【摘要】：肝細(xì)胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是嚴(yán)重危害人類健康的惡性疾病,其致死率位居腫瘤致死率第二。我國的肝細(xì)胞肝癌患者人數(shù)約為世界的55%,總體發(fā)病率位居國內(nèi)腫瘤發(fā)病率第三位。肝細(xì)胞肝癌可由多種致病因素引起其中乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)慢性感染是80%肝細(xì)胞肝癌的誘發(fā)因素。HBV是一種部分雙鏈DNA病毒,感染肝細(xì)胞后,可通過多方面途徑引起細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)及信號(hào)通路的改變,進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。一方面,HBVDNA整合于宿主基因組影響基因的穩(wěn)定性或激活癌基因/滅活抑癌基因,影響細(xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡等過程;另一方面,X、S等HBV編碼蛋白可通過反式激活作用或蛋白-蛋白相互作用,激活信號(hào)通路,影響細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移相關(guān)基因的表達(dá);同時(shí),HBV間接調(diào)控肝臟免疫細(xì)胞功能,介導(dǎo)肝臟微環(huán)境炎癥反應(yīng),促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。盡管已有大量研究揭示HBV誘發(fā)肝細(xì)胞肝癌的過程及機(jī)制,但目前的治愈率仍有待提高,因此,深入研究HBV介導(dǎo)肝細(xì)胞肝癌的發(fā)病機(jī)制具有重要意義。ZHX2是近年發(fā)現(xiàn)的參與肝細(xì)胞肝癌、白血病等多種腫瘤的抑癌基因。前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞研究證實(shí)ZHX2抑制甲胎蛋白(alphafetoprotein AFP)和Glypican3(Gpc3)等胚胎發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)室前期研究證明,在肝臟癌旁組織中ZHX2的核表達(dá)水平明顯高于腫瘤組織,同時(shí),ZHX2通過抑制細(xì)胞周期蛋白CyclinA和CyclinE的表達(dá),從而抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn),ZHX2通過與NF-Y結(jié)合于多藥耐藥蛋白(Multi-Drug Resistance 1,MDR1)編碼基因的啟動(dòng)子區(qū)域抑制其表達(dá),增強(qiáng)肝癌細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥物的敏感性。上述研究強(qiáng)烈提示ZHX2是新型肝癌抑癌基因,在HCC發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。然而,ZHX2是否在HBV相關(guān)HCC中發(fā)揮作用尚不明確。近期文獻(xiàn)證實(shí),在霍奇金淋巴瘤中,包含ZHX2基因的8號(hào)染色體與4號(hào)染色體發(fā)生染色體重組,引起ZHX2表達(dá)降低;在一項(xiàng)家族性皮質(zhì)基底核退化癥病例分析中,ZHX2表達(dá)水平下降并可能被miR-4277調(diào)控。但在HBV相關(guān)肝細(xì)胞肝癌中,作為抑癌基因的ZHX2受何種調(diào)控及其機(jī)制尚未被報(bào)道。綜上,本研究利用肝癌組織、小鼠模型以及體外肝癌細(xì)胞系,通過多種手段深入探究ZHX2在HBV相關(guān)肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及調(diào)控方式,從而以新的角度揭示HBV促進(jìn)肝細(xì)胞肝癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)機(jī)制。獲得如下主要結(jié)果:一、HBV陽性肝臟組織中ZHX2的表達(dá)水平明顯降低為研究HBV對(duì)ZHX2的可能調(diào)控作用,本研究首先在臨床肝癌組織、HBV轉(zhuǎn)基因鼠肝組織中比較HBV感染對(duì)ZHX2表達(dá)水平的影響。1.臨床肝癌組織標(biāo)本檢測(cè)發(fā)現(xiàn)HBV陽性肝癌組織內(nèi)ZHX2表達(dá)明顯減低收集共36例肝癌組織和癌旁組織標(biāo)本,qRT-PCR檢測(cè)ZHX2表達(dá)水平。結(jié)果顯示,與血清學(xué)檢測(cè)HBV陰性患者相比,HBV陽性患者的肝癌組織中ZHX2高水平表達(dá)比例顯著降低(11/17,65%vs.1/7,14%,χ2=54.42,df=1,P0.0001)。在HBV陽性患者中,腫瘤組織內(nèi)的ZHX2表達(dá)水平明顯低于癌旁組織(4/16,25%vs.9/12,75%,χ2=50,df=1,P0.0001),與 ZHX2 的抑癌基因作用相一致。