目的:利用噬菌體隨機七肽庫體外篩選能與人膀胱癌EJ細胞特異性結(jié)合的小分子多肽,為膀胱癌的早期診斷和靶向治療提供理論基礎(chǔ)。方法:以膀胱癌細胞系EJ為靶細胞,人正常膀胱移行上皮細胞為吸附細胞,對噬菌體隨機七肽庫進行3輪體外減性篩選;隨機挑取30個陽性噬菌體克隆,用ELISA法鑒定其與EJ細胞結(jié)合的特異性;對陽性噬菌體克隆進行測序分析;采用固相化學(xué)合成法制備EJ細胞導(dǎo)向肽及其對照肽;通過MTT試驗和細胞損傷修復(fù)實驗研究該膀胱腫瘤導(dǎo)向肽對EJ細胞生長的影響。結(jié)果:1、經(jīng)過3輪“篩選-擴增-再篩選”,與EJ細胞特異結(jié)合的噬菌體得到高度富集,回收率也增加了近200倍。2、ELISA法鑒定結(jié)果顯示,特異性結(jié)合系數(shù)≥2的陽性噬菌體克隆共有17個。3、測序結(jié)果顯示,其中R2、R5、R9、R12、R16、R17、R21、R24八個噬菌體克隆的序列均為AVEAAKT,該肽段重復(fù)率最高且無同源性。4、制備了EJ細胞導(dǎo)向肽AVEAAKT及其對照肽,純度達95%。5、MTT試驗結(jié)果顯示,該膀胱腫瘤導(dǎo)向肽及其對照肽的相對抑制率均低于30%,細胞損傷修復(fù)實驗結(jié)果顯示,單位時間內(nèi),各組細胞表現(xiàn)出相同的生長趨勢,從而證實了該膀胱腫瘤導(dǎo)向肽對EJ細胞的生長幾乎無影響。結(jié)論:本實驗利用噬菌體展示技術(shù)體外篩選獲得了能與人膀胱癌EJ細胞特異性結(jié)合的小分子多肽AVEAAKT,并證實了該多肽對EJ細胞的生長幾乎無影響。經(jīng)查該肽段與已知蛋白尚無同源性,因此它很有可能為膀胱癌的早期診斷和靶向治療提供新的思路。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.14
【部分圖文】：

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié) 果1.細胞培養(yǎng)人移行性膀胱癌 EJ 細胞和正常膀胱黏膜上皮細胞常規(guī)培養(yǎng)于含 1%雙抗、10%FBS 的 RPMI-1640 培養(yǎng)液中，在普通光學(xué)顯微鏡下觀察可見細胞貼壁生長，狀態(tài)良好，細胞膜完整、胞漿飽滿，EJ 細胞多呈梭形(圖 1)，人膀胱正常上皮細胞多呈不規(guī)則形(圖 2)。

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié) 果1.細胞培養(yǎng)人移行性膀胱癌 EJ 細胞和正常膀胱黏膜上皮細胞常規(guī)培養(yǎng)于含 1%雙抗、10%FBS 的 RPMI-1640 培養(yǎng)液中，在普通光學(xué)顯微鏡下觀察可見細胞貼壁生長，狀態(tài)良好，細胞膜完整、胞漿飽滿，EJ 細胞多呈梭形(圖 1)，人膀胱正常上皮細胞多呈不規(guī)則形(圖 2)。

圖 3. ELISA 法鑒定噬菌體克隆與 EJ 細胞的結(jié)合情況菌體單鏈 DNA 的測序及分析 17 個陽性噬菌體的 DNA 測序結(jié)果顯示，R2、R5、R9、R12、R24 八個噬菌體克隆的序列均為 AVEAAKT（圖 4），R6、R20、隆的序列均為 SILPVTR，R11 噬菌體克隆測序失敗，其他噬間無重復(fù)（表 2）。登錄 NCBI/BLAST 網(wǎng)站，選擇 protein b析，結(jié)果顯示，AVEAAKT 與現(xiàn)有的基因和蛋白質(zhì)無同源性。R1R2R3R4R5R6R7R8R9R10R11R12R13R14R15R16R17R18R19R20R21R22R23R24R25R26R27R28
【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉安偉;許傳亮;;長鏈非編碼RNA:膀胱癌研究的新熱點[J];上海醫(yī)學(xué);2018年01期

