發(fā)布時(shí)間：2021-01-25 22:47

　　[目 的]研究C/EBP δ過表達(dá)、干擾對(duì)人結(jié)直腸癌體外細(xì)胞增殖以及裸鼠體內(nèi)種植瘤的生長(zhǎng)情況,腫瘤體積及瘤體重量的影響。[方 法]1.構(gòu)建含C/EBP-δ過表達(dá)及C/EBP-δ干擾的慢病毒表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染人結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞系,熒光顯微鏡觀察熒光是否表達(dá),以明確是否轉(zhuǎn)染成功。2.將C/EBP-δ過表達(dá)及C/EBP-δ干擾的慢病毒載體轉(zhuǎn)染的人結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞系,運(yùn)用CCK8試劑盒檢測(cè)C/EBP-δ過表達(dá)和干擾慢病毒載體對(duì)細(xì)胞增殖的影響。3.將C/EBP-δ過表達(dá)及C/EBP-δ干擾的慢病毒載體轉(zhuǎn)染的人結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞系,建立裸鼠皮下成瘤的模型,動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)C/EBP-δ在裸鼠體內(nèi)對(duì)腫瘤生長(zhǎng)情況、腫瘤體積及瘤體重量的影響。[結(jié) 果]1.與正常對(duì)照組比較,過表達(dá)空載慢病毒轉(zhuǎn)染組、干擾空載慢病毒轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖無(wú)明顯變化;與過表達(dá)空載慢病毒轉(zhuǎn)染組比較,C/EBP-δ 過表達(dá)慢病毒轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖能力降低;與干擾空載慢病毒轉(zhuǎn)染組比較,C/EBP-δ干擾慢病毒轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖能力增加。2.與正常對(duì)照組比較,過表達(dá)空載慢病毒轉(zhuǎn)染組、干擾空載慢病毒轉(zhuǎn)染組細(xì)胞成瘤體積及重量均無(wú)明顯變化;與過表達(dá)空載... 

【文章來(lái)源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁(yè)數(shù)】：46 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．?３．１皮下瘤體體積動(dòng)態(tài)生長(zhǎng)曲線圖??

聚體，進(jìn)而行使ＤＮＡ結(jié)合功能。但是Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ的ＤＮＡ結(jié)合功能域中堿性氨基酸區(qū)??缺少一段１１個(gè)氨基酸的堿性多肽，其結(jié)合ＤＮＡ的能力較弱，其ＤＮＡ結(jié)合能力相??較其他Ｃ／ＥＢＰ家族蛋白，依次為Ｃ／ＥＢＰ?Ｐ?＞Ｃ／ＥＢＰ?ａ?＞Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ。Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ迄今己??知僅有的一個(gè)全長(zhǎng)蛋白質(zhì)類型，Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ的Ｎ端相較于其他Ｃ／ＥＢＰ成員僅表現(xiàn)出??＜２０％的序列同源性，而且Ｃ／ＥＢＰＳ具有明確的反式轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域，因此Ｃ／ＥＢＰ??Ｓ的大多數(shù)靶點(diǎn)基因的啟動(dòng)子被Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ所激活。圖１展示了?Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ的蛋白質(zhì)??結(jié)構(gòu)，并突出了與其他蛋白因子之間相互作用，即被內(nèi)源性蛋白質(zhì)所識(shí)別，而且??靶點(diǎn)基因可以通過Ｃ／ＥＢＰＳ反式轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域激活而實(shí)現(xiàn)。（圖１）??ＦＢＸＷ７結(jié)合域?結(jié)合域??—?ＩＰ０４?Ｃ／ＥＢＰｓ??能區(qū)域?Ｉ?卜鏈?一??ＳＩＡＨ２結(jié)合域??圖１?Ｃ／ＥＢＰＳ蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域及映射到Ｃ／ＥＢＰＳ結(jié)構(gòu)域的相互作用因子，以及那些被證實(shí)的??存在相互作用的內(nèi)源性蛋白因子己經(jīng)包含在這個(gè)圖中：ＳＷＨ２，?ＦＢＸＷ７，?ＦＡＮＣＤ２．?ＩＰ０４。??２?Ｃ／ＥＢＰ?６的生物學(xué)功能??Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ和Ｃ／ＥＢＰ家族的其他成員一樣，以其獨(dú)特的方式影響著生物信號(hào)的??傳導(dǎo)。Ｃ／ＥＢＰＳ通過與其他Ｃ／ＥＢＰ家族成員以及其他含ｂＺｉｐ蛋白如Ｆｏｓ，?Ｊｕｎ和??ｃＡＭＰ應(yīng)答元件結(jié)合蛋白（ＣＲＥＢ）形成同源或異源二聚體來(lái)影響細(xì)胞變化ｈ。Ｃ／ＥＢＰ??５在細(xì)胞內(nèi)形成多種同源和異源二聚體，從而大大增加了其靶基因的多樣性。??Ｃ／ＥＢＰＳ長(zhǎng)期以極低量存在于各種細(xì)胞中，有時(shí)甚至無(wú)法檢測(cè)到，由于其可被許??多刺激誘導(dǎo)而進(jìn)一步增多

