發(fā)布時(shí)間：2020-08-14 19:46

【摘要】：1.研究背景和目的食管癌是世界上常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,世界衛(wèi)生組織2014年世界癌癥研究報(bào)告指出:中國(guó)食管癌的發(fā)生率約占全球50%左右,是世界上食管癌最高發(fā)的國(guó)家。早期食管癌患者臨床多無(wú)明顯的特異性癥狀,被發(fā)現(xiàn)時(shí)大部分患者已屬于中晚期,生活質(zhì)量偏低下,總的5年生存率不足20%。我國(guó)食管癌較突出的兩個(gè)特點(diǎn)是明顯的地域特征和家族聚集現(xiàn)象。不同地區(qū),不同家族史患者的生存期有明顯差別,另外腫瘤期別、患者年齡、吸煙飲酒等飲食習(xí)慣、遺傳易感性、病理類(lèi)型、大體類(lèi)型、腫瘤部位、治療方式等也可以影響食管癌患者的生存期,但是臨床上逐漸發(fā)現(xiàn)以上因素相同的患者不同性別間生存期存在差異。既往有關(guān)食管癌性別間差異的研究,都是針對(duì)某一個(gè)或幾個(gè)臨床特征之間的對(duì)比分析,沒(méi)有系統(tǒng)或較大樣本量的對(duì)比研究。本文旨在大樣本的對(duì)食管癌不同性別間各臨床病理參數(shù)及生存期進(jìn)行對(duì)比分析;研究性激素受體:雌激素受體(estrogen receptor,ER)(包括ERα和ERβ)、孕激素受體(progesterone receptor,PR)和雄激素受體(androgen receptor,AR)對(duì)食管鱗癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者生存期的影響及在男女ESCC組織中的表達(dá);并對(duì)ESCC患者的癌及癌旁組織進(jìn)行全外顯子測(cè)序(whole exome sequence,WES)及部分相關(guān)蛋白P53、E-鈣黏蛋白1(Cadherin1,CDH1)進(jìn)行免疫組化檢驗(yàn),希望找到影響食管癌男女生存期差異的機(jī)制,為后續(xù)食管癌的性別差異、發(fā)病機(jī)制及預(yù)防的研究找到強(qiáng)有力的數(shù)據(jù)支持和理論依據(jù),為治療食管癌提供新的思路。2.材料與方法2.1研究對(duì)象研究對(duì)象均來(lái)自鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院河南省食管癌重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室資料庫(kù),均病理證實(shí)為原發(fā)食管癌患者,不合并其他腫瘤,生存期明確,確診時(shí)間為1973年-2017年,有準(zhǔn)確的病歷號(hào)和病理號(hào),有詳細(xì)的家庭住址或有效的電話聯(lián)系方式,能隨訪到患者本人或直系親屬。2.2研究方法2.2.1流行病學(xué)調(diào)查對(duì)來(lái)自安陽(yáng)市腫瘤醫(yī)院的23,269例食管癌患者的一般信息、臨床病理信息進(jìn)行男女間的比較,及以上指標(biāo)相同條件下男女單因素生存分析,并對(duì)食管癌患者進(jìn)行多因素生存分析。2.2.2免疫組織化學(xué)常規(guī)免疫組織化學(xué)、HE染色。利用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)1,035例(男性711例,女性324例)ESCC患者的癌及癌旁對(duì)照組織中ERα、ERβ、PR和AR蛋白表達(dá)情況,并就其表達(dá)情況進(jìn)行ESCC患者預(yù)后生存分析。2.2.3 WES及部分相關(guān)蛋白驗(yàn)證WES:用DNA提取試劑盒提取ESCC組織及癌旁正常組織,質(zhì)檢合格后,建立DNA文庫(kù),進(jìn)行文庫(kù)質(zhì)檢后采用二代測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行WES。采用標(biāo)準(zhǔn)化流程比對(duì)分析數(shù)據(jù),最終篩選出與ESCC相關(guān)的高頻突變基因和突變類(lèi)型。對(duì)篩選出來(lái)的突變類(lèi)型的頻率,采用非負(fù)矩陣分解(Non-negative Matrix Factorization,NMF)的方法將點(diǎn)突變分解為多個(gè)不同的突變特征,然后與已知的30種突變特征進(jìn)行聚類(lèi)分析,利用與樣本突變特征相似的已知特征的注釋信息解釋樣本突變過(guò)程。比較男女ESCC患者間高頻突變基因、突變特征有無(wú)差異,同時(shí)對(duì)部分相關(guān)蛋白在ESCC中的表達(dá)情況及對(duì)預(yù)后的影響進(jìn)行分析。進(jìn)入測(cè)序部分樣本例數(shù)為523例,測(cè)序樣本中375例進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn);進(jìn)行免疫組化樣本除進(jìn)行測(cè)序的375例外,增加樣本量至5,736例。2.2.4統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件,采用卡方檢驗(yàn)分析男女性臨床病理因素的差異,性激素受體蛋白、P53蛋白、CDH1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率、男女性陽(yáng)性表達(dá)率差異,以及P53蛋白、CDH1蛋白陽(yáng)性表達(dá)、陰性表達(dá)中相應(yīng)基因突變率,采用Kaplan-Meier及Cox多因素回歸分析以上指標(biāo)與患者預(yù)后關(guān)系,檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)均取α=0.05。