【摘要】：目的:通過體外實驗檢測青蒿琥酯(Artesunate,ART)對人頜下腺腺樣囊性癌SACC-83細胞系體外增殖、侵襲遷移能力及侵襲遷移相關標志物表達的影響。方法:1.CCK-8法檢測25μmol/L,50μmol/L,100μmol/L,200μmol/L,400μmol/L,800μmol/L,1600μmol/L和3200μmol/L ART作用于體外培養(yǎng)的人腺樣囊性癌SACC-83細胞24 h、48 h和72 h后,對細胞增殖的影響,并根據結果篩選后續(xù)實驗的用藥濃度。計算半數致死濃度(IC50),后續(xù)實驗以1/4 IC05、1/2 IC50為體外實驗干預濃度設定范圍的參考值;2.平板克隆試驗檢測ART對SACC-83單個細胞增殖和形成克隆能力的影響;3.細胞劃痕實驗檢測不同濃度ART處理SACC-83細胞后對細胞移動能力的抑制作用;4.Transwell侵襲轉移實驗檢測ART對SACC-83細胞侵襲及轉移過程的影響;5.免疫細胞化學染色法檢測不同濃度ART干預48 h后細胞中E-cadherin、VEGFA蛋白的表達水平;6.實時熒光定量PCR法檢測不同濃度ART干預細胞48 h后,SACC-83細胞中E-cadherin、COX-2和VEGFA m RNA表達的變化。結果:1.CCK8實驗結果顯示不同濃度ART能有效抑制SACC-83細胞增殖,其抑制率隨藥物濃度及時間的增加而呈上升趨勢,經計算分析,藥物作用48 h ART對SACC-83細胞的IC50為462.60±35.15μM,IC05為59.28±39.86μM。后續(xù)實驗以1/4 IC05 15μM、1/2 IC50 240μM為體外實驗干預濃度設定范圍的參考值,后續(xù)侵襲遷移實驗藥物干預濃度均選用15、30、60、120μM。2.平板克隆實驗結果提示:不同濃度ART對SACC-83細胞克隆形成均有抑制作用,且各組間抑制率兩兩比較的差異均具有顯著性的意義(P0.05),呈藥物劑量依賴性。3.細胞劃痕實驗結果示:SACC-83細胞的遷移能力隨ART濃度的增加而減弱,與對照組相比,ART對各實驗組SACC-83細胞的愈合能力均有顯著抑制的效果,各用藥組間比較,細胞劃痕愈合能力差異亦有顯著性的意義(F=54.586,P0.001)。4.Transwell侵襲遷移實驗結果顯示:15μM ART即對SACC-83細胞的侵襲遷移能力有抑制作用,與對照組比較差異有顯著性的意義(P0.05),隨著藥物濃度的提高,抑制作用增強。5.免疫細胞化學法檢測結果示:SACC-83細胞中VEGFA抗體染色區(qū)域的平均光密度值隨著ART藥物濃度的增加而逐漸遞減(F=326.054,P0.01),而E-cadherin抗體染色區(qū)域的平均光密度值則隨著ART藥物濃度的增加而上升(F=1503.760,P0.01)。6.RT-q PCR結果顯示:各濃度ART干預后,E-cadherin基因表達呈現出明顯的上升趨勢(F=2513.935,P0.01),而VEGFA、COX-2基因m RNA的表達量均呈現不同程度的下調(F=319.580,P0.01),(F=185.828,P0.01)。各用藥組與對照組相比差異具有顯著性的意義(P0.01)。結論:1.ART可抑制人唾液腺腺樣囊性癌細胞系SACC-83的體外增殖及克隆形成。2.ART可抑制SACC-83細胞體外侵襲和遷移的生物學行為。3.ART可下調SACC-83細胞中VEGFA、COX-2的表達,上調E-cadherin的表達。
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R739.87
【圖文】：

檢測 ART 對 SACC-83 細胞生長的影響5 μmol/L，50 μmol/L，100 μmol/L，200 μmol/L，4，1600 μmol/L 和 3200 μmol/L 共八種濃度 ART 的 完全培養(yǎng)基干預 SACC-83 細胞 24 h、48 h 和 72 h 后度條件下 ART 對 SACC-83 細胞的抑制率。結果顯SACC-83 細胞均有抑制作用，其抑制率隨藥物濃度圖 1）。通過對重復三次實驗所獲的數據進行計算，RT 對 SACC-83 細胞的 IC50為 462.60 ± 35.15 μM，IC以 48 h 時 1/4 IC05、1/2 IC50為體外實驗干預濃度設 15、30、60、120、240 μM 作為后續(xù)實驗的藥物干 ART 溶劑的對照組。

ART(5 μmol/L) 311±10.1** 19.53±2.60ART(10 μmol/L) 245±7.5** 36.74±1.95ART(20 μmol/L) 166.3±8** 57.05±2.07ART(30 μmol/L) 85.7±6.4** 77.88±1.66ART(40 μmol/L) 33±4.4** 91.48±1.13注:與對照組相比，**P<0.01，*P<0.05ART 0 μM ART 5 μM ART 10 μM

圖 3 不同濃度 ART 對 SACC-83 細胞克隆形成的抑制率itory rates ofART on the clone formation of SACC-83 cells, **P <驗檢測 ART 藥物作用下 SACC-83 細胞遷，60，120 和 240 μmol/L 濃度 ART 的不含 AR培養(yǎng)液進行細胞劃痕實驗，分別在孵育 0h，2察 ART 對 SACC-83 細胞遷移能力的影響并拍件測量劃痕區(qū)域的面積變化，計算公式：細胞 h 時劃痕面積，實驗重復三次，計算平均值，計學分析。結果顯示：實驗起始時，劃痕區(qū)域 的培養(yǎng)，對照組的劃痕愈合明顯，各實驗組中T 濃度的增加而減小。與對照組相比，ART愈合能力均有顯著抑制的效果，各用藥組間比

【參考文獻】

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本文編號：2793687