目的研究長(zhǎng)鏈非編碼RNAMEG3(Maternally expressed gene3)在非諾貝特抑制胰腺癌細(xì)胞中的作用。方法1.培養(yǎng)人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1及SW1990,經(jīng)非諾貝特孵育后MTT法及平板克隆實(shí)驗(yàn)測(cè)定給藥前后兩種細(xì)胞的增殖效率,得出給藥適宜濃度及時(shí)間作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)條件。2.對(duì)給藥前后的PANC-1細(xì)胞進(jìn)行長(zhǎng)鏈非編碼RNA基因芯片檢測(cè),篩選表達(dá)差異顯著的LncRNA。3.RT-PCR法檢測(cè)給藥前后MEG3表達(dá)情況。構(gòu)建MEG3-SiRNA并導(dǎo)入PANC-1細(xì)胞,轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞記為SiRNAPANC-1細(xì)胞,RT-PCR檢測(cè)該細(xì)胞中MEG3表達(dá)變化。給藥后MTT法檢測(cè)SiRNA PANC-1細(xì)胞增殖情況,Western Blot法檢測(cè)p53蛋白水平。4.構(gòu)建pcDNA3.0-MEG3重組質(zhì)粒并導(dǎo)入PANC-1細(xì)胞,記轉(zhuǎn)染后細(xì)胞為pcDNA PANC-1細(xì)胞,RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞中MEG3表達(dá)情況,MTT法及平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的增殖效率,Western Blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞中p53蛋白表達(dá)水平變化。結(jié)果1.MTT法示非諾貝特濃度為100μM、孵育2小時(shí)抑制細(xì)胞增殖可達(dá)50%左右,且PANC-1細(xì)胞較SW1990細(xì)胞對(duì)非諾貝特更敏感,故后續(xù)實(shí)驗(yàn)采用PANC-1細(xì)胞,以100μM非諾貝特孵育2小時(shí)為給藥條件。2.長(zhǎng)鏈非編碼RNA基因芯片結(jié)果示給藥后MEG3表達(dá)增高,p53信號(hào)通路激活。3.RT-PCR結(jié)果示給藥后PANC-1細(xì)胞中MEG3表達(dá)增強(qiáng),轉(zhuǎn)染后SiRNAPANC-1細(xì)胞中MEG3表達(dá)較轉(zhuǎn)染前明顯下降。MTT結(jié)果示給藥后SiRNAPANC-1細(xì)胞增殖效率較PANC-1細(xì)胞明顯增高。Western Blot示給藥后SiRNA PANC-1細(xì)胞中p53蛋白水平較PANC-1細(xì)胞明顯減低。4.RT-PCR結(jié)果示pcDNAPANC-1細(xì)胞中MEG3表達(dá)較PANC-1細(xì)胞增強(qiáng)。MTT法及平板克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果示pcDNA PANC-1細(xì)胞增殖效率較PANC-1細(xì)胞減弱。Western Blot法結(jié)果示pcDNAPANC-1細(xì)胞p53表達(dá)水平較PANC-1細(xì)胞增高。結(jié)論1.非諾貝特能抑制胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1及SW1990增殖。2.非諾貝特能上調(diào)胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1 MEG3表達(dá)水平,并激活p53信號(hào)通路。3.下調(diào)MEG3表達(dá)后非諾貝特抗PANC-1細(xì)胞增殖效應(yīng)明顯削弱,p53蛋白水平降低;同時(shí),MEG3過表達(dá)后PANC-1細(xì)胞增殖效率降低,p53蛋白水平提高。故研究結(jié)論考慮非諾貝特通過上調(diào)LncRNAMEG3激活p53通路,最終抑制胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1增殖。
【學(xué)位單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R735.9
【部分圖文】：

圖４：邋ＭＥＧ３過表達(dá)抑制胰腺癌細(xì)胞增殖。逡逑Ａ：邋ＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)ＭＥＧ３表達(dá)水平逡逑Ｂ：邋ＭＴＴ法檢測(cè)細(xì)胞生存情況逡逑Ｃ：邋４００倍鏡下觀察細(xì)胞X椫城榭鰣義希模浩槳蹇寺⌒緯墑笛殄義希牛哄澹祝澹螅簦澹潁鑠澹攏歟錚舴觳猓穡擔(dān)車鞍姿藉義希穡跡埃埃�，与空板F哉兆橄啾冉�；＃＃７w跡埃埃保胍跣遠(yuǎn)哉兆橄啾冉�。辶x希玻板義

本文編號(hào)：2832430