3.結(jié)果3.1男女食管癌患者流行病學(xué)調(diào)查及生存分析3.1.1臨床病理特征及單因素生存分析3.1.1.1一般情況及生活方式男女發(fā)生率及生存期差異共入組食管癌患者23,269例,其中男性14,408例(61.0%),女性8,861例(39.0%),男性發(fā)病率明顯高于女性,男/女=1.63;在診斷年齡小于等于55歲、診斷年齡大于55歲、有吸煙史、有飲酒史、已婚患者、結(jié)婚年齡小于等于20歲及結(jié)婚年齡大于20歲患者中均有男性比例高于女性,且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);以上任何一因素相同時(shí),均有女性生存期長(zhǎng)于男性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.1.1.2臨床病理特征男女發(fā)生率及生存期差異在家族史、高低發(fā)區(qū)、發(fā)生部位、病理類(lèi)型、早中晚分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T分期、N分期、TNM分期、病理分級(jí)方面男女發(fā)病率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);在分化程度和M分期方面,男女發(fā)病率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);以上臨床病理參數(shù)某一因素相同時(shí),絕大部分存在女性生存期長(zhǎng)于男性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.1.1.3治療方式男女發(fā)生率及生存期差異男女均以單純手術(shù)治療為主要治療方式。單純手術(shù)、單純放療和單純化療男性所占比例均高于女性,都存在女性生存期長(zhǎng)于男性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.1.2多因素生存分析(COX回歸)性別(男vs.女,HR=0.830,95%CI:0.752-0.916);診斷年齡(≥55歲vs.≤55歲,HR=1.307,95%CI:1.183-1.444);家族史(陽(yáng)性vs.陰性,HR=1.099,95%CI:1.018-1.188);發(fā)生部位(頸段vs.胸上段vs.胸中段vs.胸下段,HR=0.861,95%CI:0.808-0.916);分化程度(高分化vs.中分化vs.低分化vs.未分化,HR=1.167,95%CI:1.103-1.235);N分期(N0 vs.N1 vs.N2 vs.N3,HR=1.222,95%CI:1.143-1.306);病理分級(jí)(I期vs.II期vs.III期vs.IV期,HR=1.164,95%CI:1.016-1.334);早中晚分期(早期vs.中晚期,HR=1.286,95%CI:1.081-1.529)是影響食管癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。3.2性激素在男女ESCC組織中的表達(dá)及生存分析3.2.1性激素受體在男女性ESCC患者組織中的表達(dá)3.2.1.1 ERα、ERβ、PR和AR蛋白在癌細(xì)胞的胞漿和胞核內(nèi)均有表達(dá)。3.2.1.2女性ESCC患者ERα、ERβ、PR陽(yáng)性表達(dá)率均高于男性ESCC患者,AR陽(yáng)性表達(dá)率男性高于女性,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.2.1.3男女ESCC患者癌組織中ERα、ERβ、PR和AR蛋白陽(yáng)性表達(dá)率在診斷年齡、家族史、高低發(fā)區(qū)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)等方面有差異,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.2.2性激素受體與ESCC患者生存預(yù)后分析3.2.2.1單因素生存分析ERα、ERβ、PR和AR蛋白是影響ESCC患者預(yù)后的因素;ERα、ERβ、PR蛋白陽(yáng)性患者的生存期長(zhǎng)于表達(dá)陰性的患者(P0.05),AR蛋白陽(yáng)性患者的生存期短于表達(dá)陰性的患者(P0.05);ERα、PR蛋白陽(yáng)性患者中男女生存期差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),ERβ、AR蛋白陽(yáng)性患者中男女性患者生存期差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.3.2.2多因素生存分析ERb(HR,0.673,95%CI:0.567-0.798)和AR(HR,1.572,95%CI:1.306-1.892)是影響ESCC預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。3.3男女ESCC組織WES、部分相關(guān)蛋白表達(dá)及與生存期的關(guān)系3.3.1 WES3.3.1.1體細(xì)胞突變男性體細(xì)胞突變數(shù)目明顯多于女性,男女體細(xì)胞突變比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.3.1.2高頻突變基因檢測(cè)到高頻突變基因共114個(gè),與ESCC生存期有關(guān)的關(guān)鍵基因13個(gè),包括P53、CDH1等。114個(gè)高頻突變基因,男女ESCC間無(wú)顯著差異(P0.05)。