目的:胃癌是嚴(yán)重威脅人們健康與生命的常見惡性腫瘤。為了解其發(fā)病機(jī)制,課題組前期采用定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),從胃粘膜癌變不同階段篩選獲得了組織型轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(Tissue Transglutaminase,TGM2)蛋白,進(jìn)一步了解該蛋白在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制,可為闡明胃癌發(fā)病的分子機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)資料。方法:1、構(gòu)建TGM2干擾質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染MGC803細(xì)胞,篩選后建立沉默TGM2表達(dá)MGC803細(xì)胞系;2、采用Western-blot與細(xì)胞免疫熒光方法檢測(cè)MGC803細(xì)胞中TGM2蛋白的表達(dá);3、運(yùn)用細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、平皿克隆與軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞儀等,觀察沉默TGM2表達(dá)對(duì)MGC803細(xì)胞生長(zhǎng)與增殖、周期與凋亡的影響。結(jié)果:1、構(gòu)建了pcDNA6.2-GW/EmGFP-Sin-TGM2干擾質(zhì)粒。2、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線結(jié)果顯示:MGC803-Sin-TGM2細(xì)胞的生長(zhǎng)速度較對(duì)照組MGC803與MGC803-pcDNA6.2細(xì)胞明顯減慢,結(jié)果說(shuō)明MGC803細(xì)胞中沉默TGM2表達(dá)后,細(xì)胞生長(zhǎng)與增殖受到抑制(P0.01);3、平皿克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:MGC803-Sin-TGM2細(xì)胞與對(duì)照組MGC803和MGC803-pcDNA6.2細(xì)胞的克隆數(shù)分別為96±12、282±25和294±38(個(gè)),MGC803-Sin-TGM2細(xì)胞形成克隆數(shù)目較對(duì)照組明顯減少,且克隆體積小,結(jié)果說(shuō)明MGC803細(xì)胞中沉默TGM2表達(dá)后,細(xì)胞的克隆形成能力明顯降低(P0.01);4、軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:MGC803-Sin-TGM2細(xì)胞與對(duì)照組MGC803和MGC803-pcDNA6.2細(xì)胞的集落數(shù)分別為124±35、542±54和568±66(個(gè)),MGC803-Sin-TGM2細(xì)胞形成的集落較對(duì)照組明顯減少,且克隆體積小,結(jié)果說(shuō)明MGC803細(xì)胞中沉默TGM2表達(dá)后,細(xì)胞的集落形成能力明顯降低(P0.01);5、流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示:MGC803-Sin-TGM2細(xì)胞S期(%)細(xì)胞比為15.77±2.14,G1期(%)細(xì)胞比為82.96±6.46,細(xì)胞增殖指數(shù)為17.05;MGC803細(xì)胞S期(%)細(xì)胞比為42.15±3.24,G1期(%)細(xì)胞比為45.41±2.42,細(xì)胞增殖指數(shù)為54.60;而MGC803-pcDNA6.2細(xì)胞S期(%)細(xì)胞比為38.95±3.25,G1期(%)細(xì)胞比為46.58±2.56,細(xì)胞增殖指數(shù)為53.42,結(jié)果說(shuō)明MGC803細(xì)胞中沉默TGM2表達(dá)后,細(xì)胞中S期細(xì)胞比例明顯減少,G1細(xì)胞比例增加,細(xì)胞增殖指數(shù)降低(P0.01);同時(shí),MGC803-Sin-TGM2、MGC803與MGC803-pcDNA6.2細(xì)胞的凋亡率降分別為35.94±3.45、18.28±2.56與12.84±2.13,結(jié)果說(shuō)明MGC803細(xì)胞中沉默TGM2表達(dá)后,細(xì)胞的凋亡率增加(P0.01)。結(jié)論:沉默TGM2表達(dá),MGC803細(xì)胞增殖指數(shù)降低,細(xì)胞凋亡增加,細(xì)胞生長(zhǎng)與增殖抑制。
【學(xué)位單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R735.2
【部分圖文】：

圖 4-1 pcDNA6.2-GW/EmGFP-Sin-TGM2 質(zhì)粒的測(cè)序鑒定A：pcDNA6.2-GW/EmGFP-Sin-TGM2-1部分測(cè)序圖。B：pcDNA6.2-GW/EmGFP-Sin-TGM2-2部分測(cè)序圖。C：pcDNA6.2-GW/EmGFP-Sin-TGM2-3部分測(cè)序圖。

C803-Sin-TGM2 細(xì)胞中 TGM2 蛋白表達(dá)的鑒定 MGC803-Sin-TGM2 細(xì)胞的克隆圖。A6.2-GW/EmGFP-Sin-TGM2 在 MGC803 細(xì)胞中的干擾W/EmGFP-Sin 細(xì)胞比較，P<0.01。

圖 4-3 MGC803-Sin-TGM2 細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線*與 MGC803 和 MGC803-pcDNA6.2 細(xì)胞比較，P<0.01。實(shí)驗(yàn)檢測(cè)沉默 TGM2 表達(dá)對(duì) MGC803 細(xì)胞
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 張志偉;胃粘膜上皮癌變相關(guān)蛋白質(zhì)分子的篩選與鑒定[D];南華大學(xué);2015年

本文編號(hào)：2843520