【摘要】：[目的]生長(zhǎng)抑制因子1～5(Inhibitor of Growth1～5),即ING基因家族1～5。是多種腫瘤的抑制基因。通過(guò)多種機(jī)制參與了腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、DNA修復(fù)、侵襲、遷移和凋亡等不同階段的生物學(xué)過(guò)程。ING3作為家族基因里結(jié)構(gòu)最特殊的一員,尚未報(bào)道在乳腺癌中的相關(guān)研究。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)重組慢病毒侵染乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和HCC1937,通過(guò)RT-PCR和Western Blot驗(yàn)證其轉(zhuǎn)染效率,通過(guò)劃痕、侵襲、遷移實(shí)驗(yàn)。探討生長(zhǎng)抑制因子3的表達(dá)對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。是否如ING3在多種腫瘤中一樣起到抑制作用,為臨床治療乳腺癌提供新的基因靶點(diǎn)和思路。[方法]1、分別以10%的FBS混合DMEF-12和RPMI,培養(yǎng)乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和 HCC1937。2、以ING3為作用靶點(diǎn)合成LV5-ING3和LV5-NC并進(jìn)行慢病毒滴度檢測(cè)。3、以LV5-ING3侵染乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、HCC1937,同時(shí)以LV5-NC侵染對(duì)應(yīng)細(xì)胞株作為陰性對(duì)照。4、72h時(shí)即完成熒光蛋白表達(dá),并在熒光顯微鏡下觀察慢病毒和亂序病毒的侵染效率。5、RT-PCR 驗(yàn)證 LV5-ING3 侵染后的 MCF-7 和 HCC1937 的 ING3 表達(dá)。6、通過(guò)Western Blot檢測(cè)侵染ING3后的MCF-7和HCC1937中ING3蛋白的表達(dá)。7、通過(guò)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)來(lái)對(duì)比過(guò)表達(dá)ING3的乳腺癌細(xì)胞MCF-7、HCC1937與陰性對(duì)照細(xì)胞遷移能力的影響。8、通過(guò)侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)來(lái)對(duì)比過(guò)表達(dá)ING3的乳腺癌細(xì)胞MCF-7、HCC1937與陰性對(duì)照細(xì)胞的遷移及侵襲能力的影響。[結(jié)果]1、RT-PCR監(jiān)測(cè)顯示LV5-ING3能提高乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和HCC1937中ING3的表達(dá)水平(p0.05)2、Western Blotting結(jié)果顯示經(jīng)LV5-ING3侵染乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和HCC1937后,ING3蛋白表達(dá)增加(p0.05)3、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:經(jīng)LV5-ING3侵染的MCF-7和HCC1937的細(xì)胞遷移速度明顯減慢(P0.05)。4、細(xì)胞侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)表明:經(jīng)LV5-ING3侵染的MCF-7和HCC1937的侵襲和遷移能力明顯下降(p0.05)。[結(jié)論]1、過(guò)表達(dá)ING3可明顯抑制乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、HCC1937的遷移和侵襲的能力。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9
【圖文】：

ＨＣＣ１９３７邋ＭＣＦ－７逡逑ＮＣ邋ＩＮＧ３邋ＮＣ邋ＩＮＧ３逡逑ＩＮＧ３逡逑ｐ－ａｃｔｉｎ逡逑結(jié)果顯示經(jīng)ＬＶ５－ＩＮＧ３過(guò)表達(dá)的ＨＣＣ１９３７和ＭＣＦ－７細(xì)胞中，通過(guò)瓊脂糖凝膠電逡逑泳檢測(cè)分析可見(jiàn)：內(nèi)參３－ａｃｔｉｎ表達(dá)基本一致，與此對(duì)比可見(jiàn)，ＬＶ５－ＩＮＧ３在逡逑ＨＣＣ１９３７和ＭＣＦ－７乳腺癌細(xì)胞中使ＩＮＧ３表達(dá)明顯增加。逡逑６邋Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔｔｉｎｇ邋結(jié)果逡逑從ＨＣＣ１９３７，ＭＣＦ－７細(xì)胞中提取的蛋白質(zhì)做蛋白印跡實(shí)驗(yàn)后膠片曝光結(jié)果如下逡逑（圖邋３６）逡逑１．５－逡逑Ｃ０逡逑

圖２逡逑圖１和圖２均是處在對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的ＭＣＦ－７細(xì)胞，４０倍光鏡下觀察，細(xì)胞狀態(tài)良逡逑

圖２０逡逑圖１８正常ＨＣＣ１９３７細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)，圖１９為侵染ＬＶ５－ＩＮＧ３的ＨＣＣ１９３７細(xì)胞遷逡逑移實(shí)驗(yàn)。圖２０表明ＬＶ５－ＩＮＧ３侵染ＨＣＣ１９３７細(xì)胞遷移能力下降，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意逡逑義，Ｐ＜０．０５。逡逑３４逡逑

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號(hào)：2798436