目的:肝癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一,肝細(xì)胞肝癌占肝癌總數(shù)的70-90%,腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移是肝細(xì)胞肝癌患者預(yù)后差的主要原因。手術(shù)切除依然是肝癌的首選治療手段,肝癌中晚期不能手術(shù)治療的患者大部分選擇索拉非尼進(jìn)行傳統(tǒng)化療,然而索拉非尼治療效果有限。因此我們希望發(fā)現(xiàn)新的藥物靶點(diǎn),為肝癌治療提供新手段。方法:利用基因芯片技術(shù)比較不同轉(zhuǎn)移能力肝癌細(xì)胞系的差異表達(dá)基因,篩選出轉(zhuǎn)移相關(guān)基因Shc3,分別用實(shí)時(shí)定量PCR和western blot方法驗(yàn)證芯片數(shù)據(jù)。檢測臨床肝癌病人組織標(biāo)本中Shc3的表達(dá)量,結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果和臨床病理資料分析考察Shc3與轉(zhuǎn)移、病理分期和不良預(yù)后的關(guān)系。構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)的Shc3高表達(dá)和降表達(dá)肝癌細(xì)胞系。通過生長曲線實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、趨化實(shí)驗(yàn)、侵襲實(shí)驗(yàn)觀察Shc3表達(dá)對肝癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移能力的影響。利用蛋白質(zhì)譜學(xué)方法尋找與Shc3相互作用的蛋白。用Western blot實(shí)驗(yàn)檢測Shc3下游激活通路。用裸鼠皮下成瘤模型和原位肝癌移植模型考察體內(nèi)Shc3表達(dá)對肝癌轉(zhuǎn)移能力的影響。結(jié)果:基因芯片數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)肝癌細(xì)胞中Shc3表達(dá)量與肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲能力存在正相關(guān)關(guān)系。同時(shí),33名肝... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１肝癌細(xì)胞系基因芯片熱圖??

Ｓｈｃ４和１８ｓｒＲＮＡ的ｍＲＮＡ表達(dá)水平９結(jié)果顯示不僅Ｓｈｃ３的ｍＲＮＡ水乎在惡??性肝癌細(xì)胞系中顯著性增高，而Ｍ?Ｓｈｅ家族的其他三個亞型Ｓｈｃｌ、Ｓｈｃ２和Ｓｈｃ４??的ｍＲＮＡ水平在肝癌細(xì)胞系中的變化弁無Ｍ蓍增加或者減少（ｐ＜０．０５，圖１．２）。??２１０＂］?■?Ｈｕｈ７?￣??＾?８?．?□?ＭＨＣＣ９７Ｌ??Ｉ?■?ＨＣＣＬＭ３??ｅ６一??＼ｌｉｊ１ａ?ｉｌｌｉＰ??Ｓｈｃ１?Ｓｈｃ２?Ｓｈｃ３?Ｓｈｃ４??圖１．２?Ｓｈｅ家族在Ｈｕｈ７，?ＭＨＣＣ９７Ｌ和ＨＣＣＬＭ３三個肝癌細(xì)胞系中的ｍＲＮＡ??的表達(dá)??用蛋＿＿白印跡實(shí)驗(yàn)（ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ）檢測Ｓｈｃ３在常肝細(xì)胞和肝痛細(xì)胞中的蛋??白表達(dá)量％?Ｓｈｃ３表達(dá)在惡性肝癌細(xì)胞系ＭＨＣＣ９７Ｌ、ＭＨＣＣ９７Ｈ、ＨＣＣＬＭ３中??顯著增高《結(jié)果表明，Ｓｈｃ３蛋白在莊常肝細(xì)胞７７０２和低轉(zhuǎn)移能力的肝癌細(xì)胞??Ｈｕｈ７中低表達(dá)，在高轉(zhuǎn)移能力的肝癌細(xì)胞系ＭＨＣＣ９７Ｌ，ＭＨＣＣ９７Ｈ和??ＨＣＣＬＭ３中顯著高表達(dá)，與塞因芯片分析結(jié)果和實(shí)時(shí)定暈ＰＣＲ結(jié)果一致（圖??１．３）〇??Ｐ－ａｃｔｉｎ??圖１．３?Ｓｈｃ３蛋白在肝正常細(xì)胞和肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)??１．２．?３?Ｓｈｃ３在臨床樣本中高表達(dá)??２０１５－２０１６年＿腫癬醫(yī)院３３名臨床肝癌病人，選取其癌和癌旁組織浸泡在??ＲＮＡ保護(hù)液中放在－２０°Ｃ冰箱保存（表１．１）。收取完畢后

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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Portal vein tumor thrombus is a bottleneck in the treatment of hepatocellular carcinoma[J]. Ju-Xian Sun,Jie Shi,Nan Li,Wei-Xing Guo,Meng-Chao Wu,Wan-Yee Lau,Shu-Qun Cheng.  Cancer Biology & Medicine. 2016(04)



本文編號：2926537