發(fā)布時(shí)間：2020-11-03 05:28

　　 目的:探討玻璃化凍存活檢腫瘤組織的可行性和有效性,嘗試基于薄層切片體外培養(yǎng)技術(shù)建立一種全新高效的體外抗腫瘤藥敏實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ�。方�?從仁濟(jì)醫(yī)院腫瘤介入科獲取直腸癌肝轉(zhuǎn)移活檢組織,并作玻璃化凍存處理,復(fù)蘇后組織用于建立直腸癌肝轉(zhuǎn)移人源性移植瘤模型。將移植瘤切割成300μm厚度切片,嵌取直徑2mm的組織圓片。組織圓片于Transwell表面培養(yǎng)24小時(shí)后,向培養(yǎng)液中分別添加抗腫瘤藥物奧沙利鉑(20μM)和瑞格菲尼(20μM),充分反應(yīng)72小時(shí)。利用復(fù)蘇后組織建立人源性移植瘤模型,分別腹腔注射200μl抗腫瘤藥物奧沙利鉑(5mg/kg)和瑞格菲尼(30mg/kg)。通過CCK-8實(shí)驗(yàn)和Calcein-AM活細(xì)胞染色/Hoechst33342染色實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞生物學(xué)活性變化;通過蘇木紫伊紅染色實(shí)驗(yàn)檢測組織學(xué)結(jié)構(gòu)變化;通過免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖與凋亡情況。結(jié)果:玻璃化凍存法可以有效保持直腸癌肝轉(zhuǎn)移活檢組織的生物學(xué)活性,體外薄層切片培養(yǎng)技術(shù)可以高度保留原始腫瘤的三維結(jié)構(gòu)和組織異質(zhì)性。新鮮的腫瘤活檢組織和復(fù)蘇后活檢組織均可建立人源性移植瘤模型,且體內(nèi)外藥敏反應(yīng)結(jié)果具有一致性。結(jié)論:直腸癌肝轉(zhuǎn)移活檢腫瘤組織可以被有效凍存,其生物學(xué)活性和組織學(xué)特征得以高度保留,復(fù)蘇組織薄層切片可以作為一種新型的、高效的體外藥敏實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?br> 【學(xué)位單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R735.7
【文章目錄】：
摘要
英文摘要
符號(hào)及縮略詞說明
1 緒論
2 材料與方法
    2.1 主要儀器和器械
    2.2 實(shí)驗(yàn)藥品
    2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 活檢組織的收集與處理
        2.4.2 凍存和復(fù)蘇操作流程
        2.4.3 組織薄層切片的制備和體外培養(yǎng)
        2.4.4 PDX 的建立
        2.4.5 CCK-8 實(shí)驗(yàn)
        2.4.6 Calcein 細(xì)胞活力測定及 Hoechst 33342 染色實(shí)驗(yàn)
        2.4.7 H&E染色
        2.4.8 IHC染色
        2.4.9 統(tǒng)計(jì)與分析
3 結(jié)果
    3.1 玻璃化凍存法可保留活檢腫瘤組織的生物學(xué)特性
    3.2 薄層切片可保留原始腫瘤完整的三維結(jié)構(gòu)和組織異質(zhì)性
    3.3 PDX 模型的體內(nèi)藥敏反應(yīng)與體外薄層切片培養(yǎng)具有一致性
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
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【參考文獻(xiàn)】

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