本文關(guān)鍵詞：SALL4調(diào)控CD44在胃癌中的作用和機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討人婆羅雙樹樣基因4(spalt-like transcription factor 4,SALL4)在胃癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中的作用,揭示SALL4調(diào)控CD44的作用及機(jī)制,為闡明SALL4促癌作用提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù),并為胃癌分子診斷和治療提供新的靶點(diǎn)。方法:采用慢病毒介導(dǎo)sh RNA基因干擾或四環(huán)素誘導(dǎo)sh RNA基因干擾人胃癌MGC-803細(xì)胞SALL4表達(dá),采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot檢測(cè)干擾效率;生長(zhǎng)曲線和平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力;劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和遷移能力。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot檢測(cè)SALL4基因干擾對(duì)干性相關(guān)基因表達(dá)以及信號(hào)通路活化的影響。雙熒光素酶報(bào)告基因分析SALL4對(duì)CD44啟動(dòng)子活性影響;染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)(chromatin immunoprecipitation,Ch IP)檢測(cè)SALL4蛋白與CD44啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合情況。采用生長(zhǎng)曲線、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移實(shí)驗(yàn)以及裸鼠皮下荷瘤實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)CD44回補(bǔ)對(duì)sh RNA基因干擾SALL4胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果:實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western blot結(jié)果表明sh RNA直接干擾或四環(huán)素誘導(dǎo)sh RNA基因干擾均可有效降低MGC-803細(xì)胞SALL4表達(dá);SALL4基因干擾導(dǎo)致胃癌細(xì)胞增殖能力和遷移能力降低。SALL4基因減低可顯著抑制干性分子Oct4、Sox2、Nanog、c-Myc和CD44基因及蛋白表達(dá),并且可抑制ERK1/2、NF-κB和STAT3信號(hào)通路活化。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)結(jié)果表明,基因干擾SALL4抑制CD44啟動(dòng)子活性。Ch IP實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,SALL4蛋白結(jié)合CD44啟動(dòng)子區(qū)-505 bp~-305 bp區(qū)域。CD44回補(bǔ)可逆轉(zhuǎn)SALL4基因干擾引起的胃癌細(xì)胞體外增殖和遷移能力抑制以及體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)抑制。結(jié)論:SALL4通過上調(diào)CD44促進(jìn)胃癌細(xì)胞體外增殖、遷移和體內(nèi)致瘤能力。SALL4轉(zhuǎn)錄調(diào)控CD44是其發(fā)揮促胃癌作用的新機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：SALL4 CD44 胃癌 增殖 轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-14
• 第一章 緒論14-24
• 1.1 干細(xì)胞因子SALL414-20
• 1.1.1 SALL4的基本生物學(xué)性質(zhì)14-15
• 1.1.2 SALL4與干細(xì)胞和發(fā)育15-16
• 1.1.3 SALL4在腫瘤中的作用16-18
• 1.1.4 SALL4作用的分子機(jī)制18-20
• 1.2 細(xì)胞表面粘附分子CD4420-22
• 1.2.1 CD44的結(jié)構(gòu)20-21
• 1.2.2 CD44在胃癌中的作用21-22
• 1.2.3 CD44的表達(dá)調(diào)控22
• 1.3 小結(jié)22-24
• 第二章 研究目的、方法、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案和意義24-27
• 2.1 研究目的24
• 2.2 研究方法24-25
• 2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案25-26
• 2.4 研究意義26-27
• 第三章 shRNA干擾SALL4表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響27-43
• 3.1 材料27-30
• 3.1.1 細(xì)胞株27
• 3.1.2 主要試劑27-29
• 3.1.3 主要儀器和耗材29-30
• 3.2 方法30-36
• 3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)30
• 3.2.2 慢病毒轉(zhuǎn)染30
• 3.2.3 總RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄PCR30-31
• 3.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR31
• 3.2.5 總蛋白提取31-32
• 3.2.6 Western blot32
• 3.2.7 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線32-33
• 3.2.8 平板克隆形成測(cè)定33
• 3.2.9 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)33
• 3.2.10 Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)33
• 3.2.11 Tet-On誘導(dǎo)系統(tǒng)慢病毒載體構(gòu)建及誘導(dǎo)33-35
• 3.2.12 統(tǒng)計(jì)分析35-36
• 3.3 結(jié)果36-41
• 3.3.1 MGC-803細(xì)胞直接干擾SALL4效率鑒定36
• 3.3.2 直接干擾SALL4表達(dá)對(duì)MGC-803細(xì)胞體外增殖能力的影響36-37
• 3.3.3 直接干擾SALL4表達(dá)對(duì)MGC-803細(xì)胞體外遷移能力的影響37-39
• 3.3.4 Tet-On系統(tǒng)介導(dǎo)SALL4干擾效率驗(yàn)證39
• 3.3.5 Tet-On系統(tǒng)介導(dǎo)SALL4干擾對(duì)MGC-803細(xì)胞體外增殖能力的影響39-40
• 3.3.6 Tet-On系統(tǒng)介導(dǎo)SALL4干擾對(duì)MGC-803細(xì)胞體外遷移能力的影響40-41
• 3.4 討論41-43
• 第四章 胃癌細(xì)胞中SALL4對(duì)CD44的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用43-55
• 4.1 材料43-45
• 4.1.1 細(xì)胞株43
• 4.1.2 主要試劑43-44
• 4.1.3 主要儀器及相關(guān)耗材44-45
• 4.2 方法45-48
• 4.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)45
• 4.2.2 慢病毒轉(zhuǎn)染45
• 4.2.3 總RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄PCR45
• 4.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR45
• 4.2.5 總蛋白提取45
• 4.2.6 Western blot45
• 4.2.7 CD44啟動(dòng)子區(qū)域熒光素酶報(bào)告基因載體構(gòu)建45-46
• 4.2.8 熒光素酶報(bào)告基因分析46-47
• 4.2.9 ChIP47-48
• 4.2.10 統(tǒng)計(jì)分析48
• 4.3 結(jié)果48-52
• 4.3.1 MGC-803細(xì)胞中SALL4對(duì)下游靶基因表達(dá)的影響48-49
• 4.3.2 MGC-803細(xì)胞中SALL4對(duì)關(guān)鍵腫瘤信號(hào)通路的影響49-50
• 4.3.3 SALL4調(diào)控CD44熒光素酶報(bào)告基因活性50-51
• 4.3.4 SALL4蛋白結(jié)合CD44啟動(dòng)子區(qū)域51-52
• 4.4 討論52-55
• 第五章 SALL4轉(zhuǎn)錄激活CD44表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞體內(nèi)外生物學(xué)特性的影響55-63
• 5.1 材料55-56
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物55
• 5.1.2 細(xì)胞株55
• 5.1.3 主要試劑55
• 5.1.4 主要儀器和耗材55-56
• 5.2 方法56-58
• 5.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)56
• 5.2.2 慢病毒轉(zhuǎn)染56
• 5.2.3 總蛋白提取56
• 5.2.4 Western blot56
• 5.2.5 生長(zhǎng)曲線測(cè)定56
• 5.2.6 平板克隆形成測(cè)定56
• 5.2.7 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)56-57
• 5.2.8 Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)57
• 5.2.9 裸鼠皮下荷瘤模型57
• 5.2.10 免疫組織化學(xué)染色57-58
• 5.2.11 腫瘤組織病理分析58
• 5.2.12 統(tǒng)計(jì)分析58
• 5.3 結(jié)果58-62
• 5.3.1 MGC-803 SALL4干擾細(xì)胞株CD44回補(bǔ)效率鑒定58
• 5.3.2 CD44回補(bǔ)對(duì)SALL4干擾細(xì)胞株體外增殖能力的影響58-59
• 5.3.3 CD44回補(bǔ)對(duì)SALL4干擾細(xì)胞株體外遷移能力的影響59-60
• 5.3.4 SALL4干擾及CD44回補(bǔ)對(duì)MGC-803細(xì)胞裸鼠體內(nèi)成瘤能力影響60-62
• 5.4 討論62-63
• 第六章 結(jié)論與展望63-64
• 6.1 結(jié)論63
• 6.2 展望63-64
• 參考文獻(xiàn)64-72
• 致謝72-74
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的科研成果及參加會(huì)議74-75
• 一、科研成果74
• 二、參加會(huì)議74-75
• 三、獲獎(jiǎng)情況75

