發(fā)布時間：2021-01-26 17:49

　　目的探討下調(diào)SGK3表達后食管鱗癌細(xì)胞對PI3K抑制劑GDC-0941敏感性的變化及分子機制。方法一、GDC-0941對食管鱗癌細(xì)胞增殖及PI3K、SGK3蛋白表達的影響CCK-8法檢測PI3K抑制劑GDC-0941對食管鱗癌細(xì)胞增殖的影響,Western blot檢測GDC-0941長時間處理食管鱗癌細(xì)胞對PI3K、SGK3相關(guān)蛋白表達的影響。二、SGK3表達水平對GDC-0941抗食管鱗癌作用的影響1.SGK3-shRNA慢病毒載體感染EC9706和ECa109細(xì)胞,嘌呤霉素篩選穩(wěn)定表達株,并挑取單克隆,Western blot檢測感染效果,將下調(diào)效率最高的細(xì)胞用于后續(xù)實驗。2.CCK-8、克隆形成、劃痕實驗、細(xì)胞周期實驗檢測下調(diào)SGK3后食管鱗癌細(xì)胞對GDC-0941敏感性的變化。三、SGK3表達水平對GDC-0941抗食管鱗癌作用影響的分子機制1.GDC-0941處理篩選的食管鱗癌細(xì)胞72 h,提取細(xì)胞總蛋白,Western blot檢測GSK3β和β-catenin相關(guān)蛋白的表達。2.GDC-0941處理篩選的及未轉(zhuǎn)染的食管鱗癌細(xì)胞0h、3 h、24 h、72 h和120 h... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴ０Ｒ和ＥＲＫ信號通路??９??

?第一章ＧＤＣ－０９４１對食管鱗癌細(xì)胞增殖及Ｈ３Ｋ、ＳＧＫ３蛋白表達的影響???３結(jié)果??３．１?ＧＤＣ－０９４１對食管鱗癌細(xì)胞增殖的影響??不同濃度ＧＤＣ－０９４１處理ＥＣ９７０６和ＥＣａｌ０９細(xì)胞２４?ｈ和４８?ｈ，?ＣＣＫ－８法檢??測ＧＤＣ－０９４１對細(xì)胞增殖的影響。如圖１．２所示，隨ＧＤＣ－０９４１濃度增力Ｐ，兩株??細(xì)胞的細(xì)胞活力均明顯下降，證明ＧＤＣ－０９４１對ＥＣ９７０６和ＥＣａｌ０９細(xì)胞增殖具??有抑制作用，ＧＤＣ－０９４１作用ＥＣ９７０６細(xì)胞２４ｈ的ＩＣ５〇值為１８．６７４±１．２７ｐＭ，作??用?４８ｈ?的?ＩＣ５Ｇ?值為?１１．０５±１．０４ｎＭ；作用?ＥＣａｌ０９?細(xì)胞?２４ｈ?的?ＩＣ５〇?值為?１７．９６±１．２５??ＨＭ，作用?４８ｈ?的?ＩＣ５０?值為?８．０７±０＿９１?卜ｉＭ。??Ａ?Ｂ??１２０］?ＥＣ９７０６?１２０－，?ＥＣａｌ０９?女?４８?ｈ??１００－?＋?４８ｈ?１００－?－ａ－??｜?８〇＿?＊?心?｜?８。－??�。�?�。�??２０－?、?２０－??Ｏ－＾?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?１—?〇Ｊ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ??０?１?５?１０?２０?５０?０?１?５?１０?２０?５０??Ｔｈｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＧＤＣ－０９４１?（｜ｉＭ）?Ｔｈｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＧＤＣ－０９４１?（ｐＭ）??圖１．２?ＧＤＣ－０９４１對食管鱗癌ＥＣ９７０６?（Ａ）和ＥＣａｌ０９?（Ｂ）細(xì)胞增殖的影響??３．２?ＧＤＣ－０９４１對食管鱗癌細(xì)胞ＰＩ３Ｋ和ＳＧＫ３相關(guān)蛋白表達的影響??ＧＤＣ－０９４

?｜?，?，?［ｉ?ＧＤＣ－０９４１?２４?ｈ??ｇ?ｈ?□?ＧＤＣ－０９４１?７２?ｈ?ｉ?＿?Ｈ?圈?ＧＤＣ－０９４１?７２?ｈ??ｇ?國?ＧＤＣ－０９４１?１２０?ｈ?…?？吾?Ｅ３?ＧＤＣ－０９４１?１２０?ｈ??Ｏ?“?＿Ｔ?Ｐ??ｉｊｌｌｌｌｉ?ｎｎｉ，ｌ?ｎｊｌｌｌＪｌｌｌｌ，ｌｌ?ｎＪｌｉ?＿．ｉｉｉ??ＰＩ３Ｋ?ＳＧＫ３?ｐ－ＳＧＫ３（Ｔｈｒ３２０）?ＰＩ３Ｋ?ＳＧＫ３?ｐ－ＳＧＫ３（Ｔｈｒ３２０）??ＥＣ９７０６?ＥＣａｌ０９??圖１．３?ＧＤＣ－０９４１處理食管鱗癌細(xì)胞ＥＣ９７０６和ＥＣａｌ０９不同時間，Ｐ１３Ｋ、ＳＧＫ３和??Ｐ－ＳＧＫ３?蛋白水平的變化（與?Ｃｏｎｔｒｏｌ?組相比，＊Ｐ＜０．０５，?＃Ｐ＜０．０１，＇＾ｉ＾Ｏ．ＯＯｌ）??４討論??ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲ信號通路己被證明在食管鱗癌中是高度激活的，針對該通路??的抑制劑一直廣受研宄者的關(guān)注［１９］。ＰＩ３Ｋ作為該通路中關(guān)鍵的效應(yīng)因子，在腫??瘤的發(fā)生發(fā)展中也起著很關(guān)鍵的促進作用［２９，３Ｇ］。ＧＤＣ－０９４１是一種全ＰＩ３Ｋ抑制劑，??己被證明在乳腺癌中有很好的的抑制增殖效果，且在晚期非鱗狀非小細(xì)胞肺癌??患者中，體現(xiàn)良好的耐受性和安全性［６７］。然而，目前通路抑制劑的耐藥性一直是??一個亟待解決的問題，有研宂證明ＰＩ３Ｋ抑制劑的耐藥性與其他通路或致癌因子??的代償性激活有關(guān)，如應(yīng)用一類ＰＩ３Ｋ抑制劑會引起ＲＡＳ／ＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫ、ＡＸＬ、??２２??


本文編號：3001556