[背景和目的]外泌體,是一種由各種細胞分泌的細胞外囊泡,并攜帶大量與供體細胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)、核酸等組分。近年來的研究發(fā)現(xiàn),其與乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移及耐藥密切相關(guān)。本研究擬在接受多西他賽聯(lián)合卡培他濱方案一線治療的晚期乳腺癌患者中進行血漿外泌體miRNA的探索性研究,以期發(fā)掘可預(yù)測化療敏感性、療效和預(yù)后的分子標(biāo)志物。[方法]本研究共納入中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院內(nèi)科2014年5月至2016年3月接受多西他賽聯(lián)合卡培他濱方案一線化療的晚期乳腺癌患者18例,比較不同療效乳腺癌患者血漿外泌體中miRNA表達水平的差異,并通過生物信息學(xué)方法對其下游靶基因及其功能和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路進行分析,探索血漿外泌體miRNA與乳腺癌的診斷及外泌體miRNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)與乳腺癌化療療效的相關(guān)性。[結(jié)果]通過二代測序共獲得1513種已知miRNA,miR-451a在所有患者血漿外泌體中表達量最高。根據(jù)化療敏感性、化療前后變化、生存差異及分子分型進行分組,對不同分組樣品間miRNA的差異表達進行分析,分別篩選出18個、21個、15個及 11 個差異表達 miRNA,其中,miR-218-5p 等 18 個 miRNA 在 Kap... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－２轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者血漿外泌體電鏡示圖（Ｘ８００００）??２．２?Ｂｒａｄｆｏｒｄ

ｉ??＇??圖１－２轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者血漿外泌體電鏡示圖（Ｘ８００００）??２．２?Ｂｒａｄｆｏｒｄ法檢測蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線??通過Ｂｒａｄｆｏｒｄ法檢測５９５ｎｍ波長處吸光度與蛋白濃度之間的相關(guān)性。吸光度??對８８八濃度的關(guān)系曲線為丫＝０．０７４５３＼＋０．０３］１５，１＾２＝０．９９４１，二者呈線性關(guān)系，提??示擬合度良好。??２．３?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ血漿外泌體表面蛋白表達情況??ＣＤ６３、ＣＤ８１為血楽外泌體的特異性表面蛋白，應(yīng)用ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ法對本研究所??提取患者外泌體進行驗證，結(jié)果如圖１－３所示，患者血漿提取外泌體ＣＤ６３及ＣＤ８１??高表達。為進一步證實實驗結(jié)果?＇再次重復(fù)ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ法２次，結(jié)果一致。??４１０ＮＣ細胞血漿外泌??５３ｋＤａ??ＣＤ６３??４０ｋＤａ??ＧＡＰＤＨ??２８ｋＤａ??ＣＤ８１??圖１－３血漿外泌體表面特異性蛋白ＣＤ

第一部分結(jié)果??２．４血漿外泌體ＲＮＡ提取結(jié)果??血漿外泌體ＲＮＡ提取后質(zhì)檢結(jié)果如圖１?－４所示，主峰出現(xiàn)在２５ｎｔ左右，２００ｎｔ??以上基線平穩(wěn)，無明顯雜峰，說明外泌體ＲＮＡ分離提取效果較好，所有樣品質(zhì)量??合格，滿足ＲＮＡ檢測要求，保證測序結(jié)果可靠，可繼續(xù)行后續(xù)檢測。??０１０Ｓ１ＪＸ?（?１：２?］??？ＵＪ??８０－??７０－??６０－??５０－??知＿??？－??２０－??１０－??０－??２Ｓ?２００?Ｓ００?）０００?ＸＩ００?４〇００?【ｎｔ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]外泌體及其在腫瘤診療中的意義[J]. 張敏,張晨光,丁衛(wèi).  生理科學(xué)進展. 2014(05)
[2]Aurora-A在乳腺癌致瘤機制和預(yù)后方面的研究進展[J]. 夏良平,周菲菲,楊名添,劉強.  癌癥. 2009(06)



本文編號：2941988