【摘要】：Elongator是一個(gè)多亞基復(fù)合物,包含有六個(gè)亞基,其中Elp3為核心亞基。Elongator具有多種功能,與多種細(xì)胞活動(dòng)相關(guān)。本研究將分為兩個(gè)部分探討Elongator在肝癌細(xì)胞中的功能及其分子機(jī)制。第一部分為Elongator對(duì)肝癌細(xì)胞遷移和侵襲的影響及其機(jī)制研究。本研究中,我們發(fā)現(xiàn)Elongator可以促進(jìn)肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲。根據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,Elongator可以通過(guò)磷酸化AKT激活信號(hào)通路,上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲。同時(shí),我們還發(fā)現(xiàn),Elp3表達(dá)缺失時(shí),表皮生長(zhǎng)因子(EGF)或肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)誘導(dǎo)產(chǎn)生的AKT磷酸化顯著降低。另外,在小鼠腫瘤肺轉(zhuǎn)移模型中,過(guò)表達(dá)Elp3能夠顯著提升轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)的形成。在人的肝癌病例樣本中,Elp3與p-AKT在肝癌組織中的表達(dá)顯著高于癌旁組織。這些結(jié)果表明Elongator在肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲中發(fā)揮了重要的功能,為臨床尋找肝癌轉(zhuǎn)移靶標(biāo)提供一定的理論依據(jù)。第二部分為Elongator在肝癌細(xì)胞DNA損傷修復(fù)中的作用機(jī)制。本研究中,我們發(fā)現(xiàn)Elongator復(fù)合物可促進(jìn)輻照誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞DNA損傷修復(fù),同時(shí),我們比較了Elongator在肝癌細(xì)胞和正常肝細(xì)胞的DNA損傷修復(fù)過(guò)程中的不同作用。射線(xiàn)輻照誘導(dǎo)DNA斷裂損傷后,細(xì)胞內(nèi)DNA損傷感受器可迅速識(shí)別DNA的損傷斷裂點(diǎn)并在損傷處募集大量的DNA損傷修復(fù)因子修復(fù)損傷斷鏈的DNA。根據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,在肝癌細(xì)胞中,Elongator能夠在DNA損傷后轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞核,與ATM結(jié)合維持較高程度的ATM磷酸化并促使ATM的磷酸化時(shí)間延長(zhǎng)。同時(shí),我們發(fā)現(xiàn)Elp3為ATM的靶基因,一旦ATM信號(hào)激活,Elp3的蛋白表達(dá)會(huì)隨之上調(diào)。在正常肝細(xì)胞中,Elongator復(fù)合物Elp3亞基的表達(dá)在DNA損傷后也顯著上調(diào),但無(wú)法轉(zhuǎn)運(yùn)入核與ATM結(jié)合,因而,Elongator復(fù)合物對(duì)正常肝細(xì)胞的DNA損傷修復(fù)沒(méi)有顯著影響。以上結(jié)論初步闡明了Elongator復(fù)合物在DNA損傷修復(fù)中的作用機(jī)理,Elongator作為潛在的DNA損傷修復(fù)基因能夠上調(diào)肝癌細(xì)胞的DNA損傷修復(fù)速度,使肝癌細(xì)胞獲得放療抵擋從而促進(jìn)肝癌的發(fā)展,并為肝癌的放療增敏提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7
【圖文】：

Elongator 對(duì)肝癌細(xì)胞遷移侵襲和 DNA 損傷修復(fù)的影響及其機(jī)制研究 第一部分在補(bǔ)充 Elp3 蛋白表達(dá)后，實(shí)驗(yàn)組 Elp3i+Elp3o 穿膜細(xì)胞數(shù)目顯著高于對(duì)照組Elp3i+Vector。圖 3.1-b 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá) Elp3 的 Hep3B 細(xì)胞（Elp3o）穿膜細(xì)胞數(shù)目顯著高于 Hep3B 細(xì)胞對(duì)照組（Control），干擾 Elp3 表達(dá)的 Hep3B 細(xì)胞（Elp3i）穿膜細(xì)胞數(shù)目則顯著低于 Hep3B 細(xì)胞對(duì)照組（Control）和轉(zhuǎn)染空載體的Hep3B 細(xì)胞（Vector）。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，過(guò)表達(dá) Elp3 可以顯著增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力，而干擾 Elp3 表達(dá)則顯著降低肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。

（Elp3i）穿膜細(xì)胞數(shù)目則顯著低于 Hep3B 細(xì)胞對(duì)照組（Control）和轉(zhuǎn)染空載體的Hep3B 細(xì)胞（Vector）。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，過(guò)表達(dá) Elp3 可以顯著增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力，而干擾 Elp3 表達(dá)則顯著降低肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。圖 3.1-a：Elp3 促進(jìn)肝癌細(xì)胞 HepG2 的遷移和侵襲圖注：Elp3o 組與對(duì)照組（Control）相比較，Elp3i 組與 Control 組相比較，穿膜細(xì)胞數(shù)目具有顯著差異；Elp3i+Elp3o 與 Elp3i+Vector 組相比較，穿膜細(xì)胞數(shù)目具有顯著差異；*：p<0.05，**：p<0.01，#：p<0.05，##：p<0.01。

遷移侵襲和 DNA 損傷修復(fù)的影響及其機(jī)制研究 究在肝癌細(xì)胞中 Elp3 對(duì) AKT 磷酸化的影響，我（圖 3.2-e 和圖 3.2-f）和 HepG2（圖 3.2-g 和圖 32μg、3μg、4μg 的 Elp3 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒（CMV4-El后，提取蛋白進(jìn)行 Western Blot 實(shí)驗(yàn)檢測(cè) Elp3 蛋實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖所示，AKT 的磷酸化程度隨 Elp3 蛋著 Elp3 蛋白表達(dá)的減少，AKT 的磷酸化程度也隨lp3 的表達(dá)可促進(jìn) AKT 的磷酸化，并且兩者之間驗(yàn)結(jié)果，Elp3 可促進(jìn) AKT 的磷酸化作用激活 A相關(guān)因子 MMP-2 和 MMP-9 的基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋

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本文編號(hào)：2801863