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 楊天華,周東;基因干擾及其在神經(jīng)科學(xué)的應(yīng)用[J];國外醫(yī)學(xué).神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)分冊(cè);2005年03期

2 ;人類β-肌動(dòng)蛋白逆轉(zhuǎn)錄假基因干擾RT-PCR[J];國外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊(cè);1997年04期

3 王慧;王林;宋莉;葉玨;孟憲敏;;大鼠nelin基因干擾質(zhì)粒的構(gòu)建及其體外抑制效果研究[J];中國分子心臟病學(xué)雜志;2010年01期

4 呂延成;潘曉瑜;黃暢;丁娟;;UL54和UL29基因干擾對(duì)HSV-2復(fù)制的影響[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年04期

5 楊帆;趙平;;Synaptotagmin I和IV在LβT2細(xì)胞中的定位和shRNA基因干擾研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2009年02期

6 丁震宇;李澤桂;星懿展;紀(jì)華;李紅麗;常智杰;;小鼠HIF-1α基因干擾質(zhì)粒的構(gòu)建及其體外抑制效果研究(英文)[J];Neuroscience Bulletin;2009年03期

7 ;[J];;年期

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 通訊員 劉東紅;我國RNA基因干擾技術(shù)研究獲突破 “基因?qū)棥笨梢种迫橄侔└杉?xì)胞[N];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 董渠龍;五味子乙素經(jīng)Nrf2-ARE信號(hào)通路抑制苯并（a）芘對(duì)HTR-8/SVneo細(xì)胞損傷的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 紀(jì)俊明;犬Zfx/Zfy基因干擾載體構(gòu)建及性控效果的觀察[D];石河子大學(xué);2015年

3 袁瀟;SALL4調(diào)控CD44在胃癌中的作用和機(jī)制研究[D];江蘇大學(xué);2016年

4 安俊輝;山羊△FosB基因干擾重組腺病毒的制備與鑒定[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

5 彭強(qiáng);Zfy基因干擾對(duì)小鼠性別控制的研究[D];石河子大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：SALL4調(diào)控CD44在胃癌中的作用和機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：289034