研究背景與目的肝炎-肝硬化-肝癌被認(rèn)為是肝癌發(fā)生過程中“三部曲”。臨床大量資料顯示,大多數(shù)肝癌患者有肝纖維化或肝硬化背景,且伴肝硬化背景的肝癌患者中位生存期下降,肝竇內(nèi)壓力增加及肝硬化促進(jìn)肝癌進(jìn)展。研究發(fā)現(xiàn)肝臟硬度可作為肝癌發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,患者肝纖維化程度越重,肝癌肝內(nèi)轉(zhuǎn)移率也越高,說明肝纖維化與肝癌細(xì)胞增殖及侵襲轉(zhuǎn)移間也存在非常重要的關(guān)系。門脈高壓時(shí),肝竇內(nèi)壓力大幅增加,肝竇顯著擴(kuò)張,肝細(xì)胞受到了肝竇壓力和肝竇擴(kuò)張后的張應(yīng)變力等生物力學(xué)因素直接或間接的作用。但是,肝纖維化所致張應(yīng)變力的變化對(duì)肝癌細(xì)胞的影響及其相關(guān)機(jī)制,如牽涉到的MicroRNAs（miRNAs）等未見報(bào)道。眾所周知,miRNA是一種長21²3核苷酸的非編碼RNA分子,在調(diào)控細(xì)胞增殖、分化和凋亡中起著重要的作用。一些研究發(fā)現(xiàn)miRNAs同時(shí)與張應(yīng)變力和肝癌均有關(guān)系。所以本研究運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)及cck-8,Brdu等方法測定張應(yīng)變力對(duì)人肝癌細(xì)胞系HepG2細(xì)胞增殖的影響。使用Agilent單色標(biāo)記芯片實(shí)驗(yàn)篩選差異表達(dá)MicroRNAs,再使用RT-PCR證實(shí)。并運(yùn)用GO和Pathway分析基因。為... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Flexercell細(xì)胞張應(yīng)變力加載系統(tǒng)組成及工作原理圖

取培養(yǎng)中的對(duì)數(shù)期生長 HepG2 細(xì)胞，用含有 EDTA 的 0.125％胰酶液消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)后，按 1×106/孔的細(xì)胞數(shù)種在 BioFlex 六孔板上，過夜，使細(xì)胞完全貼壁。3. 培養(yǎng)細(xì)胞用含10％FBS的 DMEM 培養(yǎng)，一天后鏡下觀察細(xì)胞生長情況，當(dāng)達(dá)到每孔約80％密度時(shí)，進(jìn)行下一步。4. 細(xì)胞同步化將舊細(xì)胞培養(yǎng)基吸出，加入不含 FBS 的 DMEM，進(jìn)行同步化 24 小時(shí)。5. 安裝裝置將同步化完畢的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組 BioFlex 板同時(shí)置于張應(yīng)變力實(shí)驗(yàn)專用的 CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，將實(shí)驗(yàn)組 BioFlex 板小心安置在基臺(tái)上，使用密封圈封閉好(可同時(shí)對(duì) 4 塊BioFlex 板進(jìn)行張應(yīng)變力加載，若實(shí)驗(yàn)組不足 4 塊，使用空板補(bǔ)齊)，連接好出、進(jìn)氣管。6. 施加張應(yīng)變力開啟真空泵和控制器后，啟動(dòng)計(jì)算機(jī)控制軟件，按照相應(yīng)實(shí)驗(yàn)要求設(shè)置張應(yīng)變力參數(shù)(圖 2)，開始施加張應(yīng)變力。

張應(yīng)變力響應(yīng)的 microRNAs 在肝癌細(xì)胞增殖中的作用及生物信息學(xué)分結(jié) 果在本章實(shí)驗(yàn)中，我們使用張應(yīng)變力加載 HepG2 細(xì)胞，共有三個(gè)可調(diào)節(jié)參數(shù)：變幅度、張應(yīng)變頻率、張應(yīng)變時(shí)間。通過固定其中兩個(gè)參數(shù)，變化另一個(gè)參數(shù)以此參數(shù)下的張應(yīng)變對(duì)肝癌 HepG2 細(xì)胞的影響。然后通過流式細(xì)胞術(shù)對(duì)張應(yīng)變力組和對(duì)照組進(jìn)行細(xì)胞增殖率的檢驗(yàn)。結(jié)果如下：、 I 型鼠尾膠原包被 Flexcell 六孔板效果由于沒有 HepG2 細(xì)胞種植于 BioFlex 六孔板的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，本次實(shí)驗(yàn)試用了多法包被 BioFlex 六孔板，包括：泡稀鹽酸、泡酒精、泡 84 消毒液或者泡無菌水行明膠包被，均效果不佳，后來詢問 Flexcell 公司技術(shù)人員，其建議嘗試 I 型鼠原包被，結(jié)果如下：

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]基底拉伸和壓縮加載對(duì)肝癌細(xì)胞接觸抑制喪失生長行為的影響[D]. 楊曉棟.重慶大學(xué) 2008



本文編號(hào)：2920450