2 樊長暉;許長寶;郝斌;吳國清;趙興華;;缺氧下膀胱癌細胞黏附能力和侵襲能力的變化[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2017年05期

3 葉濤;葉章群;;膀胱癌研究的新進展[J];現(xiàn)代泌尿生殖腫瘤雜志;2017年04期

4 張川;祝青國;趙亞坤;金承洛;劉偉;陳照彥;杜言凱;仇宇;;雷帕霉素抑制膀胱癌細胞生長及轉(zhuǎn)移的實驗研究[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2012年03期

5 梅志強;劉曉燕;李娟;段承剛;;槲皮素誘導(dǎo)膀胱癌細胞凋亡的機制研究[J];科技資訊;2012年17期

6 陳平鋒;;二烯丙基二硫化物誘導(dǎo)膀胱癌細胞凋亡的研究[J];中國現(xiàn)代醫(yī)生;2012年35期

7 楊德林;宋波;張超;王海峰;王凱;徐鴻毅;;膀胱癌細胞在尿液中適應(yīng)性生存的研究[J];昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2009年06期

8 李功成,張旭,李龍承,葉章群;曲古抑菌素A對膀胱癌細胞的抑制作用及其機制[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2005年07期

9 張睿,張建軍,何祖根,程書鈞,高燕寧;膀胱癌相關(guān)基因的研究進展[J];癌癥;2003年01期

10 賀大林,南勛義,Chang KS,Chung LWK;PML生長抑制因子過表達對膀胱癌細胞生長和克隆能力的影響[J];中華泌尿外科雜志;2001年04期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 許明杰;miR-22在膀胱癌中的抑癌作用及其機制研究[D];浙江大學(xué);2018年

2 張青;miR34a/GOLPH3軸介導(dǎo)膀胱癌干性維持和化療耐藥的機制研究[D];南京大學(xué);2018年

3 黃曉靜;異染色質(zhì)蛋白1γ促進膀胱癌化療耐藥作用機制研究[D];南京大學(xué);2018年

4 王輝;胱抑素C與膀胱尿路上皮腫瘤的臨床病理特征的相關(guān)性分析[D];山東大學(xué);2018年

5 曾蜀雄;ANLN基因在膀胱尿路上皮癌中的作用及機制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2017年

6 張堅;環(huán)氧化酶2在膀胱癌發(fā)生發(fā)展以及治療中的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2003年

7 鄒琳;c-myc和mad1對膀胱癌中人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶的作用及機理研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

8 萬江華;核基質(zhì)蛋白22、細胞角質(zhì)素20和存活素在膀胱癌診斷和復(fù)發(fā)預(yù)測中的價值[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

9 燕翔;Survivin在膀胱癌的表達及其反義基因聯(lián)合重組融合蛋白治療膀胱癌的實驗研究[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

10 王亞軒;人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動子調(diào)控的單純皰疹病毒-胸苷激酶基因重組腺病毒的構(gòu)建及治療膀胱癌的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳芃琛;DAPK在膀胱癌細胞中的表達及功能研究[D];福建師范大學(xué);2017年

2 畢玉行;哺乳動物雷帕霉素靶蛋白mTOR在膀胱癌治療中的作用及研究進展[D];蘭州大學(xué);2018年

3 劉強照;光動力輔助內(nèi)鏡和窄帶成像輔助內(nèi)鏡診斷及治療膀胱癌療效的系統(tǒng)評價和meta分析[D];蘭州大學(xué);2018年

4 柳曉晨;CUL4B在膀胱癌中的作用及其機制初步探究[D];山東大學(xué);2018年

5 龐波;干擾RhoGDI2對膀胱癌T24細胞轉(zhuǎn)移的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

6 易橋勇;利用CRISPR/cas9技術(shù)研究ATF4對膀胱癌細胞生物學(xué)行為的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

7 劉夢男;MicroRNA-612通過靶向調(diào)控ME1抑制膀胱癌細胞的生物學(xué)行為[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2018年

8 逯曉青;利用噬菌體隨機肽庫篩選膀胱癌EJ細胞導(dǎo)向肽的實驗研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2018年

9 朱峰宇;SOX2作為體內(nèi)膀胱癌干細胞標記物的鑒定與研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2018年

10 潘大慶;膀胱癌中GDF15基因啟動子區(qū)甲基化檢測及逆轉(zhuǎn)其甲基化狀態(tài)對5637膀胱癌細胞增殖、遷移、侵襲的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2018年

本文編號：2841196