結(jié)直腸癌是最常見的惡性腫瘤之一,發(fā)病率和死亡率都較高。結(jié)直腸癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是多基因共同參與的、多步驟的過程。其中,上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)是腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟。EMT過程中會發(fā)生細(xì)胞的間質(zhì)表型增加而上皮表型丟失,E-鈣黏素(E-cadherin)作為重要的上皮表型標(biāo)志物,它的丟失是EMT關(guān)鍵的分子事件。視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤結(jié)合蛋白-6(Retinoblastoma Binding Protein 6,RBBP6)參與肺癌、乳腺癌、宮頸癌的發(fā)生發(fā)展,但在結(jié)直腸癌中的作用尚未見報道。我們前期研究發(fā)現(xiàn),RBBP6在結(jié)腸正常上皮-腺瘤-腺癌病變過程中表達(dá)依次上調(diào),且在RBBP6高表達(dá)的結(jié)直腸癌組織中觀察到E-cadherin丟失,提示RBBP6可能促進(jìn)EMT的發(fā)生從而參與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移過程,但具體機(jī)制尚不清楚,因此本文進(jìn)行了研究。第一部分RBBP6在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及臨床病理特征相關(guān)性目的:檢測RBBP6在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)情況,并探討其表達(dá)水平與臨床病理學(xué)特征和預(yù)后的相關(guān)性。方法:利用免疫組織化學(xué)染色法檢測RBBP6在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)情況,并統(tǒng)計分析其表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征和預(yù)后相關(guān)性。結(jié)果:與癌旁組織相比,RBBP6在結(jié)直腸癌組織中的陽性表達(dá)率顯著高于癌旁組織(57.2%vs.34.4%),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。RBBP6的表達(dá)水平與腫瘤分期(P=0.006),分化程度(P=0.036),遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(P=0.018)相關(guān)。COX回歸模型顯示,RBBP6是獨(dú)立預(yù)后因素(P=0.012)。結(jié)論:RBBP6在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)水平升高,并且可能與結(jié)直腸癌的侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。第二部分RBBP6對結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移的影響目的:探討RBBP6對結(jié)直腸癌侵襲和轉(zhuǎn)移的影響。方法:運(yùn)用Western blot技術(shù)檢測RBBP6在結(jié)直腸癌細(xì)胞系中的表達(dá)差異。構(gòu)建RBBP6敲減和過表達(dá)病毒載體,分別感染HT29和RKO細(xì)胞,獲得HT29-RBBP6-KD和RKO-RBBP6-OE穩(wěn)定細(xì)胞株。利用細(xì)胞劃痕和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測RBBP6表達(dá)變化對HT29和RKO細(xì)胞侵襲遷移能力的影響。結(jié)果:RBBP6在HT29、SW620、Caco2、LoVo等侵襲性較高的細(xì)胞系中高表達(dá),而在RKO、HT15、SW480等侵襲性較低的細(xì)胞系中低表達(dá)。RBBP6過表達(dá)后,RKO的侵襲遷移能力增強(qiáng),相反,RBBP6敲減后,HT29的侵襲遷移能力減弱。結(jié)論:RBBP6可增強(qiáng)結(jié)直腸癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力。第三部分RBBP6促進(jìn)結(jié)直腸癌侵襲和轉(zhuǎn)移的機(jī)制目的:探討RBBP6影響結(jié)直腸癌侵襲和轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制。方法:運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色法檢測并統(tǒng)計分析在結(jié)直腸癌組織中,E-cadherin、N-cadherin、p-p65的表達(dá)與RBBP6的相關(guān)性。Western blot技術(shù)檢測RBBP6表達(dá)改變對E-cadherin、N-cadherin、p-p65表達(dá)和NF-κB通路的影響。結(jié)果:在結(jié)直腸癌組織中,上皮標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá)與RBBP6的表達(dá)呈負(fù)相關(guān),而NF-κB信號通路標(biāo)志物p-p65、間質(zhì)標(biāo)志物Ncadherin的表達(dá)與RBBP6的表達(dá)呈正相關(guān)。RBBP6過表達(dá)后,激活NF-κB信號通路,使p65入核增加,N-cadherin表達(dá)增加,E-cadherin表達(dá)減少,促進(jìn)細(xì)胞EMT,細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)。同時,向RKORBBP6-OE細(xì)胞轉(zhuǎn)入IκBα-Mutant質(zhì)粒或給予BAY-117082抑制劑,能夠顯著逆轉(zhuǎn)RBBP6過表達(dá)所造成的促EMT效應(yīng);向HT29-RBBP6-KD細(xì)胞轉(zhuǎn)入p65質(zhì)粒后,也能顯著恢復(fù)HT29細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。結(jié)論:RBBP6通過激活NF-κB信號通路,促進(jìn)細(xì)胞EMT,進(jìn)而促進(jìn)結(jié)直腸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。
【學(xué)位單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R735.34
【部分圖文】：

