TET蛋白是一種重要的羥甲基化酶,包括TET1、TET2和TET3,它可以催化5-甲基胞嘧啶（5-methyl-cytosine,5mC）形成5-羥甲基胞嘧啶（5-hydroxymethyl-cytosine,5hmC）。TET蛋白在腫瘤等疾病的發(fā)生和發(fā)展過程中起著重要的作用。目前,TET2和TET3被廣泛的認(rèn)為是一種抑癌基因,但對(duì)于TET1的作用存在爭(zhēng)議�；蛲蛔兪悄[瘤發(fā)生的重要原因,TET蛋白家族在腫瘤中已發(fā)現(xiàn)多個(gè)基因突變位點(diǎn),尤其是TET2的突變頻率較高,有關(guān)TET1突變的報(bào)道很少,目前為止TET3的突變報(bào)道也僅有一例。研究TET蛋白家族在腫瘤中的突變對(duì)分析TET影響該腫瘤發(fā)生的機(jī)制有重要意義。對(duì)臨床樣本25例食管癌組織和25例癌旁組織進(jìn)行DNA提取,之后進(jìn)行TET突變位點(diǎn)的篩選,對(duì)于篩選出的突變位點(diǎn)在食管癌細(xì)胞系中驗(yàn)證。對(duì)臨床樣本25例食管癌組織和25例癌旁組織進(jìn)行RNA提取,利用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)TET在食管癌中的表達(dá)情況,進(jìn)一步結(jié)合TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)TET1與食管癌的相關(guān)性進(jìn)行臨床數(shù)據(jù)分析。利用位點(diǎn)特異性變異技術(shù)對(duì)TET1質(zhì)粒進(jìn)行定點(diǎn)突變,將野生型和突變型的TET1質(zhì)粒轉(zhuǎn)... 

【文章來源】：北京工業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第1章 緒論
    1.1 表觀遺傳學(xué)
    1.2 TET蛋白
    1.3 TET與腫瘤的關(guān)系
    1.4 TET基因突變
    1.5 食管癌的研究現(xiàn)狀
    1.6 課題研究的目的及意義
第2章 TET1、2、3突變體的篩選
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 儀器設(shè)備
        2.2.2 試劑及耗材
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 組織內(nèi)提取DNA
        2.3.2 細(xì)胞內(nèi)提取DNA
        2.3.3 細(xì)胞內(nèi)提取RNA
        2.3.4 Q5高保真酶PCR
        2.3.5 切膠回收目的基因產(chǎn)物
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 食管癌和癌旁組織DNA的提取和TET1、2、3編碼區(qū)擴(kuò)增引物的設(shè)計(jì)
        2.4.2 TET1、2、3編碼區(qū)的擴(kuò)增與測(cè)序
        2.4.3 食管癌細(xì)胞中突變位點(diǎn)的篩選
        2.4.4 TET基因在食管癌中的突變率分析
        2.4.5 TET突變位點(diǎn)位置分析
    2.5 本章小結(jié)
第3章 TET1、2、3在食管癌中的表達(dá)檢測(cè)
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 儀器設(shè)備
        3.2.2 試劑及耗材
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 組織內(nèi)提取RNA
        3.3.2 RT-PCR
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 組織RNA的提取和TET1、2、3RT-PCR擴(kuò)增引物的設(shè)計(jì)
        3.4.2 分析TET1、2、3在食管癌及癌旁組織中的表達(dá)
        3.4.3 分析TET1、2、3在食管癌細(xì)胞及正常食管細(xì)胞中的表達(dá)
        3.4.4 TET1在食管癌中的臨床數(shù)據(jù)分析
    3.5 本章小結(jié)
第4章 TET1突變位點(diǎn)鑒定
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 儀器設(shè)備
        4.2.2 試劑及耗材
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 突變體質(zhì)粒構(gòu)建
        4.3.2 LB培養(yǎng)基的配制
        4.3.3 大腸桿菌熱擊轉(zhuǎn)化
        4.3.4 無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提
        4.3.5 細(xì)胞復(fù)蘇
        4.3.6 細(xì)胞傳代
        4.3.7 Chemifect細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        4.3.8 細(xì)胞內(nèi)提取蛋白
        4.3.9 蛋白定量（BCA法定量）
        4.3.10 SDS-PAGE凝膠電泳
        4.3.11 DNA dotblot
        4.3.12 MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        4.3.13 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        4.3.14 Transwell
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 突變型TET1質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.4.2 TET1突變體羥甲基化和蛋白表達(dá)功能的鑒定
        4.4.3 TET1突變體對(duì)EC109細(xì)胞功能的影響
        4.4.4 TET1突變體影響EC109細(xì)胞功能的可能性機(jī)制探討
    4.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]TET1通過誘導(dǎo)抑癌基因Rassf5上調(diào)從而抑制卵巢癌細(xì)胞增殖的研究[D]. 李伯泰.浙江大學(xué) 2017
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