3.3.1.3堿基置換突變類(lèi)型及突變特征男女ESCC患者6種堿基置換突變類(lèi)型(CA/GT,CG/GC,CT/GA,TA/AT,TC/AG和TG/AC)中,有3種堿基置換突變類(lèi)型(CT/GA,TC/AG,TG/AC)在男女兩組樣本中所占比例差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);檢測(cè)到兩個(gè)突變特征:signature.1和signature.17,在男女ESCC間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.3.1.4 P53和CDH1突變情況男女ESCC患者P53、CDH1基因突變率、點(diǎn)突變率、6種堿基置換突變類(lèi)型所占比例差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)、陰性表達(dá)中基因突變率分別為67.5%和58.8%,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);P53基因突變、未突變患者間生存期差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);P53蛋白表達(dá)陽(yáng)性中不同基因突變類(lèi)型ESCC患者生存期差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)、陰性表達(dá)患者基因突變類(lèi)型比率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),蛋白表達(dá)陽(yáng)性者中,突變類(lèi)型以錯(cuò)義突變比率最高;CDH1蛋白陽(yáng)性表達(dá)、陰性表達(dá)中基因突變率分別為1.0%和9.7%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.3.2 P53和CDH1在男女食管癌組織中的表達(dá)及生存分析3.3.2.1男女ESCC組織中P53和CDH1蛋白表達(dá)P53和CDH1蛋白在ESCC中均有表達(dá),P53蛋白主要在細(xì)胞核表達(dá),CDH1主要在細(xì)胞膜表達(dá);男女ESCC陽(yáng)性表達(dá)率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.3.2.2 P53和CDH1蛋白表達(dá)與ESCC患者預(yù)后的生存分析P53蛋白和CDH1蛋白均有陽(yáng)性表達(dá)患者生存期短于陰性表達(dá)者,陽(yáng)性表達(dá)患者女性生存期優(yōu)于男性,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.結(jié)論4.1男女食管癌患者在診斷年齡、吸煙史、飲酒史、是否結(jié)婚、結(jié)婚年齡、婚姻狀況、家族史、高低發(fā)區(qū)、發(fā)生部位、病理類(lèi)型、早中晚分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、病理分級(jí)和治療方式方面所占比例有差異;單因素生存分析顯示:診斷年齡、吸煙史、是否結(jié)婚、結(jié)婚年齡、婚姻狀況、家族史、高低發(fā)區(qū)、發(fā)生部位、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T分期、N分期、M分期、TNM分期、早中晚分期及治療方式是影響男女食管癌患者預(yù)后的因素;Cox多因素生存分析顯示:性別、診斷年齡、家族史、發(fā)生部位、分化程度、N分期、病理分級(jí)和早中晚期是影響食管癌預(yù)后的獨(dú)立因素;4.2 ERα、ERβ、PR和AR在男女ESCC患者組織中均有表達(dá);男女ESCC患者表達(dá)水平在診斷年齡、高低發(fā)區(qū)、有無(wú)家族史、淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移及病理分期方面有差異;單因素生存分析顯示:ERα、ERβ、PR和AR是影響ESCC患者預(yù)后的因素;Cox多因素生存分析顯示:ERβ和AR是影響ESCC預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素;4.3 WES顯示:男女ESCC患者體細(xì)胞突變數(shù)目比例無(wú)明顯差異;堿基置換突變類(lèi)型CT/GA,TC/AG,TG/AC的比例不同及突變特征Signature.1和Signature.17的不同可能是影響ESCC患者男女生存期不同的分子基礎(chǔ);P53和CDH1基因在男女ESCC患者中基因突變比例、點(diǎn)突變比例及6種堿基置換突變類(lèi)型比例均無(wú)明顯差異;P53基因突變與未突變ESCC患者生存期無(wú)明顯差異,P53不同的突變類(lèi)型可能與P53蛋白的陽(yáng)性表達(dá)和生存期有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R735.1
【圖文】：

男女性食管癌患者生存期

病理分級(jí) .152 .069 4.774 1 .029 1.164 1.016 1.334早期中晚期 .251 .089 8.037 1 .005 1.286 1.081 1.529圖 1.1 男女性食管癌患者生存期 圖1.2 診斷年齡小于等于55歲食管癌患者男女生存期圖 1.3 診斷年齡大于 55 歲食管癌患者男女生存期 圖 1.4 吸煙食管癌患者男女生存期χ2=78.676P=0.000χ2=1.054P=0.008χ2=4

診斷年齡大于55歲食管癌患者男女生存期

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2793468