目的白藜蘆醇（resveratrol,RSV）是一種天然多酚類化合物,廣泛存在于葡萄、草莓和花生等食物中。RSV具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤的作用,還能夠抵御肥胖、保護(hù)心血管、緩解阿爾茲海默癥等。腎細(xì)胞癌（renal cell carcinoma,RCC）是泌尿系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤之一,由于腎癌的發(fā)病機制并不是很清楚,且對化療不敏感,常導(dǎo)致患者預(yù)后不良。已知炎癥與癌癥的發(fā)生發(fā)展密不可分,且具有相互促進(jìn)的作用。炎癥過程中發(fā)揮重要作用的炎癥小體已得到廣泛研究,其中NLRP3炎癥小體最為熟知,而其在腎癌發(fā)生發(fā)展中的作用并不明確。我們希望通過觀察RSV對腎癌的作用以及在此過程中NLRP3表達(dá)水平的變化來為尋找治療腎癌的方法提供新思路。因此,本課題旨在研究RSV對腎癌的具體作用以及通過研究這一過程中炎癥的變化,來揭示NLRP3在腎癌發(fā)生發(fā)展中的作用,并為研究炎癥與腫瘤的關(guān)系提供新的線索。方法1.CCK-8（Cell Counting Kit-8）實驗檢測RSV對ACHN和786-O細(xì)胞的生長抑制作用。2.劃痕實驗檢測RSV對ACHN和786-O細(xì)胞遷移能力的影響。3.Transwell實驗檢測RS... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

白藜蘆醇分子結(jié)構(gòu)

酶前體 pro-Caspase-1，三者形成的蛋白復(fù)合體即為 NLRP3 炎癥小體。炎癥小體形成后將 pro-Caspase-1 激活，活化的 Caspase-1 可將 IL-1β 前體（pro-IL-1β）和IL-18 前體（pro-IL-18）剪切為有活性的 IL-1β 和 IL-18，成熟的 IL-1β 和 IL-18分泌到胞外促進(jìn)炎癥反應(yīng)[46]。炎癥小體與多種疾病有關(guān)，如痛風(fēng)[55]、2 型糖尿病[56]、動脈粥樣硬化[57]、阿爾茲海默病[58]、腫瘤[59]等。NLRP3 炎癥小體在許多腫瘤中已經(jīng)被認(rèn)為是一種促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要因素，比如肺癌[60]、膀胱癌[61]、急性淋巴細(xì)胞白血病[62]等。Melvyn 等認(rèn)為，NLRP3可以通過抑制 NK 細(xì)胞來促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。在黑素瘤和前列腺癌肺轉(zhuǎn)移模型中，敲除 NLRP3 基因的小鼠肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)量少，證明 NLRP3 具有促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的作用，并且這種促進(jìn)轉(zhuǎn)移的過程不依賴于 Caspase-1。此外，NLRP3 敲除的小鼠是通過NK 細(xì)胞的作用來減少腫瘤轉(zhuǎn)移的，而不是 T 細(xì)胞，而且在該種小鼠體內(nèi) NK 細(xì)胞活力增強，后者可以通過分泌 IFN-γ 來抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。研究還發(fā)現(xiàn)，造血細(xì)胞表達(dá) NLRP3 對于癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移也有促進(jìn)作用[63]。然而，Jeremy 等發(fā)現(xiàn)，NLRP3炎癥小體可以通過促進(jìn) NK 細(xì)胞殺腫瘤活力來抑制結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移，且這一過程由IL-18 介導(dǎo)而不是 IL-1β[64]。

為了檢測 RSV 對于腎癌細(xì)胞生長活性的影響，本實驗選取了不同濃度（25μM、50 μM、100 μM）的 RSV 處理腎癌細(xì)胞，同時對于 RSV 的處理時間分別選取了 0 h、12 h、24 h，處理結(jié)束后加入 CCK-8 試劑進(jìn)行檢測，計算腎癌細(xì)胞存活率。結(jié)果顯示，對于 ACHN 細(xì)胞，RSV 濃度為 25 μM 時，0 h、12 h、2 4h的存活率分別為 100 %、86.53 %、74.81 %；50 μM 時，0 h、12 h、24 h 的存活率分別為 100 %、83.08 %、69.72 %；100 μM 時，0 h、12 h、24 h 的存活率分別為 100 %、76.27 %、61.20 %。對于 786-O 細(xì)胞，RSV 濃度為 25 μM 時，0 h、12 h、24 h 的存活率分別為 100 %、86.53 %、74.81 %；50 μM 時，0 h 、12 h、24 h 的存活率分別為 100 %、89.55 %、70.84 %；100 μM 時，0 h、12 h、24 h的存活率分別為 100 %、73.32 %、40.91 %。從結(jié)果我們可以看出，在相同 RSV濃度下，兩種腎癌細(xì)胞的存活率隨著 RSV 處理時間的延長而降低；在相同處理時間下，兩種腎癌細(xì)胞的存活率隨著 RSV 濃度的升高而降低。各組之間相比均有顯著性差異。因此可以看出，兩種腎癌細(xì)胞的存活率對于 RSV 的處理具有時間依賴性和濃度依賴性。根據(jù)公式計算 24 h 的 IC50 選取 100 μM 作為后續(xù)實驗條件。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]二甲雙胍抑制肺腺癌A549細(xì)胞增殖和遷移的作用及其機制[J]. 王方煒,李超乾.  廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2020(07)



本文編號：2939035