上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文緒論結(jié)直腸癌（Colorectalcancer，CRC）是全世界最常見的惡性消化道腫瘤之一，球每年約有超過 120 萬新發(fā) CRC 患者，超過 60 萬人因 CRC 相關(guān)疾病而死亡。RC 發(fā)病率在所有惡性癌癥中居于第三位，病死率居于第四位[1]，嚴(yán)重威脅到人健康。據(jù)統(tǒng)計，世界范圍內(nèi) CRC 呈高發(fā)趨勢，發(fā)病率正在逐年增長。男性群體 CRC 的發(fā)病率僅次于前列腺癌、肺癌，排在第三位；而女性群體中，CRC 的發(fā)率僅次于乳腺癌，排在第二位[1,2]。在美國，預(yù)計 2018 年將新增約 14 萬 CRC者，男女 CRC 發(fā)病率和病死率在所有惡性腫瘤中均位列第三位。其中男性發(fā)病為 8%，女性發(fā)病率為 7%；超過 5 萬 CRC 患者死亡，男女死亡率均高達(dá) 8%[3,]（圖 1）。

3Fig.2 Transitions through the different states along the EMT Spectrum圖 2-緒論. EMT 發(fā)生發(fā)展過程圖M.Angela Nieto et al. EMT: 2016. Cell. 2016 Jun 30;166(1):21-45.NF-κB 信號通路在癌癥的發(fā)生和進(jìn)展中發(fā)揮著重要作用，并能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)殖和誘導(dǎo)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。哺乳動物的 NF-κB 家族包括五種亞單位：RELA（也 P65），RelB，REL（也稱為 c-Rel），NF-κB1（也被稱為 P50／P105）和 NF（也稱為 P52／P100）[25]。NF-κB 是由 NF-κB1 或 NF-κB2 與 RELA、Rel-Rel 結(jié)合形成的復(fù)合體。其中，p65／p50 二聚體是 NF-κB 最常見的存在形式，非活躍狀態(tài)時被 NF-κB 抑制因子（IκB）限制在細(xì)胞質(zhì)中[26]。一般來說，Iκ

上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文過與 p65／p50 二聚體結(jié)合，形成 IκB- p65／p50 復(fù)合體，從而抑制 p65 與細(xì)胞內(nèi)的 DNA 結(jié)合。然而，多種刺激可以激活 IκB 激酶（IKK）復(fù)合物，IKK 激活能夠促進(jìn) IκB 磷酸化和泛素化從而導(dǎo)致 IκB 被蛋白酶體降解，IκB 降解后，p65抑制被解除，變?yōu)榛钴S狀態(tài)�；罨� p65 發(fā)生核轉(zhuǎn)位，進(jìn)入細(xì)胞核與 DNA 結(jié)，從而激活 NF-κB 信號通路和一系列的下游調(diào)控基因[27,28]。NF-κB 在多種人腫瘤如乳腺癌[29]、卵巢癌[30]、胰腺癌[31]和胃癌[32]中的作用均有報道。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 馮雅靖;王寧;方利文;叢舒;殷鵬;李鎰沖;周脈耕;;1990年與2013年中國人群結(jié)直腸癌疾病負(fù)擔(dān)分析[J];中華流行病學(xué)雜志;2016年06期

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本文編號：2825426