【摘要】：熱休克蛋白70(Heat shock 70,HSP70)與乳腺腫瘤形成、發(fā)展、治療、預(yù)后和腫瘤治療中形成的藥物抵抗有關(guān),從而成為抗腫瘤治療的新靶點(diǎn)。本論文通過熱休克(HS),即高熱(43℃)作用來誘導(dǎo)乳腺腫瘤細(xì)胞內(nèi)HSP70表達(dá)增強(qiáng),通過HSP70抑制劑VER-155008來抑制乳腺腫瘤細(xì)胞內(nèi)HSP70的功能,采用MTT法研究HSP70功能對(duì)細(xì)胞增殖的影響。采用激光掃描共聚焦顯微成像技術(shù)和雙光子熒光顯微成像技術(shù)研究HSP70功能對(duì)乳腺腫瘤細(xì)胞中反映細(xì)胞代謝狀態(tài)的線粒體膜電位、NADH和FAD熒光強(qiáng)度以及氧化還原比率(RR)的影響。首先,使用BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒和人HSP70的ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)MCF-7和MDB-MA-23 1乳腺腫瘤細(xì)胞在HS作用前和HS作用后細(xì)胞中的HSP70含量的變化。利用MTT法測(cè)量了乳腺細(xì)胞MCF-7、MDA-MB-231和MCF-10A在單獨(dú)HS作用(43℃)、單獨(dú)HSP70抑制劑VER-155008作用以及HS和VER-155008聯(lián)合作用下乳腺細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果表明三種乳腺細(xì)胞的高熱耐受能力存在明顯差異,從高到低依次為MCF-10A、MCF-7和MDA-MB-231。HS對(duì)細(xì)胞促增殖效應(yīng)和增殖抑制效應(yīng)與細(xì)胞種類和HS作用時(shí)長(zhǎng)(1h、2h和3h)有關(guān)。HSP70功能抑制導(dǎo)致三種乳腺細(xì)胞的增殖均受到抑制,且其抑制效果呈現(xiàn)劑量相關(guān)性和作用時(shí)間依賴性;細(xì)胞在聯(lián)合作用下的增殖情況是單獨(dú)HS作用效果及單獨(dú)VER-155008作用效果的綜合。其次,應(yīng)用激光掃描共聚焦顯微成像技術(shù)和線粒體膜電位熒光探針JC-1可視化和量化了乳腺腫瘤細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231在單獨(dú)HS作用(1h)、單獨(dú)VER-155008作用和兩者聯(lián)合作用開始后的24h、48h和72h下的線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)、線粒體膜電位、含量及細(xì)胞尺寸的變化情況。結(jié)果表明,在三個(gè)測(cè)量時(shí)間下,對(duì)照組細(xì)胞和單獨(dú)HS作用下的細(xì)胞線粒體網(wǎng)絡(luò)完整,形態(tài)舒展,覆蓋了細(xì)胞內(nèi)的大部分區(qū)域。線粒體的膜電位、含量和細(xì)胞尺寸與對(duì)照組細(xì)胞相比沒有統(tǒng)計(jì)差異;單獨(dú)VER-155008作用和聯(lián)合作用導(dǎo)致線粒體網(wǎng)絡(luò)破壞,線粒體膜電位、含量和細(xì)胞尺寸減小,出現(xiàn)了與細(xì)胞早期凋亡相似的現(xiàn)象,但聯(lián)合作用下的線粒體膜電位、含量和細(xì)胞尺寸減小的幅度小于單獨(dú)VER-155008作用減小的幅度。這預(yù)示著HSP70抑制誘導(dǎo)乳腺腫瘤細(xì)胞凋亡,但HS作用減輕了其促凋亡效果。最后,細(xì)胞內(nèi)的自體熒光NADH和FAD是細(xì)胞氧化還原呼吸鏈上重要的輔酶,可作為靈敏的內(nèi)源性含氧指標(biāo)來反映機(jī)體的代謝狀態(tài)和細(xì)胞活力。采用構(gòu)建的活細(xì)胞代謝光學(xué)測(cè)量系統(tǒng)監(jiān)測(cè)了乳腺腫瘤細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231在分別HS作用1h、2h和3h后,細(xì)胞內(nèi)與代謝緊密相關(guān)的NADH、FAD熒光強(qiáng)度和氧化還原比率的動(dòng)態(tài)變化。并且,測(cè)量了HS作用、VER-155008作用、他莫昔芬作用以及兩兩聯(lián)合作用對(duì)乳腺腫瘤細(xì)胞內(nèi)NADH、FAD和氧化還原比率的影響。所得的結(jié)論揭示了細(xì)胞代謝變化與HS作用后的乳腺腫瘤細(xì)胞的促增殖及增殖抑制間的關(guān)系,并進(jìn)一步明確了靶向HSP70在抗乳腺腫瘤治療中的重大意義�；陔p光子熒光顯微成像的氧化還原比率可用于抗腫瘤治療的療效監(jiān)測(cè)、藥物篩選和治療方案優(yōu)化。
【學(xué)位授予單位】：福建師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.9
【圖文】：

