目的:明確Pokemon對乳腺癌細胞(MCF7及T47D)ER、PR表達的影響,同時初步探討相關(guān)分子機制,分析Pokemon與ER、PR在臨床中的相關(guān)性。方法:本實驗分為三部分,第一步,以體外培養(yǎng)的乳腺癌MCF7及T47D細胞為研究對象,設計Pokemon特異性siRNA,通過瞬時轉(zhuǎn)染將siRNA轉(zhuǎn)至MCF7及T47D細胞中,采用q-RTPCR及免疫印跡實驗分析檢測siRNA對Pokemon的沉默情況,構(gòu)建沉默Pokemon的MCF7及T47D細胞。通過Western Blot方法了解Pokemon對ER、PR蛋白水平表達的影響,通過q-RTPCR檢測分析ER、PR核酸轉(zhuǎn)錄表達情況;第二步,通過構(gòu)建ER啟動子序列,檢測MCF7細胞中該啟動子的表達活性。將ER啟動子質(zhì)粒及Pokemon siRNA瞬時共轉(zhuǎn)至MCF7細胞中,應用雙熒光素酶報告基因活性實驗分析Pokemon對ER啟動子活性的影響,從而探究Pokemon影響ER表達的機制;最后應用免疫組織化學方法檢測100例非特殊型浸潤性乳腺導管癌組織及10例邊緣組織和50例不同病理類型的人乳腺癌組織及50例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織中Pokemon及ER、PR的表達情況,分析三者在臨床中的相關(guān)性。結(jié)果1.通過q-RTPCR和Western Blot檢測證實Pokemon對乳腺癌細胞(MCF7及T47D)ER、PR的表達具有影響,沉默Pokemon可抑制ER、PR核酸轉(zhuǎn)錄及蛋白水平的表達;2.通過雙熒光素酶報告基因活性實驗發(fā)現(xiàn)沉默Pokemon可抑制MCF7細胞中ERa66啟動子的活性表達;3.分別采取100例人非特殊型浸潤性乳腺導管癌組織及10例邊緣組織和50例不同病理類型的人乳腺癌及50例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織進行免疫組化染色并分析三者之間的相關(guān)性,實驗結(jié)果表明在不同病理類型的人乳腺癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織中Pokemon與ER、PR的表達水平具有顯著正相關(guān)。(P0.05)結(jié)論1)沉默Pokemon可抑制乳腺癌細胞(MCF7及T47D)中ER、PR的表達,機制可能與沉默Pokemon能抑制ER啟動子活性從而下調(diào)ER表達水平有關(guān)。2)在人乳腺癌組織及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織中,Pokemon與ER、PR的表達具有顯著正相關(guān)。
【學位單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R737.9
【部分圖文】：

第 4 章 實驗結(jié)果第 4 章 實驗結(jié)果4.1 驗證 Pokemon siRNA 對乳腺癌 MCF7 和 T47D 細胞沉默效果為了驗證所選擇 siRNA 在兩細胞系中對 Pokemon 的沉默效果，我們將Pokemon siRNA 通過瞬時轉(zhuǎn)染至乳腺癌 MCF7 及 T47D 細胞中，48 小時后，通過免疫蛋白印跡實驗方法檢測這二者細胞系中 Pokemon 的表達情況，可以看出，以β-acting 作為參照，轉(zhuǎn)染 siRNA 后有效干擾了 MCF7 和 T47D 細胞中 Pokemon 蛋白的表達水平（圖 4.1），說明所選擇的 Pokemon siRNA 具有良好的 Pokemon 沉默效果。

究4.2.1 沉默 Pokemon 抑制乳腺癌 MCF7 和 T47D 細胞 ER、PR 的核酸轉(zhuǎn)錄水平為了探究沉默 Pokemon 對乳腺癌 MCF7 和 T47D 細胞中 ER、PR 核酸轉(zhuǎn)錄效應的影響，我們通過瞬時轉(zhuǎn)染 Pokemon siRNA 分別至 MCF7 及 T47D 細胞中，48 小時后，提取 RNA 并逆轉(zhuǎn)錄成 cDNA，通過熒光實時定量 PCR 儀檢測對照組(con)及實驗組(siRNA）中的 Pokemon、ER 和 PR 的 mRNA 表達情況，實驗結(jié)果顯示：實驗組中 Pokemon mRNA 的轉(zhuǎn)錄水平較對照組明顯下降（圖 4.2），敲低 Pokemon 的實驗組 ER mRNA 含量較對照組顯著下降(圖 4.3)；PR 的 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平也隨之降低（圖 4.4）。經(jīng)過統(tǒng)計學分析證實沉默 Pokemon 可抑制乳腺癌 MCF7 和 T47D 細胞中 ERa66、PR 的核酸的轉(zhuǎn)錄水平，差異具有統(tǒng)計學意義（p＜0.01）。

圖 4.3 沉默 Pokemon 可抑制乳腺癌 MCF7 和 T47D 細胞中 ERa66 mRNA 水平的表達注：con 組：對照組，siRNA 組：實驗組，瞬時轉(zhuǎn)染 Pokemon siRNA48 小時后，n=3，***P < 0.001，**P < 0.01表4.2 Pokemon 對乳腺癌MCF7和T47D細胞中ERa66核酸轉(zhuǎn)錄水平影響(Mean±SD)組別 核酸轉(zhuǎn)錄水平MCF7cell con 0.4902±0.0178siRNA 0.1253±0.0025T47Dcell con 0.1114±0.0045siRNA 0.0580±0.0045
【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 郭奕陽;朱彩虹;郭秀娟;;人表皮生長因子受體2陽性乳腺癌與抗人表皮生長因子受體2新型藥物[J];河北醫(yī)科大學學報;2018年01期

