目的：肝癌是全球發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一,廣西地區(qū)發(fā)病率更是高居中國的首位。近年來,基于腫瘤干細(xì)胞理論提出腫瘤治療新型理念并廣泛的在多種實(shí)質(zhì)細(xì)胞和動(dòng)物的體內(nèi)展開實(shí)驗(yàn)研究。越來越多的證據(jù)支持腫瘤異質(zhì)性的存在,而腫瘤干細(xì)胞為其根源。腫瘤干細(xì)胞來源于腫瘤細(xì)胞內(nèi)一群數(shù)量極少量生長(zhǎng)極度旺盛,有著強(qiáng)大的自我更新、無限增殖化分化、潛能、高度致成瘤性的細(xì)胞。此類細(xì)胞在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程以及腫瘤治療后的復(fù)發(fā)、對(duì)放化療的耐藥等方面,都起到了極為重要的作用。而在腫瘤細(xì)胞中其他的多數(shù)細(xì)胞不具備無限增殖潛能,幾乎遵循的是短暫的分化成熟以后,最終發(fā)展為死亡的過程。我們認(rèn)為肝癌細(xì)胞中也存在著這樣一群肝癌干細(xì)胞,通過無血清懸浮成球培養(yǎng),流式細(xì)胞技術(shù)能夠篩選出肝癌干細(xì)胞,并進(jìn)一步探討PI3K/AKT信號(hào)通路對(duì)肝癌細(xì)胞系MHCC97L中CD90（Thy-1）陽性亞群細(xì)胞比例及干細(xì)胞特性的影響。方法：1.采用完全培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)基加入相關(guān)生長(zhǎng)因子培養(yǎng)肝癌細(xì)胞系MHCC97L,分別進(jìn)行貼壁和懸浮成球培養(yǎng),收集相應(yīng)細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.糖原染色方法檢測(cè)細(xì)胞球來源。3.流式細(xì)胞技術(shù)（flow cytometry）檢測(cè)MHCC... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
個(gè)人簡(jiǎn)歷
摘要
ABSTRACT
前言
1 實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)主要器材
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 實(shí)驗(yàn)主要器材
2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 細(xì)胞的懸浮球培養(yǎng)及傳代
    2.2 糖原染色
    2.3 流式分選肝癌干細(xì)胞標(biāo)志物CD90的表達(dá)量
+的表達(dá)量變化">    2.4 流式細(xì)胞儀分選加入LY294002后CD90⁺的表達(dá)量變化
+亞群細(xì)胞和CD90^-亞群細(xì)胞加入LY294002后的增值率">    2.5 MTT法檢測(cè)CD90⁺亞群細(xì)胞和CD90^-亞群細(xì)胞加入LY294002后的增值率
+亞群細(xì)胞和CD90^-亞群細(xì)胞經(jīng)LY294002處理前與處理后肝癌干細(xì)胞相關(guān)干細(xì)胞基因CD90、SHP2的mRNA的表達(dá)">    2.6 qRT-PCR檢測(cè)CD90⁺亞群細(xì)胞和CD90^-亞群細(xì)胞經(jīng)LY294002處理前與處理后肝癌干細(xì)胞相關(guān)干細(xì)胞基因CD90、SHP2的mRNA的表達(dá)
+亞群細(xì)胞和CD90^-亞群細(xì)胞中CD90、SHP2、P-AKT、AKT蛋白的免疫印跡表達(dá)">    2.7 CD90⁺亞群細(xì)胞和CD90^-亞群細(xì)胞中CD90、SHP2、P-AKT、AKT蛋白的免疫印跡表達(dá)
    2.8 平板克隆實(shí)驗(yàn)
    2.9 裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)
    2.10 裸鼠移植瘤免疫組化
    2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 肝癌細(xì)胞系MHCC97L貼壁培養(yǎng)第3d和第7d的細(xì)胞形態(tài)
    3.2 肝癌細(xì)胞系MHCC97L無血清成球培養(yǎng)第3d和第8d的細(xì)胞球形態(tài)
    3.3 糖原染色結(jié)果
    3.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD90標(biāo)志物在貼壁培養(yǎng)細(xì)胞和成球培養(yǎng)細(xì)胞中的表達(dá)量
+的表達(dá)量變化">    3.5 流式細(xì)胞儀分選加入LY294002后CD90⁺的表達(dá)量變化
+亞群細(xì)胞和CD90^-群細(xì)胞增殖率的影響">    3.6 加入LY294004對(duì)CD90⁺亞群細(xì)胞和CD90^-群細(xì)胞增殖率的影響
+亞群細(xì)胞和CD90-亞群細(xì)胞中肝癌干細(xì)胞相關(guān)基因CD90、SHP2表達(dá)量,以及經(jīng)LY294002處理后表達(dá)量的變化">    3.7 CD90⁺亞群細(xì)胞和CD90-亞群細(xì)胞中肝癌干細(xì)胞相關(guān)基因CD90、SHP2表達(dá)量,以及經(jīng)LY294002處理后表達(dá)量的變化
+亞群細(xì)胞和CD90^-亞群細(xì)胞中CD90、SHP2、P-AKT、AKT蛋白表達(dá)量">    3.8 CD90⁺亞群細(xì)胞和CD90^-亞群細(xì)胞中CD90、SHP2、P-AKT、AKT蛋白表達(dá)量
    3.9 平板克隆形成能力分析
+亞群細(xì)胞和CD90^-亞群細(xì)胞裸鼠體內(nèi)成瘤情況變化">    3.10 加入LY294004前后CD90⁺亞群細(xì)胞和CD90^-亞群細(xì)胞裸鼠體內(nèi)成瘤情況變化
+亞群細(xì)胞和CD90^-亞群細(xì)胞裸鼠移植瘤CD90、SHP2、P-AKT、AKT的蛋白表達(dá)量">    3.11 加入LY294002前后CD90⁺亞群細(xì)胞和CD90^-亞群細(xì)胞裸鼠移植瘤CD90、SHP2、P-AKT、AKT的蛋白表達(dá)量
4 討論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]肝癌干細(xì)胞標(biāo)志物最新進(jìn)展[J]. 吳超,張金玲,楊盛力,趙志輝.  肝膽外科雜志. 2013(04)
[2]肝癌治療新策略:肝癌干細(xì)胞靶向干預(yù)[J]. 李曉明,羅慶,宋關(guān)斌.  生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志. 2013(04)



本文編號(hào)：2989409