目的:探討在體外實(shí)驗(yàn)中,應(yīng)用B細(xì)胞特異性莫羅尼白血病病毒插入位點(diǎn)1（BMI-1）siRNA沉默BMI1基因來(lái)通過(guò)阻斷髓樣分化蛋白-2（MD-2）/Toll樣受體4（TLR4）/髓樣分化因子88（MyD88）復(fù)合體調(diào)控的核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路,抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）,以應(yīng)用于結(jié)直腸癌的靶向治療中。方法:應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）、酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定（ELISA）檢測(cè)人結(jié)直腸癌細(xì)胞白細(xì)胞介素-6（IL-6）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）mRNA及蛋白的表達(dá)水平,應(yīng)用RT-PCR和Western blot檢測(cè)BMI-1、MD2、TLR4、MyD88mRNA及蛋白的表達(dá)水平,應(yīng)用Western blot檢測(cè)p-NF-κB p65、NF-κB p65、IκBα及波形蛋白（vimentin）、N-鈣粘附蛋白（N-cadherin）、E-鈣粘附蛋白（E-cadherin）的蛋白含量,采用四唑鹽比色法（MTT）和Transwell小室（Transwell insert）評(píng)估人結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖和遷移能力的變化情況,應(yīng)用B... 

【文章來(lái)源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：49 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

建立炎癥環(huán)境

圖 2：研究 BMI-1 基因在 LPS 介導(dǎo)的結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲和 EMT 中的作用。HT-29 細(xì)胞先經(jīng) THP-1-CM 處理。MTT 用于評(píng)價(jià)經(jīng) THP-1-CM 處理后 HT-29（A）的增殖能力。Transwell 小室檢測(cè) HT-29（B）細(xì)胞侵襲能力。western blot 檢測(cè) HT-29（C 和 D）中 E-cadherin、N-cadherin 和 vimentin 蛋白的表達(dá)。GAPDH 作為內(nèi)參照。光譜分析法定量測(cè)定蛋白質(zhì)表達(dá)。計(jì)量資料用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。至少進(jìn)行三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。*為與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。#為與 THP-1-CM+sh-NC 組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P <0.05）。3．沉默 BMI-1 可抑制 TLR4/MD-2/MyD88 復(fù)合體介導(dǎo)的 NF-κB 信號(hào)通路TLR4 在腫瘤侵襲過(guò)程中起重要作用，而 MD-2 調(diào)控 TLR4 信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程[31]。LPS 可激活 TLR4/MD-2 復(fù)合體[32]。為了進(jìn)一步研究 TLR4/MD-2 是否參與 BMI-1對(duì) THP-1-CM 介導(dǎo)的侵襲和 EMT 的作用，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)經(jīng) THP-1-CM 處理后的HT29 中，相對(duì)于對(duì)照組，TLR4/MD-2 復(fù)合體和 MyD88 表達(dá)顯著增加（TLR4：

圖 3：研究 BMI-1 基因在 TLR4/MD-2/MyD88 復(fù)合體介導(dǎo)的 NF-κB 信號(hào)通路中的作用。圖 A 和圖 B 表示western blot 檢測(cè)不同實(shí)驗(yàn)組 TLR4、MD-2 和 MyD88 蛋白的表達(dá)。圖 C 和圖 D 表示 western blot 檢測(cè) NF-κB p65、p-NF-κB p65 和 IκBα蛋白的表達(dá)。GAPDH 作為內(nèi)參照。計(jì)量資料用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。至少進(jìn)行三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。*為與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。#為與 THP-1-CM+sh-NC 組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。討論許多臨床研究和實(shí)驗(yàn)研究表明炎癥微環(huán)境對(duì)腫瘤發(fā)展和轉(zhuǎn)移起重要作用[33]。腫瘤微環(huán)境包含活躍的免疫細(xì)胞浸潤(rùn)、巨噬細(xì)胞釋放前炎癥因子介導(dǎo)這些炎癥反應(yīng)[34]。因?yàn)榫奘杉?xì)胞是產(chǎn)生前炎癥因子的主要來(lái)源，包括 IL-6、IL-1β和 TNF-α。研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用 LPS 刺激 THP-1 細(xì)胞制作的條件培養(yǎng)基能在體外很好的模仿炎癥微環(huán)境[34]。本實(shí)驗(yàn)表明 THP-1-CM 相對(duì)于空白對(duì)照組、LPS 組和 THP-1組，可顯著增加 IL-6、IL-1β和 TNF-αmRNA 和蛋白質(zhì)的生成。并且，THP-1-CM也可促進(jìn)細(xì)胞侵襲和 EMT，但對(duì)細(xì)胞增殖能力無(wú)明顯影響。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果與國(guó)外報(bào)道相符合[9]。而且 THP-1-CM 可顯著促進(jìn) TLR4/MD-2/MyD88 復(fù)合體表達(dá)及

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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