約在ｌ（ｒ４９ＣＷ＾。而且，對(duì)于單光子激發(fā)顯微成像，熒光激發(fā)區(qū)域在整個(gè)入射光束行逡逑經(jīng)的路徑上，而雙光子激發(fā)成像，熒光激發(fā)區(qū)域僅在焦點(diǎn)附近很小的區(qū)域內(nèi)產(chǎn)生（如逡逑圖２．１所示）。逡逑２．２．２．２激光掃描共聚焦顯微鏡原理逡逑基光掃描共聚焦顯微鏡主要包括激光光源、掃描裝置、出射小孔、光探測(cè)器、逡逑光學(xué)顯微鏡和信號(hào)處理系統(tǒng)等幾個(gè)組成部分。該顯微鏡基于共軛焦點(diǎn)技術(shù)設(shè)計(jì)而成，逡逑使激光光源、被測(cè)樣品和探測(cè)器處于彼此的共軛位置上。其成像原理如圖２．２所示：逡逑Ｄｅｔｅｃｔｏｒ邋Ｊ逡逑Ｐｉｎｈｏｌｅ逡逑Ｌａｓｃｒ邋，逡逑ｄｉｃｈｒｏｍａｔｉｃ逡逑１ｆｔ逡逑ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＣＴ＾逡逑＼ｆ逡逑Ｆｏｃａｌ逡逑圖２．２激光掃描共聚焦顯微鏡簡(jiǎn)化原理圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．２邋Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ邋ｏｆ邋ｃｏｎｆｏｃａｌ邋ｌａｓｅｒ邋ｓｃａｎｎｉｎｇ邋ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ逡逑激發(fā)光被二向色鏡（Ｄｉｃｈｒｏｍａｔｉｃｍｉｒｒｏｒ，ＤＭ）反射后，經(jīng)顯微物鏡聚焦到待測(cè)樣逡逑品上。樣品產(chǎn)生的熒光和少量反射激光，經(jīng)物鏡重新收集后到達(dá)ＤＭ。其中比激發(fā)逡逑光波長(zhǎng)更長(zhǎng)的熒光信號(hào)經(jīng)ＤＭ和出射小孔后，被探測(cè)器收集，而少量的殘余激發(fā)光逡逑和離焦熒光信號(hào)則分別被ＤＭ和出射小孔阻擋無法到達(dá)探測(cè)器。之后，將探測(cè)器收逡逑集到的熒光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)并送入計(jì)算機(jī)進(jìn)行處理。逡逑激光共聚焦掃描顯微技術(shù)是一種高分辨率的顯微成像技術(shù)。在對(duì)生物組織和細(xì)逡逑胞進(jìn)行測(cè)量時(shí)，由于出射小孔的存在，基本上杜絕了來自焦點(diǎn)鄰近區(qū)域的離焦熒光逡逑對(duì)成像的千擾

物鏡的焦點(diǎn)處的光子密度最高，雙光子激發(fā)熒光均來自于物鏡的焦點(diǎn)上，所以逡逑雙光子顯微鏡不需要共聚焦針孔來濾除離焦熒光，提高了熒光檢測(cè)效率。其原理如逡逑圖２．３所示：逡逑Ｄｅｔｅｃｔｏｒ逡逑Ｕ逡逑Ｌａｓｅｒ邋今邋Ｕ逡逑Ｉ邐Ｄｉｃｈｒｏｍａｔｉｃ逡逑？４逡逑圖２．３雙光子熒光顯微鏡簡(jiǎn)化原理圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．３邋Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ邋ｏｆ邋ｔｗｏ－ｐｈｏｔｏｎ邋ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ邋ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ逡逑雙光子熒光顯微鏡由于其獨(dú)特的熒光激發(fā)方式，與共聚焦掃描顯微鏡相比，具逡逑－１７－逡逑

