目的1、從膀胱癌細(xì)胞株中篩選出與膀胱癌進(jìn)展相關(guān)的高表達(dá)基因；2、探討胞苷脫氨酶(cytidine deaminase, CDA)在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)情況,并研究CDA與臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系；3、通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究CDA對(duì)膀胱癌細(xì)胞侵襲能力、干性能力的影響。方法1、應(yīng)用transwell法建立膀胱癌5637細(xì)胞系低侵襲能力(5637-NM)和高侵襲能力(5637-HM)細(xì)胞株,通過(guò)芯片檢測(cè)不同侵襲能力細(xì)胞株中差異表達(dá)基因,分析后確定研究對(duì)象。2、應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR (RT-qPCR)、蛋白質(zhì)印跡法(Weatern blot)分別檢測(cè)10對(duì)膀胱尿路上皮癌組織及其癌旁正常尿路上皮組織中CDA的表達(dá)情況；通過(guò)GEO數(shù)據(jù)庫(kù)分析膀胱尿路上皮癌組織及正常尿路上皮組織中CDA的表達(dá)情況；應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)(immunohistochemistry, IHC)檢測(cè)30例膀胱尿路上皮癌組織中CDA的表達(dá)情況,應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析其表達(dá)量與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系,以及對(duì)患者預(yù)后的影響。3、體外實(shí)驗(yàn)中,應(yīng)用siRNA干擾膀胱癌5637 HM細(xì)胞株中CDA的表達(dá)。通過(guò)transwell實(shí)驗(yàn)研究其對(duì)膀胱癌細(xì)胞侵襲能力的影響；通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)、成球?qū)嶒?yàn)檢測(cè)其對(duì)膀胱癌細(xì)胞干性能力的影響。結(jié)果1、芯片結(jié)果顯示CDA等基因在高侵襲能力膀胱癌細(xì)胞系中異常高表達(dá),CDA被確定為研究對(duì)象。2、RT-qPCR組10對(duì)膀胱癌組織及其癌旁正常尿路上皮中,7對(duì)(70%)膀胱癌組織中CDA的表達(dá)量高于其癌旁組織,2對(duì)(20%)無(wú)明顯變化,僅1對(duì)(10%)下降。Weaternblot組10對(duì)膀胱癌組織及其癌旁正常尿路上皮中,8對(duì)(80%)膀胱癌組織中CDA的表達(dá)量高于癌旁正常尿路上皮組織中的表達(dá)量。GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中,CDA在肌層浸潤(rùn)性膀胱癌的患者亞群中呈高表達(dá)。IHC組30例膀胱癌組織中CDA的表達(dá)與膀胱癌肌層進(jìn)展與否有關(guān),生存分析結(jié)果顯示,CDA高表達(dá)的患者總體生存率低于CDA低表達(dá)的患者,提示CDA可能會(huì)成為膀胱癌的預(yù)后指標(biāo)。3、體外實(shí)驗(yàn)顯示,CDA下調(diào)后,膀胱癌侵襲能力顯著減弱；干性相關(guān)標(biāo)志物CD44,HMGA2, SOX-2等有下調(diào)趨勢(shì)。流式細(xì)胞術(shù)和成球?qū)嶒?yàn)證實(shí)CDA的缺失會(huì)減弱膀胱癌細(xì)胞的干性能力。提示CDA可能通過(guò)改變膀胱腫瘤細(xì)胞的干性,進(jìn)而影響腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的能力。結(jié)論1、膀胱尿路上皮癌中CDA異常高表達(dá),且與腫瘤浸潤(rùn)程度相關(guān),提示CDA可能參與了膀胱癌的發(fā)生和發(fā)展,是一個(gè)新的腫瘤標(biāo)記物,并有助于膀胱癌的預(yù)后評(píng)估。2、體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)CDA下調(diào)可以減弱膀胱癌細(xì)胞的干性能力,抑制膀胱癌細(xì)胞的侵襲能力。
【學(xué)位單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：R737.14
【部分圖文】：

