目的:通過體外培養(yǎng)KATOⅢ人胃硬癌細(xì)胞株,同時利用不同的熱療溫度處理KATOⅢ胃硬癌細(xì)胞株,模擬腫瘤熱療（41℃-43℃）環(huán)境,分別觀察在37℃、40℃、41℃、42℃、43℃的環(huán)境以及有無曲尼司特作用下,癌細(xì)胞的增生及細(xì)胞中TGF-β mRNA表達(dá)水平的變化,從而為熱療及曲尼司特治療胃硬癌尋找到更具針對性的實驗依據(jù)和臨床治療提供新的思路。方法:取10塊無菌塑料6孔板分為實驗組和對照組,每組各5塊孔板,并在每組孔板蓋上依次標(biāo)明37℃、40℃、41℃、42℃和43℃,然后將KATOⅢ人胃硬癌細(xì)胞懸液按照2.0 mL/孔,5.0×10 4 cell/mL的密度分別接種10塊6孔板上的規(guī)定孔中,按照（2單位體積細(xì)胞液:1單位體積曲尼司特）比例分別在實驗組孔板中加入1mL濃度為1.0mmol/L的Tranilast（曲尼司特）溶液,對照組分別加入1mL IMDM完全培養(yǎng)液,分別置于37℃、40℃、41℃、42℃和43℃,體積分?jǐn)?shù)為0.05%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6小時后。最后分別采用Luna細(xì)胞計數(shù)器和RT-PCR法檢測KATOⅢ人胃硬癌細(xì)胞在有無曲尼司特干預(yù)下不同溫度培養(yǎng)時增殖情況和TGF-... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１顯微鏡下ＫＡＴＯｉｎ胃硬癌細(xì)胞形態(tài)觀（１０Ｍ０）??

０．?３０ｇ瓊脂糖，３０ｍＬ的１＊ＴＡＥ），充分加熱使得??瓊脂糖溶解，待冷卻至６０°Ｃ時，將０．５?ｕＬ的核酸染料加入其中，充分混勻后進(jìn)行倒膠??操作，注意操作輕柔；??２．往各已經(jīng)提取好的ＲＮＡ中各分別�。担酰蹋遥危寥芤海矗保�?５的比例與６＊ｌｏａｄｉｎｇｂｕｆｆｅｒ??充分混勻，置于１４０Ｖ恒壓條件下進(jìn)行ＲＮＡ電泳操作，待溴酚藍(lán)向前遷移至總長２／５處時??停止電泳操作，并且在凝膠成像的系統(tǒng)下觀察電泳圖像。??條帶由上至下依次為２８ｓ，１８ｓ，５ｓ。??對照組?實驗組??圖２總ＲＮＡ的瓊脂糖凝膠電泳圖??２．?２．?４．?３?ＲＮＡ?逆轉(zhuǎn)錄??以總ｍＲＮＡ為模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄ｃＤＮＡ操作，具體反應(yīng)體系組成見表３：??１４??

?南華大學(xué)碩士學(xué)位論文???表５?ｑＰＣＲ熒光定量反應(yīng)體系??試劑?體積??Ｔｅｍｐｌａｔｅ?（反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物）?２?ｕＬ??Ｐｒｉｍｅｒ?Ａ?（１０ｕＭ）?１?ｕＬ??Ｐｒｉｍｅｒ?Ｂ?（ｌＯｕＭ）?１?ｕＬ??ｄｄＨ２０?１１?ｕＬ??２Ｘ?ＳＹＢＧＲＥＥＮ?ＰＣＲ?Ｍａｓｔｅｒ?Ｍｉｘ?１５?ｕＬ??（３）定量ＰＣＲ擴(kuò)增程序：??Ｈ－ａｃｔｉｎ為內(nèi)參照，反應(yīng)體系為３０ｕＬ，ＰＣＲ反應(yīng)條件為：９５°Ｃ預(yù)變性ｌＯｍｉｎ、??９５°Ｃ變性?１５ｓ、６０°Ｃ退火?１０ｓ、７２°Ｃ延伸?３０ｓ，共?４０?個循環(huán)。（ＴＧＦ－Ｐ?和?ａｃｔｉｎ?擴(kuò)??增曲線見下圖）??ｒｊｆｅｓ??ｍ－??１欲？??１Ｍ０－??炊－??＾?６９３－??＿．．一??．?Ｉ，?Ｉ?，ｎ?０??？誠＂?ｉ?ｉｉ?｜?１?ｉ?ｉ?１?１?ｌ?１?ｌ?ｉ?｜?ｉ?Ｉ?ｉ?＇?Ｉ?ｉｔｉ?Ｉ?｜?Ｔ?ｉ?１?１?｜?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?Ｉ?ｔ?ｉ?ｒ?ｉ?ｉ??１５?１０?１５?２０?２５?３０?３５?４３??Ｉ？??「Ｗ??圖３?ＴＧＦ－Ｐ擴(kuò)增曲線圖??１６??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3003200