逡逑圖２．４飛秒激光器實(shí)物圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．４邋Ｐｈｏｔｏ邋ｏｆ邋ｆｓ邋ｌａｓｅｒ逡逑２．３．２激光掃描共聚焦顯微成像系統(tǒng)逡逑本文采用ＬｅｉｃａＴＣＳＳＰ８邋（Ｇｅｒｍａｎｙ）激光掃描共聚焦顯微鏡進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。該顯微逡逑鏡為倒置熒光顯微鏡，具備明場(chǎng)、熒光、微分千涉等成像功能。其配置多個(gè)高倍、逡逑高ＮＡ共聚焦專用復(fù)消色差物鏡，內(nèi)置的固體激光器提供４８８ｎｍ和５５２ｎｍ波長(zhǎng)選擇，逡逑包含ＰＭＴ、ＡＰＤ、ＨｙＤ等多個(gè)探測(cè)器，其中ＨｙＤ為超高靈敏度磷砷化鎵檢測(cè)器。逡逑顯微鏡通過棱鏡分光，可檢測(cè)熒光波長(zhǎng)范圍為４００－８００ｍｎ。該顯微鏡有一個(gè)外輸入逡逑口（右圖中矩形框內(nèi)），我們通過外部光路將飛秒激光導(dǎo)入到儀器內(nèi)部，實(shí)現(xiàn)雙光逡逑子熒光成像。該儀器實(shí)物如圖２．５所示：逡逑ｌ．邋％逡逑圖２．５激光掃描共聚焦顯微鏡實(shí)物圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．５邋Ｐｈｏｔｏ邋ｏｆ邋ｌａｓｅｒ邋ｓｃａ

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 樂美兆,葉明,宋小明;類癌性乳腺癌的超微結(jié)構(gòu)觀察(附11例報(bào)道)[J];實(shí)用癌癥雜志;1988年04期

2 邱昌偉;林德貴;;犬乳腺腫瘤細(xì)胞的分離及培養(yǎng)[J];中國獸醫(yī)雜志;2007年02期

3 李海鋒;張曉麗;薄愛華;蘆廣平;吳麗敏;;紫杉醇聯(lián)合阿霉素方案對(duì)乳腺腫瘤細(xì)胞的抑制作用[J];河北北方學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2009年01期

4 王英雪;劉佳;楊超;宋美英;紀(jì)亞楠;劉云;;二甲雙胍對(duì)犬乳腺腫瘤細(xì)胞周期及其相關(guān)蛋白的影響[J];畜牧與獸醫(yī);2017年04期

5 李基業(yè)，陸連榮，黎沾良，陸家齊，張雙喜，劉普選;針吸乳腺腫瘤細(xì)胞DNA含量分析[J];中華病理學(xué)雜志;1995年02期

6 沈志祥,趙樸,王鴻利,陳淑蓉,蔡敬仁;五種生物基質(zhì)對(duì)鼠乳腺腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和克隆形成的影響[J];上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1991年03期

7 李彥姝;劉芙蓉;張紅艷;李豐;;西妥昔單抗抑制乳腺腫瘤細(xì)胞的增殖[J];山西醫(yī)藥雜志(下半月刊);2013年12期

8 張榮蓉;任曉麗;向毅;李華濤;金鵬;馬興乾;劉云;;紫杉醇對(duì)犬乳腺腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用[J];中國獸醫(yī)雜志;2009年10期

9 馬興乾;金鵬;馮新暢;李華濤;唐大木;劉云;;光動(dòng)力學(xué)作用對(duì)犬乳腺腫瘤細(xì)胞IL-6和IL-2影響的試驗(yàn)[J];中國獸醫(yī)雜志;2010年02期

10 崔文;范宏剛;肖建華;馮國峰;姜巖;劉云;;犬乳腺腫瘤細(xì)胞系的生物學(xué)特性及p53因子表達(dá)分析[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 姚華;林德貴;喬富強(qiáng);田克恭;曹振;;犬乳腺腫瘤細(xì)胞系的建立與生物學(xué)特性分析[A];全國獸醫(yī)外科學(xué)第13次學(xué)術(shù)研討會(huì)、小動(dòng)物醫(yī)學(xué)第1次學(xué)術(shù)研討會(huì)暨奶牛疾病第3次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2006年

2 陳雙龍;歐陽忠;;多氯聯(lián)苯對(duì)人乳腺腫瘤細(xì)胞的影響及相關(guān)分子機(jī)制研究[A];全國高血壓防治知識(shí)推廣培訓(xùn)班暨健康血壓中國行福建漳州會(huì)論文綜合刊[C];2014年

3 呂永鋼;;基質(zhì)力學(xué)對(duì)骨修復(fù)與乳腺腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的調(diào)控[A];第二屆全國生物力學(xué)青年學(xué)者學(xué)術(shù)研討會(huì)摘要集[C];2016年

4 楊婉薇;劉澲雯;何怡青;杜艷;楊翠霞;王穎智;高鋒;;條索狀透明質(zhì)酸在乳腺腫瘤細(xì)胞BT549化療耐藥中的作用初探[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