2 閆東;;人表皮生長因子受體3在人表皮生長因子受體2陽性乳腺癌組織中的表達[J];腫瘤基礎與臨床;2017年06期

3 張青;甘淋;;乳腺癌生物標志物的研究進展[J];生命的化學;2018年01期

4 張斌;梁愛玲;劉勇軍;;外泌體在乳腺癌中耐藥機制的研究進展[J];中國醫(yī)藥生物技術(shù);2018年02期

5 張國強;劉增艷;王曉紅;楊振林;;血清微小RNA-409-3p表達在乳腺癌早期診斷中的價值[J];江蘇醫(yī)藥;2018年04期

6 王晨飛;胡浩霖;呂建鑫;張亞男;;乳腺癌侵襲相關(guān)分子的研究熱點[J];東南大學學報(醫(yī)學版);2018年04期

7 童彤;;草莓能抑制乳腺癌擴散[J];中國果業(yè)信息;2017年05期

8 陳暢;黃欣;茅楓;周易冬;林燕;孫強;;乳腺癌眼部轉(zhuǎn)移的診治現(xiàn)狀[J];中華乳腺病雜志(電子版);2018年05期

9 易堅;劉志勇;劉鳳恩;;二氫丹參酮Ⅰ抑制乳腺癌細胞生長的機制[J];廣東醫(yī)學;2016年22期

10 夏超;鄭馬慶;劉媛;陳群英;陳妍;黃新恩;許瀟月;沈波;;槲寄生抗腫瘤有效成份提取及其對乳腺癌細胞的抑制作用[J];南京醫(yī)科大學學報(自然科學版);2016年11期

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 馬蕓;乳腺癌組織中FANCF相關(guān)基因的表達及其與順鉑耐藥的作用機制研究[D];昆明醫(yī)科大學;2018年

2 趙建華;MRI動態(tài)增強聯(lián)合鉬靶在乳腺癌早期診治臨床路徑中的價值研究[D];南方醫(yī)科大學;2017年

3 李俊堂;miR-568抑制乳腺癌細胞體內(nèi)外轉(zhuǎn)移機制的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2014年

4 王秋麗;攜帶自殺基因Dm-dNK和CD40L的選擇復制型腺病毒對乳腺癌殺傷作用的研究[D];中國醫(yī)科大學;2018年

5 徐璐;袢狀核酸內(nèi)切酶FEN1參與乳腺癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移及他莫昔芬耐藥的機制研究[D];中國醫(yī)科大學;2018年

6 林姝;miR-30c和miR-181a調(diào)控腫瘤阿霉素耐藥與發(fā)生發(fā)展的機制研究[D];中國醫(yī)科大學;2018年

7 劉崇;SALL4與乳腺癌生物學行為的相關(guān)性及影響乳腺癌阿霉素耐藥性的機制研究[D];中國醫(yī)科大學;2018年

8 楊得娟;乳腺癌細胞分解利用脂肪細胞來源的脂質(zhì)促進自身惡性發(fā)展的研究探討[D];重慶醫(yī)科大學;2017年

9 劉蜀;MAP2K4在乳腺癌中的表達、功能及分子機制的初步研究[D];南方醫(yī)科大學;2018年

10 劉鵬英;Prohibitin對雌激素受體陽性乳腺癌中雄激素受體表達調(diào)控的研究[D];南方醫(yī)科大學;2018年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 張艾潔;黃芩苷對高侵襲性乳腺癌的作用及分子機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2017年

2 于鶴;同一觀察者對乳腺癌Ki67免疫組化檢測結(jié)果判讀重復性研究[D];昆明醫(yī)科大學;2018年

3 董程程;EZH2相互作用蛋白在乳腺癌細胞中功能研究[D];桂林醫(yī)學院;2018年

4 張恒瑀;ING3過表達對乳腺癌細胞生物學特性影響[D];昆明醫(yī)科大學;2018年

5 楊德春;血尿酸水平與乳腺癌臨床相關(guān)性研究[D];昆明醫(yī)科大學;2018年

6 陳婉;阿霉素及其納米載藥系統(tǒng)在敏感及耐藥乳腺癌中的抗癌作用及機制研究[D];浙江大學;2016年

7 陳趣;IL-6R mRNA對卵巢癌、肺癌和乳腺癌的預后作用研究[D];蘇州大學;2018年

8 謝逸;1,25(OH)_2D_3通過調(diào)節(jié)Ras表達干預乳腺癌細胞增殖、凋亡的實驗研究[D];湖南師范大學;2018年

9 杜佩云;MiR-296-5p/GAB對雌激素信號通路的調(diào)節(jié)及功能研究[D];福建農(nóng)林大學;2015年

10 黃竹媛;MRI聯(lián)合USPIO示蹤技術(shù)對乳腺癌骨轉(zhuǎn)移早期發(fā)現(xiàn)的實驗研究[D];山西醫(yī)科大學;2018年

本文編號：2884234