目的:采用人結(jié)腸癌HT-29為親本細(xì)胞株,持續(xù)藥物濃度遞增法構(gòu)建人結(jié)腸癌耐藥細(xì)胞株,細(xì)胞學(xué)觀察腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性變化,全人類基因組表達(dá)譜芯片分析比較兩株細(xì)胞基因表達(dá)譜差異,初步探索結(jié)腸癌細(xì)胞中可能與5-Fu耐藥相關(guān)的基因,為今后進(jìn)一步研究耐藥機制、篩選耐藥分子標(biāo)記物奠定基礎(chǔ)。方法:1.采用5-Fu持續(xù)接觸濃度梯度遞增法構(gòu)建人結(jié)腸癌耐藥細(xì)胞株HT-29/5-Fu;2.觀察耐藥細(xì)胞株HT-29/5-Fu的生物學(xué)特性:觀察細(xì)胞形態(tài)變化和克隆形成率;MTT法測定生長曲線和藥物敏感性;Western blot分析胸苷酸合成酶（TS）、二氫嘧啶脫氫酶（DPD）的表達(dá)情況;流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期和凋亡;3.利用全人類基因組表達(dá)譜芯片檢測耐藥細(xì)胞株HT-29/5-Fu及其親本HT-29細(xì)胞差異表達(dá)的基因,并運用生物信息學(xué)的方法篩選出可能與5-Fu耐藥相關(guān)的基因及通路。結(jié)果:1、歷時10個月成功建立了能在1μg/m L 5-Fu濃度下穩(wěn)定生長的耐藥細(xì)胞株HT-29/5-Fu;2、HT-29/5-Fu耐藥細(xì)胞的生物學(xué)特性發(fā)生改變,其耐藥指數(shù)為3.59;與HT-29細(xì)胞相比,HT-29/5-Fu細(xì)胞形態(tài)發(fā)生... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 引言
第2章 材料和方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細(xì)胞株
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑及材料
    2.2 實驗方法
        2.2.1 人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.2 耐 5-Fu人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29/5-Fu的建立
        2.2.3 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
        2.2.4 細(xì)胞生長曲線測定
        2.2.5 平板克隆形成實驗
        2.2.6 藥物敏感性分析
        2.2.7 TS和DPD的表達(dá)情況分析
        2.2.8 細(xì)胞周期檢測
        2.2.9 細(xì)胞凋亡檢測
        2.2.10基因表達(dá)分析
    2.3 統(tǒng)計分析
第3章 結(jié)果
    3.1 成功建立耐藥細(xì)胞株HT-29/5-Fu
    3.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)
    3.3 生長曲線
    3.4 克隆形成
    3.5 5-Fu敏感性
    3.6 Western blot分析TS和DPD表達(dá)
    3.7 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期
    3.8 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡
    3.9 芯片結(jié)果
        3.9.1 RNA質(zhì)量檢測
        3.9.2 基因表達(dá)譜雜交圖
        3.9.3 基因表達(dá)譜散點圖
        3.9.4 差異基因分析
        3.9.5 GO分析
        3.9.6 KEGG分析
第4章 討論
第5章 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文、獎勵
綜述
    參考文獻(xiàn)
本學(xué)期畢業(yè)博士、碩士研究生公開發(fā)表學(xué)術(shù)論文統(tǒng)計表


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：2968660