東南大學(xué)碩±學(xué)位論文??無(wú)明顯變化，無(wú)明顯下降組。提示ＣＤＡ可能是膀腕癌的癌基因。詳見(jiàn)圖２－１－Ｂ。??１．３?ＧＥＯ數(shù)據(jù)庫(kù)中ＣＤＡ在肌層浸潤(rùn)性膀脫癌中商表達(dá)??檢索ＧＥＯ數(shù)據(jù)庫(kù)，探索ＣＤＡ在膀脫癌及膀腕正常組織中的表達(dá)情況，通過(guò)??對(duì)編號(hào)為ＧＳＥ３１６７／２０５６２７＿ａｔ的探針結(jié)果進(jìn)行分析，我們發(fā)現(xiàn)ＣＤＡ在正常尿路上??皮（Ｎｏｒｍａｌ?Ｕｒｏｔｈｅｌｉｕｍ?Ｍｕｃｏｓａ）、原位癌（ＣＩＳ）、淺表性膀脫癌中的表達(dá)并無(wú)??差異，但ＣＤＡ在肌層浸潤(rùn)性膀腕癌的亞群中呈高表達(dá)（見(jiàn)圖２－１－Ｃ），且這種高??表達(dá)相對(duì)于淺表性膀脅癌具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Ｐ〈〇．?０５）。??ＡＣ?．．．巧口??ＣＤＡ?ｓ????化?品方戶逆Ｓ???心猶５???Ｓ?３５．?Ｔ３?＾?下??－Ｓ?—；?Ｉ??臺(tái)?＊?Ｉ?５?ｒ＊－｜??Ｋ巧ｉ?■?．?Ｉ、換??重６下?Ｔ２ｂ?Ｉ?—至?烏呂百百里巧ＵＪ??妄?４－?—＾?Ｉ?１?Ｔ化??????????ｒＪ??？２?Ｔ２，?瞻■?，?■?—Ｎｅｒｔｉｘｔ?說(shuō)?ＶｔＢＣ??茫?ｏＳ＾ｏｌｏＭｃｉｉｏｌｏｔｏｉ?一化－ｗ??�。�?ｆＵ?ｗｊ?Ｕ?Ｕ?Ｕ?＾?ｆｌ］?＜Ｎ．，?ｗ。ｗ？巧（？？ｗ?（＂？■々州－巧??０￥?ＯＳ?的?０４?ＯＪ?１０?０７?０９?０２?０，??Ｂ?＿〇Ｌ?＿Ｑ２＿?＿０３＿?Ｍ?Ｑ５＿?＿０６＿?＿〇Ｌ?〇８?０９＿?１０??ＮＴＮＴ?ＮＴＮＴＮＴＮＴ?ＮＴ?ＮＴＮＴＮＴ??ＣＤＡ?＊ｗ？?ｍ０ｉｍ?■?／－ｉ－？?＊＇？?？

表達(dá)沒(méi)有明顯改變。同時(shí)，我們檢測(cè)ＡＬＤＨ１Ａ１、ＣＤ４４、ＨＭＧＡ２、ＫＬＦ４、Ｓ０Ｘ－２??等腫瘤干性相關(guān)蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示ＣＤ４４、ＨＭＧＡ２、Ｓ０Ｘ－２在ＣＤＡ敲降株??里表達(dá)有下降趨勢(shì)。詳見(jiàn)圖３－２。??５６３７?ＨＭ??ｓｉＮＣ??ＣＤＡ?．??Ｅ－Ｃａｄｈｃｉｉｎ?＂禱綱疇麵錄??Ｎ－Ｃａｄｈｅｉｉｎ?？??Ｖｉｍｅ口ｔｉ口?善一Ｆ?ｍｍｍｍ?ｍｍｍｍ??ＡＬＤＨｌ?編圓辭卿咖撕痛嚇寒??ＣＤ４４?＾?ｉｌＭｌ??ＨＭＧＡ２補(bǔ)難翁譜伊贍??１／１?ＣＡ?，化?１?叫―４ＷＷＩＩＷ—，??．．…－＂ｌｌｔｍｉｉｍｍ＇?峽??Ｓ０Ｘ－２?ｍｍ?ｍｍｍ??（Ｊ－Ａｃｔｉｎ??圖３－２．?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ驗(yàn)證巧Ａ對(duì)膀脫癌細(xì)施ＥＭＴ、干性相關(guān)標(biāo)志物表達(dá)的影響??隨后，通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)，我們檢測(cè)了?ＣＤＡ敲降株和對(duì)照株里ＡＬＤＨ１Ａ１、??ＣＤ４４陽(yáng)性表達(dá)的情況。結(jié)果顯示，ＣＤＡ敲降株的ＡＬＤＨ１Ａ１陽(yáng)性率明顯降低，??而ＣＤ４４的陽(yáng)性率稍有下降。提示ＣＤＡ下調(diào)會(huì)引起膀脫癌細(xì)胞株干性能力顯著??下降。詳見(jiàn)圖３－３，圖３－４。??３８??

困３－４．流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)５６３７?ＨＭ細(xì)胞在巧降ＣＭ后細(xì)化表面標(biāo)志ＣＤ４４的陽(yáng)性比率??成球?qū)嶒?yàn)是較為經(jīng)典的從細(xì)胞學(xué)水平反巧腫瘤細(xì)胞干性能刀的實(shí)驗(yàn)，能反峽??細(xì)胞總體的干性維持能力。在相同環(huán)境和時(shí)間條件下，可見(jiàn)敲降ＣＤＡ后，膀脫??癌細(xì)胞的成球體積明濕小與對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。＜化０５）。提示ＣＤＡ表??達(dá)的下降能相應(yīng)地減弱腫瘤細(xì)胞的干性能力。????５６３７?ＨＭ???ｓｉＮＣ?Ｓｉｌ＃?Ｓｉ２＃?，＂，＂＂??２〇〇．?＾２００ｕｍ??ｍ?２０ＣＭ００ｕｎ??咖曲曲：；，？－－極??ＢｉＳＩＭ?ｉＳｉｉｆｌＶ?。編…＂ａ??圍３－５．成巧實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)ＣＭ對(duì)膀化痛細(xì)胞干住能力的巧喃??
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 韓蘇軍;張思維;陳萬(wàn)青;李長(zhǎng)嶺;;中國(guó)膀胱癌發(fā)病現(xiàn)狀及流行趨勢(shì)分析[J];癌癥進(jìn)展;2013年01期

本文編號(hào)：2842099