2.HBV轉(zhuǎn)基因小鼠肝細(xì)胞內(nèi)ZHX2表達(dá)顯著降低分別取6只C57B/6野生型小鼠和HBV轉(zhuǎn)基因(HBV-Tg)小鼠的肝臟,離心法分離肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞。qRT-PCR和Western blot檢測(cè)肝組織和純化肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的ZHX2表達(dá)情況。結(jié)果表明,HBV轉(zhuǎn)基因小鼠的肝組織內(nèi)的ZHX2 mRNA明顯低于野生型小鼠(P0.05);與此一致,HBV轉(zhuǎn)基因小鼠的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞內(nèi)ZHX2mRNA及蛋白表達(dá)水平也明顯低于野生型小鼠肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞(P0.01)。二、HBV及其編碼蛋白過表達(dá)明顯抑制肝癌細(xì)胞系ZHX2表達(dá),其中HBx作用最強(qiáng)為進(jìn)一步驗(yàn)證HBV對(duì)ZHX2的調(diào)控作用,本研究在不同肝癌細(xì)胞系中過表達(dá)HBV及其編碼蛋白,并檢測(cè)ZHX2。1.HBV感染明顯抑制肝癌細(xì)胞的ZHX2表達(dá)純化HBV病毒,感染穩(wěn)定表達(dá)HBV受體NTCP的HepG2-NTCP細(xì)胞系,分別收取感染3天和5天后的HepG2-NTCP細(xì)胞和上清。ELISA法檢測(cè)上清中-HBsAg表達(dá)情況,并且分別通過RT-PCR、qRT-PCR和Western blot方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)pgRNA、HBx和ZHX2表達(dá)水平。結(jié)果顯示,純化的HBV成功感染HepG2-NTCP細(xì)胞。與未感染HBV的細(xì)胞相比,感染3天和5天后的細(xì)胞內(nèi)ZHX2 mRNA和蛋白表達(dá)水平均明顯下降。2.HBV及其不同編碼蛋白過表達(dá)顯著抑制不同肝癌細(xì)胞系的ZHX2表達(dá)分別在HepG2、SMMC7721、QSG7701三個(gè)肝癌細(xì)胞系中,過表達(dá)1.1倍HBV基因組質(zhì)粒pcDNA3-HBV1.1和HBV編碼蛋白質(zhì)粒pcDNA3-preS2-HA、pcDNA3-HBx-HA、pcDNA3-HBc-HA 以及空載體質(zhì)粒 pcDNA3。轉(zhuǎn)染 48 小時(shí)后,以RT-PCR和Western blot方法檢測(cè)ZHX2表達(dá)。結(jié)果表明,與陰性對(duì)照細(xì)胞相比,過表達(dá)1.1倍HBV及preS2、HBx、HBc的細(xì)胞內(nèi)ZHX2mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著降低,其中,轉(zhuǎn)染HBx細(xì)胞的ZHX2降低水平最為明顯。3.干擾肝癌細(xì)胞系HBV編碼蛋白后ZHX2表達(dá)水平明顯升高合成針對(duì)preS2、HBx、HBc的反義寡核苷酸,分別轉(zhuǎn)染整合有HBV基因組的HepG2.2.15細(xì)胞,RT-PCR和Western blot方法檢測(cè)細(xì)胞的preS2、HBx、HBc和ZHX2表達(dá)。結(jié)果顯示,反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染有效干擾preS2、HBx、HBc表達(dá)。與轉(zhuǎn)染隨機(jī)設(shè)計(jì)的反義寡核苷酸對(duì)照細(xì)胞相比,干擾preS2、HBx、HBc表達(dá)后,HepG2.2.15細(xì)胞內(nèi)ZHX2 mRNA和蛋白表達(dá)均顯著升高,其中,干擾HBx表達(dá)后,ZHX2水平上升現(xiàn)象最為明顯。綜上,以上體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明,HBV及其編碼蛋白明顯抑制肝癌細(xì)胞中ZHX2表達(dá),其中HBx對(duì)ZHX2的調(diào)控作用最為明顯。三、HBV通過HBx限制ZHX2對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用為進(jìn)一步探究HBV是否影響ZHX2的功能,本研究利用小鼠模型和肝癌細(xì)胞系進(jìn)行系列實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn):1.HBx顯著限制ZHX2對(duì)荷瘤鼠體內(nèi)肝癌細(xì)胞臟長(zhǎng)的抑制作用小鼠肝癌細(xì)胞株H22皮下注射,制備BALB/c荷瘤小鼠,待腫瘤直徑達(dá)3mm,分別瘤內(nèi)注射等量 pcDNA3(20μg),pcDNA3+pcZHX2(10μg+10μg),pcHBx+pcZHX2(10μg+10μg),并測(cè)量腫瘤直徑,12天后取腫瘤并稱重。RT-PCR和Western blot結(jié)果證明,瘤內(nèi)注射pcHBx和pcZHX2質(zhì)粒后,HBx和ZHX2表達(dá)水平明顯升高。