發(fā)布時(shí)間：2020-08-14 23:05

【摘要】：背景胰腺癌惡性程度高,預(yù)后差。化療藥物吉西他濱(Gemcitabine,GEM)在胰腺癌中為首選藥物之一。但是臨床上有許多患者對(duì)化療不敏感,這可能與胰腺癌對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性有關(guān)。p38 MAP激酶(p38 MAPKs)作為一個(gè)重要的酶家族介導(dǎo)細(xì)胞外信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。絲裂原活化蛋白激酶13(Mitogen-activated protein kinase 13,MAPK13)作為該家族的一員在某些細(xì)胞和組織中表達(dá),并通過K-Ras-MAPK-ERK2-MMP途徑在胰腺癌中發(fā)揮促癌作用。目的本研究旨在探討MAPK13是否影響胰腺癌吉西他濱化療敏感性。方法MTT比色法檢測(cè)GEM對(duì)胰腺癌生長(zhǎng)的影響及體外干擾MAPK13的胰腺癌細(xì)胞經(jīng)化療藥物GEM處理不同時(shí)間的細(xì)胞生長(zhǎng)情況;Real-time PCR檢測(cè)化療藥GEM處理不同時(shí)間后MAPK13在胰腺癌細(xì)胞的m RNA的表達(dá)水平及sh RNA慢病毒在胰腺癌中干擾靶基因后MAPK13 m RNA的表達(dá)水平;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)體內(nèi)檢測(cè)干擾MAPK13的胰腺癌細(xì)胞經(jīng)化療藥物GEM處理后對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的作用;通過基因測(cè)序技術(shù)檢測(cè)鑒別分析上調(diào)或下調(diào)的差異基因;使用Funrich和KEGG進(jìn)行差異基因功能和途徑富集分析;使用Cytoscape進(jìn)行蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)建設(shè);SPSS l9.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析,不同處理組之間的差異采用成組t檢驗(yàn)。結(jié)果GEM抑制胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng),且呈濃度依賴性,但不呈時(shí)間依賴性;化療藥物GEM處理后胰腺癌細(xì)胞MAPK13在m RNA水平的表達(dá)上調(diào),且呈時(shí)間依賴性;在MAPK13的6組不同序列包裝的sh RNA慢病毒感染了胰腺癌細(xì)胞PANC-1中,挑選了干擾MAPK13 1號(hào)和4號(hào)位點(diǎn)的胰腺癌細(xì)胞進(jìn)行深入實(shí)驗(yàn);MTT比色法體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示干擾MAPK13可增強(qiáng)GEM對(duì)胰腺癌細(xì)胞活性的抑制作用;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在體內(nèi)證明干擾MAPK13可增強(qiáng)GEM對(duì)胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的抑制作用;分析基因測(cè)序結(jié)果鑒別差異表達(dá)基因;并使用Funrich分析,結(jié)果顯示差異基因主要富集在包涵體,細(xì)胞質(zhì),質(zhì)膜,外泌體,可溶組分和基質(zhì)膜等細(xì)胞組分的蛋白質(zhì)代謝,新陳代謝,突觸小泡運(yùn)輸和肌肉發(fā)育等生物過程中;也富集在絲氨酸型肽酶活性、轉(zhuǎn)氨酶活性、熱休克蛋白活性、磷酸酶活性、脂肪酶酶活性和受體結(jié)合等;使用KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)進(jìn)行通路富集分析中,顯示差異基因主要富集在甘氨酸,絲氨酸和蘇氨酸代謝途徑,細(xì)胞代謝途徑,碳代謝途徑,氨基酸的生物合成途徑,蛋白質(zhì)在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的加工途徑和PI3K-Akt信號(hào)途徑等;在蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)作用(protein protein interaction,PPI)網(wǎng)絡(luò)建設(shè)中,差異基因中主要為上調(diào)基因HSPA1B、DNAJA1編碼的蛋白與下調(diào)基因XBP1、VEGFA、CPS1、SLC3A2等編碼的蛋白的相互作用。結(jié)論體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證明干擾MAPK13可增強(qiáng)吉西他濱抑制胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的作用,這表明干擾MAPK13可增強(qiáng)胰腺癌細(xì)胞對(duì)吉西他濱的化療敏感性。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.9
【圖文】：

理不同時(shí)間胰腺癌細(xì)胞的 MAPK13理組比較 P < 0.01，*表示處理組與率的檢測(cè) MAPK13 表達(dá)的胰腺癌細(xì)胞 PAN 慢病毒感染了胰腺癌細(xì)胞，結(jié)果顯A水平表達(dá)分別為對(duì)照組的11.92%、），因此我們選擇了干擾 MAPK13

M）處理不同時(shí)間胰腺癌細(xì)胞的 MAPK13 mRN與未處理組比較 P < 0.01，*表示處理組與未處擾效率的檢測(cè)了干擾 MAPK13 表達(dá)的胰腺癌細(xì)胞 PANC-1 細(xì)hRNA 慢病毒感染了胰腺癌細(xì)胞，結(jié)果顯示 PAmRNA水平表達(dá)分別為對(duì)照組的11.92%、93.41圖 3），因此我們選擇了干擾 MAPK13 1 和 。

圖 4：GEM（10mM）處理組、干擾組、GEM（10mM ）處理的干擾組及與對(duì)照組不同時(shí)間點(diǎn) 24h（A）、48h（B）、72h（C）細(xì)胞活性比較。注：**表示干擾組與未干擾組比較 P < 0.01，*表示干擾組與未干擾組比較 P < 0.05

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本文編號(hào)：2793658