人類中，ＣＨＤ２雜合的患者有多種發(fā)育缺陷［１２１］。對人成肌細(xì)胞中ＣＨＤ２的研宄??發(fā)現(xiàn)，如果ＣＨＤ２缺失會降低成肌細(xì)胞向肌細(xì)胞的轉(zhuǎn)化過程ｔ１２２Ｌ這些發(fā)現(xiàn)表明了??ＣＨＤ２在人和動物的生長發(fā)育過程中非常重要。??１?１８２８??Ｃｈｒｏｍｏｄｏｍａｉｎｓ?ＡＴＰ－ｈｅｌｉｃａｓｅ?ｄｏｍａｉｎ??ＤＥＤＸ－ｈｅｌｉｃａｓｅ?ｄｏｍａｉｎ??圖１－３?ＣＨＤ２蛋白結(jié)構(gòu)示意圖［１２３１??兩個染色質(zhì)結(jié)構(gòu)域（Ｃｈｒｏｍｏｄｏｍａｉｎｓ），兩個解旋酶結(jié)合區(qū)（ＡＴＰ－ｈｅｌｉｃａｓｅ?ｄｏｍａｉｎ和ＤＥＤＸ－ｈｅｌｉｃａｓｅ??ｄｏｍａｉｎ），?一個Ｄ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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