【摘要】：目的:通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)青蒿琥酯(Artesunate,ART)對(duì)人頜下腺腺樣囊性癌SACC-83細(xì)胞系體外增殖、侵襲遷移能力及侵襲遷移相關(guān)標(biāo)志物表達(dá)的影響。方法:1.CCK-8法檢測(cè)25μmol/L,50μmol/L,100μmol/L,200μmol/L,400μmol/L,800μmol/L,1600μmol/L和3200μmol/L ART作用于體外培養(yǎng)的人腺樣囊性癌SACC-83細(xì)胞24 h、48 h和72 h后,對(duì)細(xì)胞增殖的影響,并根據(jù)結(jié)果篩選后續(xù)實(shí)驗(yàn)的用藥濃度。計(jì)算半數(shù)致死濃度(IC50),后續(xù)實(shí)驗(yàn)以1/4 IC05、1/2 IC50為體外實(shí)驗(yàn)干預(yù)濃度設(shè)定范圍的參考值;2.平板克隆試驗(yàn)檢測(cè)ART對(duì)SACC-83單個(gè)細(xì)胞增殖和形成克隆能力的影響;3.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度ART處理SACC-83細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞移動(dòng)能力的抑制作用;4.Transwell侵襲轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ART對(duì)SACC-83細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移過(guò)程的影響;5.免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)不同濃度ART干預(yù)48 h后細(xì)胞中E-cadherin、VEGFA蛋白的表達(dá)水平;6.實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)不同濃度ART干預(yù)細(xì)胞48 h后,SACC-83細(xì)胞中E-cadherin、COX-2和VEGFA m RNA表達(dá)的變化。結(jié)果:1.CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示不同濃度ART能有效抑制SACC-83細(xì)胞增殖,其抑制率隨藥物濃度及時(shí)間的增加而呈上升趨勢(shì),經(jīng)計(jì)算分析,藥物作用48 h ART對(duì)SACC-83細(xì)胞的IC50為462.60±35.15μM,IC05為59.28±39.86μM。后續(xù)實(shí)驗(yàn)以1/4 IC05 15μM、1/2 IC50 240μM為體外實(shí)驗(yàn)干預(yù)濃度設(shè)定范圍的參考值,后續(xù)侵襲遷移實(shí)驗(yàn)藥物干預(yù)濃度均選用15、30、60、120μM。2.平板克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示:不同濃度ART對(duì)SACC-83細(xì)胞克隆形成均有抑制作用,且各組間抑制率兩兩比較的差異均具有顯著性的意義(P0.05),呈藥物劑量依賴(lài)性。3.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果示:SACC-83細(xì)胞的遷移能力隨ART濃度的增加而減弱,與對(duì)照組相比,ART對(duì)各實(shí)驗(yàn)組SACC-83細(xì)胞的愈合能力均有顯著抑制的效果,各用藥組間比較,細(xì)胞劃痕愈合能力差異亦有顯著性的意義(F=54.586,P0.001)。4.Transwell侵襲遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:15μM ART即對(duì)SACC-83細(xì)胞的侵襲遷移能力有抑制作用,與對(duì)照組比較差異有顯著性的意義(P0.05),隨著藥物濃度的提高,抑制作用增強(qiáng)。5.免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)結(jié)果示:SACC-83細(xì)胞中VEGFA抗體染色區(qū)域的平均光密度值隨著ART藥物濃度的增加而逐漸遞減(F=326.054,P0.01),而E-cadherin抗體染色區(qū)域的平均光密度值則隨著ART藥物濃度的增加而上升(F=1503.760,P0.01)。6.RT-q PCR結(jié)果顯示:各濃度ART干預(yù)后,E-cadherin基因表達(dá)呈現(xiàn)出明顯的上升趨勢(shì)(F=2513.935,P0.01),而VEGFA、COX-2基因m RNA的表達(dá)量均呈現(xiàn)不同程度的下調(diào)(F=319.580,P0.01),(F=185.828,P0.01)。各用藥組與對(duì)照組相比差異具有顯著性的意義(P0.01)。結(jié)論:1.ART可抑制人唾液腺腺樣囊性癌細(xì)胞系SACC-83的體外增殖及克隆形成。2.ART可抑制SACC-83細(xì)胞體外侵襲和遷移的生物學(xué)行為。3.ART可下調(diào)SACC-83細(xì)胞中VEGFA、COX-2的表達(dá),上調(diào)E-cadherin的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R739.87
【圖文】：

檢測(cè) ART 對(duì) SACC-83 細(xì)胞生長(zhǎng)的影響5 μmol/L，50 μmol/L，100 μmol/L，200 μmol/L，4，1600 μmol/L 和 3200 μmol/L 共八種濃度 ART 的 完全培養(yǎng)基干預(yù) SACC-83 細(xì)胞 24 h、48 h 和 72 h 后度條件下 ART 對(duì) SACC-83 細(xì)胞的抑制率。結(jié)果顯SACC-83 細(xì)胞均有抑制作用，其抑制率隨藥物濃度圖 1）。通過(guò)對(duì)重復(fù)三次實(shí)驗(yàn)所獲的數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算，RT 對(duì) SACC-83 細(xì)胞的 IC50為 462.60 ± 35.15 μM，IC以 48 h 時(shí) 1/4 IC05、1/2 IC50為體外實(shí)驗(yàn)干預(yù)濃度設(shè) 15、30、60、120、240 μM 作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的藥物干 ART 溶劑的對(duì)照組。

ART(5 μmol/L) 311±10.1** 19.53±2.60ART(10 μmol/L) 245±7.5** 36.74±1.95ART(20 μmol/L) 166.3±8** 57.05±2.07ART(30 μmol/L) 85.7±6.4** 77.88±1.66ART(40 μmol/L) 33±4.4** 91.48±1.13注:與對(duì)照組相比，**P<0.01，*P<0.05ART 0 μM ART 5 μM ART 10 μM

圖 3 不同濃度 ART 對(duì) SACC-83 細(xì)胞克隆形成的抑制率itory rates ofART on the clone formation of SACC-83 cells, **P <驗(yàn)檢測(cè) ART 藥物作用下 SACC-83 細(xì)胞遷，60，120 和 240 μmol/L 濃度 ART 的不含 AR培養(yǎng)液進(jìn)行細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)，分別在孵育 0h，2察 ART 對(duì) SACC-83 細(xì)胞遷移能力的影響并拍件測(cè)量劃痕區(qū)域的面積變化，計(jì)算公式：細(xì)胞 h 時(shí)劃痕面積，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，計(jì)算平均值，計(jì)學(xué)分析。結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)起始時(shí)，劃痕區(qū)域 的培養(yǎng)，對(duì)照組的劃痕愈合明顯，各實(shí)驗(yàn)組中T 濃度的增加而減小。與對(duì)照組相比，ART愈合能力均有顯著抑制的效果，各用藥組間比

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2793687