【摘要】：目的:腫瘤的生長(zhǎng)離不開(kāi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的支持,當(dāng)腫瘤增長(zhǎng)到一定程度時(shí)會(huì)發(fā)生營(yíng)養(yǎng)缺乏的現(xiàn)象,腫瘤細(xì)胞會(huì)通過(guò)血管的新生來(lái)維持自身的生長(zhǎng),因此血管新生在腫瘤生長(zhǎng)過(guò)程中具有十分重要的作用。多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞對(duì)血管新生的依賴(lài)性已經(jīng)得到了公認(rèn),雖然很多抗血管新生藥物有一定療效但仍然擺脫不了耐藥現(xiàn)象。已有研究顯示血清饑餓應(yīng)激(serum deprivation,SD)情況下骨髓瘤細(xì)胞來(lái)源微泡(MM-MVs)促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞小管形成,提示微泡在腫瘤血管新生過(guò)程中有重要作用。本課題擬進(jìn)一步研究血清饑餓應(yīng)激情況下,MM-MVs對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力、小管形成及VEGF分泌水平的影響。此項(xiàng)目的完成將為應(yīng)激情況下腫瘤細(xì)胞與微環(huán)境之間對(duì)話(huà)機(jī)制提供新的研究模式,為克服腫瘤的血管新生治療抵抗提供新的策略。方法:培養(yǎng)KM3、U266、RPMI8226三種多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞,將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的骨髓瘤細(xì)胞分為兩組,分別給予10%FBS的正常培養(yǎng)條件,1%FBS的血清剝奪應(yīng)激(SD)培養(yǎng)條件,培養(yǎng)24h后經(jīng)典差異離心法收集三種多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞正常培養(yǎng)和SD情況下分泌的微泡。正常培養(yǎng)和SD情況下三種多發(fā)性骨髓瘤微泡設(shè)為實(shí)驗(yàn)組,共6個(gè)實(shí)驗(yàn)組,并設(shè)置PBS對(duì)照組和VEGF(25ng/ml)陽(yáng)性對(duì)照。(1)劃痕實(shí)驗(yàn):六孔板培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞12h后,MVs和SD-MVs與內(nèi)皮細(xì)胞共孵育,用無(wú)血清DMEM進(jìn)行培養(yǎng),36h后倒置顯微鏡下觀察各組內(nèi)皮細(xì)胞橫向遷移情況,用劃痕處面積大小來(lái)表示。(2)transwell遷移實(shí)驗(yàn):transwell小室上室加入內(nèi)皮細(xì)胞懸液,下室分別加入MVs、SD-MVs和VEGF、PBS,共孵育5h后對(duì)小室進(jìn)行固定染色,倒置顯微鏡下觀察各組內(nèi)皮細(xì)胞縱向遷移情況,用遷移到小室下室面的細(xì)胞數(shù)量來(lái)表示。(3)小管形成實(shí)驗(yàn):96孔板底部涂Matrigel基質(zhì)膠,加入內(nèi)皮細(xì)胞懸液,MVs和SD-MVs與內(nèi)皮細(xì)胞共孵育6h后,倒置顯微鏡下觀察各組小管形成的情況。用小管形成數(shù)量來(lái)表示。(4)ELISA試劑盒檢測(cè)MVs和SD-MVs與內(nèi)皮細(xì)胞共孵育前后HUVEC上清VEGF的變化情況。結(jié)果:1劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:骨髓瘤MVs和SD-MVs實(shí)驗(yàn)組與PBS對(duì)照組相比有顯著差異,MVs和SD-MVs組較PBS對(duì)照組劃痕面積小,且SD-MVs組較MVs劃痕面積小,RPMI8226 SD-MVs實(shí)驗(yàn)組與VEGF對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。結(jié)果說(shuō)明骨髓瘤MVs促進(jìn)HUVEC的橫向遷移,且SD-MVs與MVs相比促進(jìn)HUVEC橫向遷移能力更為顯著。2遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:骨髓瘤MVs和SD-MVs實(shí)驗(yàn)組與PBS對(duì)照組有顯著差異,MVs和SD-MVs組較PBS對(duì)照組遷移細(xì)胞量多;且SD-MVs組較MVs組遷移到小室下室面的細(xì)胞數(shù)多。RPMI8226 SD-MVs實(shí)驗(yàn)組與VEGF對(duì)照組無(wú)顯著差異。結(jié)果說(shuō)明骨髓瘤MVs促進(jìn)HUVEC的縱向遷移能力,且SD-MVs與MVs相比促HUVEC縱向遷移能力更為顯著。3小管形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:骨髓瘤MVs和SD-MVs實(shí)驗(yàn)組與PBS對(duì)照組有顯著差異,MM-MVs有顯著促小管生成的能力;且SD-MVs組的促小管生成能力較MVs組更為顯著。RPMI8226 SD-MVs實(shí)驗(yàn)組與VEGF對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。結(jié)果說(shuō)明骨髓瘤MVs促進(jìn)HUVEC的小管形成,且SD-MVs與MVs相比促HUVEC小管形成能力更為顯著。4 ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:骨髓瘤MVs和SD-MVs實(shí)驗(yàn)組與PBS對(duì)照組有顯著差異,MVs和SD-MVs較PBS對(duì)照組促內(nèi)皮細(xì)胞分泌更高水平的VEGF;且SD-MVs組較MVs組內(nèi)皮細(xì)胞分泌VEGF的水平更為顯著。結(jié)論:1 MM-MVs促進(jìn)HUVEC遷移和小管形成。2 SD應(yīng)激情況下分泌的MVs與正常培養(yǎng)條件下分泌的MVs相比促血管新生作用更為顯著。3 MM-MVs與HUVEC共孵育后增加其VEGF的分泌水平,且SD-MVs組較MVs組內(nèi)皮細(xì)胞分泌VEGF的水平更為顯著。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R733.3

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 郭秋均;李杰;;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在重塑腫瘤免疫微環(huán)境中的作用[J];腫瘤;2013年10期

本文編號(hào)：2802281