發(fā)布時(shí)間：2020-10-30 04:59

　　 結(jié)直腸癌(CRC)是全世界的第三大癌癥,該疾病的發(fā)生伴隨極高的死亡率。目前,手術(shù)的治療方法是最常使用的方式,且輔助以化療、放療可以將5年后患者總存活率提高20%至33%。然而,癌癥治療過程中的化療抑制劑和放療輻射對正常組織細(xì)胞產(chǎn)生強(qiáng)烈的破壞作用,并在細(xì)胞水平誘導(dǎo)復(fù)雜的反應(yīng)。靶向藥物為人類癌癥疾病的治療提供了新的機(jī)會。膽囊收縮素(CCK)為一種肽類的激素,它由兩種分別在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周器官中產(chǎn)生活性的G蛋白偶聯(lián)受體CCKAR和CCKBR介導(dǎo),從而調(diào)節(jié)消化酶的分泌作用。其中,CCKBR已被證明在CRC中廣泛表達(dá),并且據(jù)報(bào)道,CCKBR蛋白在惡化癌癥細(xì)胞的增殖過程中起重要的生物功能。然而,CCKBR的表達(dá)水平與CRC的臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性并不十分清楚。本實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建了一種新型靶向重組毒素rCCK8PE38。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,該重組毒素對CCKBR過表達(dá)的HCT-116結(jié)腸癌細(xì)胞產(chǎn)生良好的靶向殺傷毒性。經(jīng)體內(nèi)抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)證明,rCCK8PE38可以有效抑制CRC腫瘤大小。目前,該研究正在進(jìn)行rCCK8PE38重組毒素的臨床前研究。在進(jìn)入臨床研究之前,建立CRC靶向病例的篩查方法,有利于對rCCK8PE38適用病例進(jìn)行針對性治療。由于rCCK8PE38是針對CCKBR的靶向毒素,因此,我們采用熒光定量PCR和Western-blot分別建立CCKBR在基因水平和蛋白質(zhì)水平的分子診斷方法,并通過細(xì)胞殺傷試驗(yàn)驗(yàn)證CCKBR表達(dá)量與rCCK8PE38靶向毒素的殺傷活性關(guān)系。細(xì)胞水平結(jié)果表明,CCKBR在多種CRC細(xì)胞系及胃癌細(xì)胞系中高表達(dá),且基因水平和蛋白質(zhì)水平檢測結(jié)果基本一致;rCCK8PE38靶向重組毒素特異性靶向殺傷CCKBR高表達(dá)的結(jié)直腸癌細(xì)胞系,但對CCKBR高表達(dá)的胃癌細(xì)胞系不敏感;將CCKBR表達(dá)量與細(xì)胞系背景來源數(shù)據(jù)相結(jié)合發(fā)現(xiàn),CCKBR表達(dá)量與性別、P53水平以及角蛋白水平相關(guān);盡管細(xì)胞水平的試驗(yàn)從樣本數(shù)量到反映類型并不能完全代替實(shí)際樣本分析,但其結(jié)果對臨床分析的方向提供了指示作用。通過病例標(biāo)本檢測對rCCK8PE38的篩查方法進(jìn)行驗(yàn)證與優(yōu)化。癌癥病例結(jié)果顯示,70例CRC患者癌組織中CCKBR陽性率及弱陽性率約為48.2%;CCKBR過表達(dá)易發(fā)生于男性、黏液癌和P53水平高于70%的CRC病例;組織原代分離結(jié)果證明,rCCK8PE38可以有效靶向CCKBR陽性CRC細(xì)胞并產(chǎn)生明顯的腫瘤殺傷效果。此外,本研究探尋了rCCK8PE38的血漿微創(chuàng)診斷方法,研究結(jié)果表明,血漿檢測較組織檢測靈敏程度偏低,但陽性準(zhǔn)確率較高,可以作為CRC組織檢測技術(shù)的輔助檢測手段�？傊�,rCCK8PE38靶向毒素可以特異性結(jié)合并殺傷CCKBR高表達(dá)的結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞及組織。該靶向毒素的適用病例篩查可以通過分析CRC患者性別、癌癥組織學(xué)分類以及P53組化進(jìn)行初篩,并結(jié)合血漿檢測共同篩查rCCK8PE38的適用病例。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R735.34
【部分圖文】：

圖 3.1 結(jié)直腸癌的診斷型分子標(biāo)志物Fig. 3.1 Diagnosis molecular markers of colorectal cancer

CCKBR目的基因擴(kuò)增Fig.1.1ThetargetgeneamplificationofCCKBR

β-actin目的基因擴(kuò)增Fig.1.2Thetargetgeneamplificationofβ-actin
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 杜小風(fēng);楊文奇;李霆;;腹腔鏡與開腹直腸癌根治術(shù)圍手術(shù)期并發(fā)癥及預(yù)后比較[J];安徽醫(yī)學(xué);2015年06期

2 李江英;白雪娟;梁艷;張俊仙;陽幼榮;趙衛(wèi)國;吳雪瓊;;用DNAStar軟件預(yù)測Rv1410c結(jié)核分枝桿菌蛋白抗原表位[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2015年04期

3 李道娟;李倩;賀宇彤;;結(jié)直腸癌流行病學(xué)趨勢[J];腫瘤防治研究;2015年03期

4 宗禾;;直擊癌癥五大誤區(qū)[J];四川黨的建設(shè)(城市版);2015年03期

5 吉星煜;張晶;張?jiān)?常麗云;左玉柱;秦建華;趙月蘭;;牛病毒性腹瀉病毒HB-bd毒株E2基因的克隆表達(dá)及免疫原性分析[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2015年01期

6 張苗;郭瑞芳;;胃泌素的生物合成與作用機(jī)制的相關(guān)研究進(jìn)展[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志;2014年11期

7 陳萬青;張思維;曾紅梅;鄭榮壽;鄒小農(nóng);趙平;吳良有;李光琳;赫捷;;中國2010年惡性腫瘤發(fā)病與死亡[J];中國腫瘤;2014年01期

8 許劍民;任黎;;結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移診斷和綜合治療指南(V2013)[J];中國實(shí)用外科雜志;2013年08期

9 陳志剛;鐘鳴;;西妥昔單抗聯(lián)合FUFOX方案治療轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌臨床療效評估[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2011年24期

10 盧麗琨;田利源;汪莉;;人源化免疫毒素的研究進(jìn)展[J];國際藥學(xué)研究雜志;2009年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 馮小麗;高效靶向CCK2R重組毒素的篩選、抗腫瘤活性及適用胃癌病例分析[D];吉林大學(xué);2015年

2 譚斌斌;基于代謝組學(xué)和糖組學(xué)技術(shù)的結(jié)直腸癌研究[D];上海交通大學(xué);2014年

3 黃朝暉;血漿microRNA用于結(jié)直腸癌診斷的研究及miR-95促進(jìn)結(jié)直腸癌生長的機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

4 鮑傳慶;大腸癌患者自體樹突狀細(xì)胞免疫治療技術(shù)臨床應(yīng)用研究[D];蘇州大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 張嵩;重組免疫毒素rCCK_(96-104)PE38的制備及其抗結(jié)腸癌作用[D];吉林大學(xué);2017年

2 戴玢冬;核酸適配體介導(dǎo)的載有阿霉素的DNA四面體對MUC1陽性腫瘤細(xì)胞的靶向殺傷作用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

3 肖著軍;甲基化敏感的高分辨率熔解曲線分析（MS-HRM）檢測糞便DNA甲基化在大腸癌篩查中的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

本文編號：2862022