以ＳＩＡＨ２依賴性方式聚泛素化，并且Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ的Ｋ１２０Ａ殘基是響應(yīng)Ｓｒｃ／ＳＩＡＨ２信??號(hào)傳導(dǎo)的聚泛素化和導(dǎo)致Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ降解所必需的，其中保守氨基酸Ａ１３７和Ｖ１３９??是Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ與ＳＩＡＨ２相互作用的結(jié)構(gòu)域。目前僅在Ｓａｒｋａｒ的研究證實(shí)Ｓｒｃ激酶??通過ＳＩＡＨ２依賴性地下調(diào)Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ蛋白表達(dá)，這有助于腫瘤細(xì)胞中ｃｙｃｌｉｎ?Ｄ１蛋??白表達(dá)。這似乎從側(cè)面證實(shí)了?Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ作為腫瘤抑制因子，下調(diào)ｃｙｃｌｉｎ?Ｄ１的表??達(dá)，進(jìn)而抑制細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化及癌變（圖２）。目前在多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)了?ｃｙｃｌｉｎＤｌ??基因過表達(dá)和基因擴(kuò)增，包括口腔癌Ｍ＇膀胱癌１５、甲狀旁腺腫瘤？等。??ＳＫＩ６０Ｂ??丄??一一以?Ｕｂ?ｌｏｓ－??０／ＥＢＰ＜３?Ｏ／ＥＢＲｃＳ??Ｘ?Ｘ??Ｉ—ｅｓｓ?ｃｙｃｌｉｒｔ?Ｄ１?Ｍｏｒｏ?ｏｙｏｌｉｎ?Ｄ１??Ｌｅｓｓ?“ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ”?Ｍｏｒｅ?“ｔｒａｒ？ｓｆｏｒｒｒ？？ｄ，’??圖２?ＳＩＡＨ２與Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ相關(guān)作用示意圖??３．?２?ＳＩＡＨ２?與?ＨＩＦ－１?ａ?的關(guān)系??低氧誘導(dǎo)因子１?（ＨＩＦ－１）昏次被Ｓｅｍｅｎｚａ發(fā)現(xiàn)。ＨＩＦ－１是由對(duì)氧敏感的ａ亞??基和穩(wěn)定表達(dá)的３亞基組成的異源二聚體，其生物效應(yīng)主要是由ＨＩＦ－１?ａ亞基表??達(dá)。ＨＩＦ－ｌａ蛋白的基因位于１４號(hào)染色體（１４ｑ２１－２４），分子量為１２０ｋＤａ；?ＨＩＦ－??１?ａ主要存在于細(xì)胞核中，胞漿中的ＨＩＦ－１?ａ含量極少且?guī)缀醪话l(fā)揮生物學(xué)功能。??雖然細(xì)胞內(nèi)不斷地合成ＨＩＦ－１?ａ，但是ＨＩＦ－１?ａ由于受到脯氨酰羥化酶（ＰＨＤ）等??１７泛素原蛋白酶體系統(tǒng)的作用而


本文編號(hào)：3000026