目的腫瘤的形成是機(jī)體在受到多種不良因素的影響后局部組織異常增殖所形成的新生物。其中惡性腫瘤目前對人類健康的危害已經(jīng)眾所周知,由于缺乏特異性地早期診斷,很多腫瘤在確診時(shí)已處于晚期,患者術(shù)后5年生存率仍然處于較低水平。因此,從分子水平揭示腫瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制,對于腫瘤的早期診斷以及為治療惡性腫瘤提供新的方向具有重大臨床意義。近年來研究表明,腫瘤的發(fā)生不僅涉及到遺傳學(xué)的改變,同時(shí)表觀遺傳學(xué)在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中亦有重要作用。前者是指由于基因序列的改變而導(dǎo)致的基因水平的變化,而后者是在不涉及核苷酸序列變化的基礎(chǔ)上基因發(fā)生的可逆的、可遺傳的變化。組蛋白修飾是表觀遺傳學(xué)的重要組成部分,其中組蛋白乙�；c去乙�；揎検悄壳把芯枯^多的一種修飾方式,組蛋白乙酰化狀態(tài)的失衡參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。但是關(guān)于組蛋白乙�；揎椗c細(xì)胞信號通路之間的關(guān)系目前研究尚不深入。本實(shí)驗(yàn)中,首先通過組織芯片免疫組化的方法研究胃腺癌中H3K4AC和H3K27AC的表達(dá)情況,然后通過調(diào)控Wnt/β-catenin及PI3K/Akt信號通路的活性來檢測H3K4AC和H3K27AC在不同腫瘤細(xì)胞系中表達(dá)水平的變化,為腫瘤的防治提供新的思... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

H3K4AC和H3K27AC在正常胃黏膜組織及不同病理級別胃腺癌中的表

酰化相關(guān)[24]，組蛋白乙�；饔檬疽鈭D如圖1.2所示。研究表明組蛋白修飾程度的高低可用于預(yù)測腫瘤的預(yù)后。研究發(fā)現(xiàn)在胃癌組織中H3K9的乙�；礁叩团c胃癌的分化程度及病理分型有關(guān)，并且胃癌中組蛋白H4乙�；斤@著下調(diào)，這與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤深度有直接聯(lián)系，表明組蛋白乙�；南抡{(diào)可能參與了胃癌的侵襲和遷移過程[25]。圖 1.2 組蛋白乙�；c基因表達(dá)（摘自“Altered Histone Modifications inGliomas”）組織芯片（tissue chip），是在同一張載玻片上有多個(gè)規(guī)律排列的不同個(gè)體的組織標(biāo)本，我們可以對這些不同個(gè)體的標(biāo)本進(jìn)行同一指標(biāo)的研究。由于芯片上的組織樣本實(shí)驗(yàn)條件完全一致，因此具有極好的質(zhì)量控制，大大減少了實(shí)驗(yàn)中因?qū)嶒?yàn)條件變化而導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)偏差的概率。使用組織芯片可以進(jìn)行染色體原位雜交、免疫組化和原位聚合酶鏈反應(yīng)等多種分子檢測，目前已經(jīng)被用于包括腫瘤學(xué)在內(nèi)的多個(gè)研究領(lǐng)域。趙鳳娟等曾利用組織芯片免疫組化的方法檢測了正常胃黏膜、癌旁組織以及高、中、低分化腺癌中 MMP-9 的表達(dá)變化

使所需的目的蛋白顯示條帶，拍照保存。8.結(jié)果分析：目的條帶灰度值分析使用的是Image J 軟件，因Histone3蛋白在細(xì)胞核內(nèi)的表達(dá)較其他蛋白穩(wěn)定，在分析時(shí)作為內(nèi)參進(jìn)行校正。對目的蛋白條帶和內(nèi)參條帶的灰度值進(jìn)行比較可以用于表示目的蛋白表達(dá)水平的高低。2.1.4.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計(jì)軟件使用的是SPSS 18.0，數(shù)據(jù)分析結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來表示（x ±s），認(rèn)為P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.2 結(jié)果1.核蛋白濃度的測量：根據(jù)酶標(biāo)儀讀取96孔板中標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)值并繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線系數(shù)接近于1，表明蛋白樣品濃度值測量較為精確。2.Western-blot檢測在加入不同濃度Wnt/β-catenin信號通路抑制劑FH535及在不同作用時(shí)間下兩種胃癌細(xì)胞MGC-803和BGC-823中H3K4AC和H3K27AC的表達(dá)，結(jié)果顯示，藥物作用濃度加大或者作用時(shí)間延長，都可以使H3K4AC和H3K27AC的表達(dá)下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05）（圖2.1）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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