5 呂永鋼;王婭;張小梅;趙博淵;;懸浮力學(xué)狀態(tài)通過誘導(dǎo)ABCC3過表達(dá)調(diào)控乳腺腫瘤細(xì)胞的耐藥性[A];第十二屆全國生物力學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨第十四屆全國生物流變學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議會(huì)議論文摘要匯編[C];2018年

6 白保東;溫波;;利用FDTD法計(jì)算天線陣列輻射作用下乳腺腫瘤的比吸收率[A];中國生物醫(yī)學(xué)工程進(jìn)展——2007中國生物醫(yī)學(xué)工程聯(lián)合學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2007年

7 李代強(qiáng);周金平;;乳腺腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)鐵蛋白受體表達(dá)Ag-NORs計(jì)數(shù)及其相互關(guān)系[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第五次會(huì)議論文摘要匯編[C];1992年

8 葉萍;常兆華;葉園園;韓寶三;;乳腺腫瘤冷凍消融體外實(shí)驗(yàn)研究[A];上海市制冷學(xué)會(huì)2013年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2013年

9 李豐;Ratnak.Vadlamudi;RakeshKumar;;人Arp2/3復(fù)合體的P41-Arc亞單位是一個(gè)Pak1相互作用底物,促進(jìn)乳腺腫瘤細(xì)胞惡性表型[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2003年

10 常成;Linda Bergersen;高曉群;;單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在低氧培養(yǎng)腦和乳腺腫瘤細(xì)胞膜上的密度變化[A];中國解剖學(xué)會(huì)2012年年會(huì)論文文摘匯編[C];2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前9條

1 郝勝男;乳腺腫瘤細(xì)胞來源的IL-35促進(jìn)腫瘤免疫逃逸和腫瘤進(jìn)展的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2019年

2 喻碧鶯;乳腺腫瘤細(xì)胞HSP70功能及其抑制劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的光學(xué)測(cè)量[D];福建師范大學(xué);2018年

3 郭會(huì)芹;乳腺腫瘤細(xì)胞中心體研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2006年

4 周彬;耐5-FU犬乳腺腫瘤細(xì)胞系的建立及其生物學(xué)特性的研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

5 楊超;阿司匹林對(duì)犬乳腺腫瘤細(xì)胞系CHMp和CHMm體內(nèi)外抑制機(jī)制研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

6 劉子維;RY10-4的抗腫瘤血管生成和侵襲研究[D];華中科技大學(xué);2013年

7 王瑜華;基于AFM-光學(xué)顯微術(shù)的乳腺腫瘤單細(xì)胞特征信息獲取[D];福建師范大學(xué);2016年

8 張小梅;懸浮力學(xué)狀態(tài)對(duì)乳腺腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的調(diào)控及其力學(xué)生物學(xué)機(jī)制[D];重慶大學(xué);2017年

9 楊翠霞;透明質(zhì)酸（HA）及其受體CD44在乳腺腫瘤靶向治療中的實(shí)驗(yàn)研究[D];上海交通大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張瑩;懸浮力學(xué)狀態(tài)通過誘導(dǎo)整合素β1表達(dá)上調(diào)促進(jìn)乳腺腫瘤細(xì)胞的外滲[D];重慶大學(xué);2017年

2 史偉峰;乳腺腫瘤細(xì)胞分子的表達(dá)及其與腫瘤細(xì)胞生物行為相關(guān)性的研究[D];蘇州大學(xué);2002年

3 孫冬冬;PTEN過表達(dá)下調(diào)PI3K/Akt信號(hào)通路抑制犬乳腺腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 徐新峰;犬乳腺腫瘤細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定[D];石河子大學(xué);2014年

5 劉佳;CNTN1基因沉默對(duì)犬乳腺腫瘤細(xì)胞系轉(zhuǎn)移調(diào)控的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

6 公維鎮(zhèn);銀蓮花的化學(xué)成分及生物活性研究[D];中央民族大學(xué);2011年

7 李貴;不同剛度三維脫細(xì)胞支架的制備及其對(duì)乳腺腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[D];重慶大學(xué);2017年

8 李情;犬乳腺腫瘤細(xì)胞周期同步化研究及紫杉醇對(duì)周期相關(guān)因子的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

9 徐玉栓;利用原子力顯微鏡對(duì)腫瘤細(xì)胞膜表面結(jié)構(gòu)的研究[D];鄭州大學(xué);2011年

10 李會(huì)平;P27、PCNA、CyclinD1等因子的表達(dá)和乳腺癌早期浸潤(rùn)的關(guān)系[D];河南科技大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2797437