目的:在課題組前期工作基礎(chǔ)上,檢測(cè)TGF-β1對(duì)卵巢癌細(xì)胞自噬和線粒體自噬的影響;構(gòu)建Lewis y抗原過(guò)表達(dá)或低表達(dá)的卵巢癌細(xì)胞系,檢測(cè)TGF-β1的巖藻糖基化修飾對(duì)卵巢癌自噬和線粒體自噬的影響,并對(duì)其調(diào)控機(jī)制進(jìn)行初步探討,為卵巢癌的治療尋找新的靶點(diǎn)提高理論依據(jù)。研究方法:1、通過(guò)Western blot檢測(cè)不同濃度和時(shí)間點(diǎn)的TGF-β1作用下卵巢癌細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的變化。通過(guò)免疫熒光檢測(cè)TGF-β1處理后卵巢癌細(xì)胞中LC3變化情況。添加自噬抑制劑氯喹（Chloroquine,CQ）阻斷自噬流,通過(guò)Western blot、免疫熒光等方法觀察TGF-β1作用后卵巢癌細(xì)胞自噬流的變化情況。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染雙熒光標(biāo)記的LC3腺病毒后檢測(cè)TGF-β1作用下卵巢癌細(xì)胞自噬流的變化情況。通過(guò)TMRM染色檢測(cè)TGF-β1作用前后卵巢癌細(xì)胞線粒體膜電位變化情況。繼而通過(guò)Western blot檢測(cè)不同濃度和時(shí)間點(diǎn)TGF-β1作用下對(duì)卵巢癌細(xì)胞線粒體自噬發(fā)生的影響。通過(guò)免疫熒光檢測(cè)TGF-β1作用下線粒體自噬相關(guān)蛋白PINK1的表達(dá)情況。通過(guò)Annexin V/FITC流式方法檢測(cè)不同濃度TGF-β1作... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：93 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分 TGF-β1對(duì)卵巢癌細(xì)胞線粒體自噬的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 細(xì)胞系
            2.1.2 主要材料
            2.1.3 主要儀器
        2.2 方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 Western blotting檢測(cè)TGF-β1 處理前后細(xì)胞自噬及線粒體自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平
            2.2.3 免疫細(xì)胞化學(xué)
            2.2.4 線粒體膜電位
            2.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 TGF-β1對(duì)卵巢癌細(xì)胞自噬的影響
        3.2 TGF-β1對(duì)卵巢癌細(xì)胞自噬流的影響
        3.3 TGF-β1對(duì)卵巢癌細(xì)胞線粒體膜電位的影響
        3.4 TGF-β1對(duì)卵巢癌細(xì)胞線粒體自噬的影響
        3.5 TGF-β1對(duì)卵巢癌細(xì)胞凋亡的影響
        3.6 添加自噬抑制劑后TGF-β1對(duì)卵巢癌細(xì)胞凋亡的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 TGF-β1的巖藻糖基化修飾對(duì)卵巢癌細(xì)胞線粒體自噬的影響
    6 前言
    7 材料與方法
        7.1 材料
            7.1.1 細(xì)胞系
            7.1.2 主要材料
            7.1.3 主要儀器
        7.2 方法
            7.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            7.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的構(gòu)建
            7.2.3 慢病毒感染構(gòu)建穩(wěn)定低表達(dá)細(xì)胞系
            7.2.4 Westernblotting檢測(cè)TGF-β1的Lewisy抗原修飾對(duì)細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白的影響
            7.2.5 Westernblotting檢測(cè)TGF-β1的Lewisy抗原修飾對(duì)線粒體膜電位的影響
            7.2.6 Westernblotting檢測(cè)TGF-β1的Lewisy抗原修飾對(duì)細(xì)胞線粒體自噬相關(guān)蛋白的影響
            7.2.7 流式檢測(cè)TGF-β1的Lewisy抗原修飾對(duì)細(xì)胞凋亡的影響
            7.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    8 結(jié)果
        8.1 轉(zhuǎn)染FUT1 基因前后Lewisy和 TGF-β1 變化情況
        8.2 TGF-β1的Lewis y抗原修飾對(duì)卵巢癌細(xì)胞自噬的影響
        8.3 TGF-β1的Lewis y抗原修飾對(duì)細(xì)胞線粒體膜電位的影響
        8.4 TGF-β1的Lewis y抗原修飾對(duì)細(xì)胞線粒體自噬的影響
        8.5 TGF-β1的Lewis y抗原修飾對(duì)卵巢癌細(xì)胞凋亡的影響
    9 討論
    10 結(jié)論
第三部分 TGF-β1巖藻糖基化修飾對(duì)卵巢癌細(xì)胞線粒體自噬影響的機(jī)制
    11 前言
    12 材料與方法
        12.1 材料
            12.1.1 細(xì)胞系
            12.1.2 主要材料
            12.1.3 主要儀器
        12.2 方法
            12.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            12.2.2 Western blotting檢測(cè)TGF-β1對(duì)TAK1 的作用
            12.2.3 干擾TAK1卵巢癌細(xì)胞系
            12.2.4 干擾TAK1對(duì)卵巢癌細(xì)胞自噬和線粒體自噬的影響
            12.2.5 Lewisy抗原對(duì)干擾TAK1 對(duì)卵巢癌細(xì)胞自噬和線粒體自噬的影響
            12.2.6 干擾TAK1對(duì)MAPK通路及PI3K/Akt通路的影響
            12.2.7 添加MEK及 PI3K通路抑制劑對(duì)卵巢癌細(xì)胞自噬和線粒體自噬的影響
            12.2.8 TGF-β1的Lewis y抗原修飾對(duì)mTOR通路的影響
            12.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    13 結(jié)果
        13.1 TGF-β1對(duì)TAK1 表達(dá)的影響
        13.2 干擾TAK1對(duì)卵巢癌細(xì)胞自噬及線粒體自噬的影響
        13.3 Lewisy抗原修飾下干擾TAK1 對(duì)卵巢癌細(xì)胞自噬及線粒體自噬的影響
        13.4 干擾TAK1 后對(duì)MAPK通路及PI3K/Akt通路的影響
        13.5 添加MEK和 PI3K通路抑制劑對(duì)自噬和線粒體自噬的影響
        13.6 TGF-β1的Lewis y抗原修飾對(duì)mTOR通路的影響
    14 討論
    15 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]PINK1在黏液性上皮性卵巢腫瘤中表達(dá)的研究[J]. 劉川,王華芹,王慧敏,胡珍華,英煥春,林蓓.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2014(02)



本文編號(hào)：3000681