目的:(1)觀察Smac類似物L(fēng)CL161對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖及凋亡的影響。(2)探討LCL161誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌產(chǎn)生并加快其凋亡的可能性機(jī)制。方法:(1)將人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549培養(yǎng)于恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中,完全培養(yǎng)基為含10%FBS及1%雙抗的RPMI1640培養(yǎng)基。(2)細(xì)胞培養(yǎng)24h后,改用無(wú)血清的培養(yǎng)基并用按設(shè)計(jì)配好的不同濃度的藥物處理細(xì)胞。(3)將處于對(duì)數(shù)期的A549細(xì)胞分為對(duì)照組(0.1%二甲基亞砜)及5、10、20mmol/L LCL161組分別采用相應(yīng)藥物干預(yù)24h、48h、72h后,用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)各組細(xì)胞的增值情況。(4)Hoechst熒光染色法觀察LCL161對(duì)A549細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用。(5)取對(duì)照組及5、10 mmol/L LCL161組培養(yǎng)48h后的細(xì)胞,用免疫印跡試驗(yàn)法檢測(cè)X連鎖凋亡抑制蛋白(XIAP)、B淋巴細(xì)胞瘤-2相關(guān)X蛋白(Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)的蛋白表達(dá)情況,觀察LCL161在A549細(xì)胞凋亡中的作用。結(jié)果:(1)對(duì)照組、5 mmol/L LCL161組、10 mmol/L LCL161組、20 mmol/LLCL161組A549細(xì)胞A490值依次降低(均P0.05);5 mmol/L LCL161組、20 mmol/L LCL161組A549細(xì)胞A490值隨時(shí)間延長(zhǎng)而降低(均P0.05),10 mmol/L LCL161組A549細(xì)胞72h A490值均低于24h、48h(均P0.05)。(2)Hoechest33258熒光染色結(jié)果顯示,用5、10、20mmol/L LCL161處理48小時(shí)后A549細(xì)胞凋亡數(shù)分別為(10.00±2.45)、(29.8±3.63)、(58.40±3.51)個(gè)/HP,均高于對(duì)照組的(3.20±1.30)個(gè)/HP(均P0.05)。(3)Western blot檢測(cè)凋亡蛋白顯示,與對(duì)照組比較,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞XIAP表達(dá)量降低,Bax和Caspase-3表達(dá)量增加,(均P0.05)。結(jié)論:(1)Smac類似物L(fēng)CL61能夠顯著地抑制人肺腺癌A549細(xì)胞株的增殖能力。(2)LCL161對(duì)肺癌細(xì)胞A549細(xì)胞具有增殖抑制及凋亡誘導(dǎo)作用,其機(jī)制可能與下調(diào)XIAP、上調(diào)Bax和Caspase-3相關(guān)。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R734.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2811818