發(fā)布時間：2021-01-20 16:31

　　隨著醫(yī)療水平的發(fā)展,人類的平均壽命也隨之延長,而癌癥對于人類的威脅卻日益突出,逐漸成為我國居民的第一死因。癌癥的發(fā)現(xiàn)時期對于癌癥病人的存活至關(guān)重要,因此,癌癥的早期檢測對于人類的健康至關(guān)重要。本文利用納米粒子的優(yōu)點及常用的循環(huán)放大方法的優(yōu)點來檢測癌細胞內(nèi)的活性物質(zhì)來實現(xiàn)對于癌癥的早期檢測。研究表明癌細胞和正常細胞相比,其中的miRNA和端粒酶的含量存在異常,故而可用來作為生物標記物,因此我們構(gòu)建了檢測細胞內(nèi)miRNA及端粒酶的生物傳感器,本論文具體包括三個部分:（1）我們開發(fā)了一種基于鏈置換擴增和雜交鏈式反應(yīng)的miRNA檢測新方法。利用聚合酶和切刻內(nèi)切酶的輔助作用,目標miRNA與單鏈模板DNA結(jié)合,產(chǎn)生大量可誘導(dǎo)HCR的觸發(fā)DNA。因此,設(shè)計的DNA擴增策略與SERS技術(shù)固有的高靈敏度相結(jié)合可以實現(xiàn)miRNA更低的檢測限。該方法具有靈敏度高、通用性強、分析速度快、選擇性高等特點,在生物分析和臨床生物醫(yī)學(xué)中具有檢測痕量生物分子的巨大潛力。（2）我們設(shè)計了一種新的端粒酶檢測信號放大策略。利用鏈置換反應(yīng)和催化發(fā)夾循環(huán)生成更多的MB-DNA進而連接更多的拉曼探針,起到放大信號的作用。同時,利... 

【文章來源】：青島科技大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 腫瘤及腫瘤標志物
        1.1.1 腫瘤
        1.1.2 腫瘤的治療方法
        1.1.3 腫瘤標志物
        1.1.4 常用的癌癥標志物測定要求
        1.1.5 常用的癌癥標記物分類
            1.1.5.1 癌癥蛋白質(zhì)生物標記物
            1.1.5.2 癌癥相關(guān)的酶失調(diào)
            1.1.5.3 基于核酸的生物標記物
            1.1.5.4 細胞代謝的小型化學(xué)產(chǎn)品
            1.1.5.5 直接分析癌細胞
    1.2 端粒酶
        1.2.1 端粒酶簡介
        1.2.2 端粒酶檢測進展
            1.2.2.1 體外端粒酶定量檢測
            1.2.2.2 體內(nèi)端粒酶成像檢測
    1.3 miRNA
        1.3.1 miRNA簡介
        1.3.2 miRNA檢測方法進展
            1.3.2.1 miRNA體外檢測
            1.3.2.2 miRNA成像檢測
    1.4 循環(huán)放大方法
        1.4.1 雜交鏈式反應(yīng)
        1.4.2 等溫鏈置換反應(yīng)
        1.4.3 滾環(huán)擴增
        1.4.4 酶輔助信號放大反應(yīng)
        1.4.5 催化發(fā)夾反應(yīng)
    1.5 本工作的意義及研究內(nèi)容
第二章 雙重循環(huán)放大SERS檢測miRNA
    2.1 引言
    2.2 實驗部分
        2.2.1 試劑
        2.2.2 儀器
        2.2.3 金納米粒子的制備
        2.2.4 磁珠（MB）的活化
        2.2.5 金納米粒子功能化磁珠（MB-AuNPs）的合成
        2.2.6 發(fā)卡DNA（H1）在MB-AuNPs上的固定
        2.2.7 拉曼探針的制備
        2.2.8 miRNA信號放大反應(yīng)
        2.2.9 SERS檢測
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 實驗原理
        2.3.2 金納米粒子的表征
        2.3.3 拉曼探針的紫外-可見光譜表征
        2.3.4 實驗可行性研究
        2.3.5 聚合酶和剪切酶濃度的優(yōu)化
        2.3.6 反應(yīng)溫度的優(yōu)化
        2.3.7 酶輔助擴增反應(yīng)時間的優(yōu)化
        2.3.8 miRNA的SERS檢測
        2.3.9 miRNAlet-7a檢測方法特異性的探究
        2.3.10 實際樣品中miRNA的檢測
    2.4 小結(jié)
第三章 熵驅(qū)動雙重循環(huán)放大SERS檢測端粒酶活性
    3.1 引言
    3.2 實驗部分
        3.2.1 試劑
        3.2.2 儀器
        3.2.3 金納米粒子的制備
        3.2.4 細胞培養(yǎng)
        3.2.5 細胞內(nèi)端粒酶的提取
        3.2.6 拉曼探針的制備
        3.2.7 端粒延伸反應(yīng)
        3.2.8 循環(huán)放大反應(yīng)
        3.2.9 SERS檢測
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 實驗原理
        3.3.2 金納米粒子的表征
        3.3.3 實驗可行性研究
        3.3.4 端粒酶反應(yīng)溫度的優(yōu)化
        3.3.5 端粒酶反應(yīng)時間的優(yōu)化
        3.3.6 端粒酶前體濃度的優(yōu)化
        3.3.7 端粒酶的SERS檢測
        3.3.8 細胞內(nèi)端粒酶的檢測
    3.4 小結(jié)
第四章 基于三螺旋均相熒光檢測端粒酶活性
    4.1 引言
    4.2 實驗部分
        4.2.1 試劑
        4.2.2 儀器
        4.2.3 金納米粒子的制備
        4.2.4 AuNPs-三螺旋探針的制備
        4.2.5 循環(huán)放大反應(yīng)
        4.2.6 熒光檢測
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 實驗原理
        4.3.2 實驗可行性探究
        4.3.3 實驗pH的優(yōu)化
        4.3.4 端粒酶反應(yīng)時間的優(yōu)化
        4.3.5 金納米粒子用量的優(yōu)化
        4.3.6 端粒酶的熒光檢測
    4.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
致謝
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【參考文獻】：
期刊論文
[1]循環(huán)腫瘤細胞的研究進展[J]. 平偉,付向?qū)?孫威.  醫(yī)學(xué)與哲學(xué)(臨床決策論壇版). 2011(06)
[2]腫瘤的綜合治療方法[J]. 陳淑芹,金敬順,陳霞.  醫(yī)學(xué)信息(中旬刊). 2011(02)
[3]腫瘤基因治療的研究進展[J]. 周冰,陳文斌.  齊魯藥事. 2009(02)



本文編號：2989385