發(fā)布時間：2020-09-03 18:42

　　 目的:(1)觀察Smac類似物LCL161對非小細胞肺癌細胞增殖及凋亡的影響。(2)探討LCL161誘導非小細胞肺癌產(chǎn)生并加快其凋亡的可能性機制。方法:(1)將人非小細胞肺癌細胞株A549培養(yǎng)于恒溫細胞培養(yǎng)箱中,完全培養(yǎng)基為含10%FBS及1%雙抗的RPMI1640培養(yǎng)基。(2)細胞培養(yǎng)24h后,改用無血清的培養(yǎng)基并用按設計配好的不同濃度的藥物處理細胞。(3)將處于對數(shù)期的A549細胞分為對照組(0.1%二甲基亞砜)及5、10、20mmol/L LCL161組分別采用相應藥物干預24h、48h、72h后,用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測各組細胞的增值情況。(4)Hoechst熒光染色法觀察LCL161對A549細胞的凋亡誘導作用。(5)取對照組及5、10 mmol/L LCL161組培養(yǎng)48h后的細胞,用免疫印跡試驗法檢測X連鎖凋亡抑制蛋白(XIAP)、B淋巴細胞瘤-2相關(guān)X蛋白(Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)的蛋白表達情況,觀察LCL161在A549細胞凋亡中的作用。結(jié)果:(1)對照組、5 mmol/L LCL161組、10 mmol/L LCL161組、20 mmol/LLCL161組A549細胞A490值依次降低(均P0.05);5 mmol/L LCL161組、20 mmol/L LCL161組A549細胞A490值隨時間延長而降低(均P0.05),10 mmol/L LCL161組A549細胞72h A490值均低于24h、48h(均P0.05)。(2)Hoechest33258熒光染色結(jié)果顯示,用5、10、20mmol/L LCL161處理48小時后A549細胞凋亡數(shù)分別為(10.00±2.45)、(29.8±3.63)、(58.40±3.51)個/HP,均高于對照組的(3.20±1.30)個/HP(均P0.05)。(3)Western blot檢測凋亡蛋白顯示,與對照組比較,實驗組細胞XIAP表達量降低,Bax和Caspase-3表達量增加,(均P0.05)。結(jié)論:(1)Smac類似物LCL61能夠顯著地抑制人肺腺癌A549細胞株的增殖能力。(2)LCL161對肺癌細胞A549細胞具有增殖抑制及凋亡誘導作用,其機制可能與下調(diào)XIAP、上調(diào)Bax和Caspase-3相關(guān)。
【學位單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R734.2

【參考文獻】

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本文編號：2811818