目的:乳腺癌是女性中發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤,乳腺癌耐藥仍是臨床治療中面臨的棘手難題。人表皮生長因子受體2（Human Epidermalgrowth Factor Receptor-2,HER2）基因在20-30%乳腺癌病人中呈現(xiàn)高水平表達(dá),其表達(dá)水平與乳腺癌不良預(yù)后存在高度相關(guān)。拉帕替尼（Laptinib）是靶向HER2的乳腺癌主要治療藥物之一,但Laptinib臨床耐藥嚴(yán)重,影響其治療效果。大量文獻(xiàn)研究表明:小調(diào)控RNA（short regulatory RNA,srRNA）在腫瘤細(xì)胞耐藥中起重要調(diào)控作用。為此,我們擬構(gòu)建全基因組的srRNA文庫,并通過該文庫快速獲得Laptinib耐藥的細(xì)胞模型,并據(jù)此探索HER2陽性乳腺癌Laptinib耐藥分子機(jī)制,以期尋找干預(yù)靶點(diǎn)。方法:以逆轉(zhuǎn)錄病毒骨架pSOKD質(zhì)粒為載體,利用U6/H1雙啟動子精確控制系統(tǒng),在兩啟動子中間將19個(gè)隨機(jī)堿（N19）基采用Gibson Assembly方法組裝構(gòu)建srRNA文庫。該文庫經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝、感染HER2基因高表達(dá)的人SKBR3乳腺癌細(xì)胞,再通過藥物篩選即可建立耐Laptinib的乳腺癌細(xì)胞... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
英漢縮略語名詞對照
摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 利用GibsonAssembly方法建立小調(diào)控RNA（srRNA）文庫
    1 材料和方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第二部分 基于逆轉(zhuǎn)錄病毒系統(tǒng)的小調(diào)控RNA文庫的包裝和SKBR3目的細(xì)胞的感染、篩選
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第三部分 SKBR3LN19細(xì)胞N19富集片段的收集、測序和單片段驗(yàn)證
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第四部分 SKBR3LN19細(xì)胞Laptinib耐藥機(jī)制的初步探討
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第五部分 基于不穩(wěn)定熒光蛋白構(gòu)建的高通量lncRNAs負(fù)向篩選調(diào)節(jié)器
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀博士學(xué)位期間撰寫的學(xué)術(shù)論文和已投稿論文



本文編號：3017475