腫瘤生長(zhǎng)曲線和瘤重測(cè)量結(jié)果均顯示,與陰性對(duì)照組相比,單一注射ZHX2可顯著抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng),加入HBx后腫瘤生長(zhǎng)明顯加快并且與陰性對(duì)照組相近(P0.05)。2.HBx明顯消除ZHX2對(duì)體外肝癌細(xì)胞系增殖的抑制作用在HepG2細(xì)胞中轉(zhuǎn)染與瘤內(nèi)注射組別相同的質(zhì)粒,48h后分別進(jìn)行EdU染色、Western blot。熒光顯微鏡觀測(cè)發(fā)現(xiàn),與轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照細(xì)胞相比,高表達(dá)ZHX2的細(xì)胞中,EdU陽性染色細(xì)胞比例明顯降低,而HBx、ZHX2共轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)的EdU陽性染色細(xì)胞比例顯著回升(P0.05),提示HBx破壞了 ZHX2對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。PCNA表達(dá)檢測(cè)進(jìn)一步驗(yàn)證了上述結(jié)果:與ZHX2過表達(dá)細(xì)胞相比,HBx與ZHX2共轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞增殖相關(guān)抗原PCNA表達(dá)明顯恢復(fù)。以上體內(nèi)外研究結(jié)果表明,HBx抑制ZHX2的表達(dá)并且限制ZHX2對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。但是對(duì)于HBx調(diào)控ZHX2的機(jī)制仍知之甚少。有研究報(bào)道,多種microRNA可能參與調(diào)控ZHX2的表達(dá)因此本研究推測(cè)可能有microRNA參與HBV對(duì)ZHX2的抑制作用過程中。四、HBV尤其是HBx通過上調(diào)miR-155促進(jìn)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)1.miR-155可能是HBx抑制ZHX2表達(dá)的關(guān)鍵miRNA為探索在HBV抑制ZHX2過程中可能參與的microRNA,本研究首先利用BEL-7402肝癌細(xì)胞系過表達(dá)pcDNA3-HBx,通過microRNA microarray分析差異表達(dá)的microRNA。同時(shí),通過microRNA預(yù)測(cè)網(wǎng)站(www.microrna.org)分析靶向作用于ZHX2基因的microRNA。結(jié)合芯片分析結(jié)果和microRNA預(yù)測(cè)結(jié)果篩選,發(fā)現(xiàn)miR-155是唯一在HBx過表達(dá)細(xì)胞中升高2倍以上、并可通過種子序列結(jié)合于ZHX2 3'UTR的microRNA,提示HBx通過miR155抑制ZHX2表達(dá)。為驗(yàn)證上述假說,本研究開展一系列體外實(shí)驗(yàn)及動(dòng)物和臨床肝組織檢測(cè)。2.HBV尤其是HBx明顯促進(jìn)肝癌細(xì)胞miR-155表達(dá)為確定HBV對(duì)miR-155的調(diào)控作用,同上收集HBV感染3天和5天后的HepG2-NTCP細(xì)胞,qRT-PCR檢測(cè)miR-155表達(dá)。結(jié)果顯示,與HBV未感染細(xì)胞對(duì)比,HBV感染明顯促進(jìn)肝癌細(xì)胞系miR-155表達(dá)(P0.05)。進(jìn)一步在HepG2、SMMC7721、QSG-7701肝癌細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染HBx質(zhì)粒,qRT-PCR結(jié)果表明,與陰性對(duì)照細(xì)胞相比,HBx過表達(dá)后細(xì)胞內(nèi)miR-155表達(dá)水平明顯上升,提示HBV,尤其是HBx促進(jìn)肝癌細(xì)胞中miR-155表達(dá)。為驗(yàn)證上述結(jié)果,在HepG2.2.15肝癌細(xì)胞系中脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染針對(duì)HBx的反義寡核苷酸,qRT-PCR結(jié)果顯不,與對(duì)照相比,干擾HBx表達(dá)后HepG2.2.15細(xì)胞內(nèi)miR-155水平明顯下降,反向證明了HBx對(duì)miR-155的促進(jìn)作用。3.HBV轉(zhuǎn)基因小鼠肝細(xì)胞miR-155水平顯著增高為了在體內(nèi)驗(yàn)證HBV對(duì)miR-155的調(diào)控作用,收集C57B/6野生型與HBV轉(zhuǎn)基因小鼠的肝組織,純化肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞,分別提取總RNA,qRT-PCR檢測(cè)miR-155表達(dá)。結(jié)果表明HBV轉(zhuǎn)基因小鼠肝組織和肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞內(nèi)miR-155表達(dá)水平均明顯高于野生型小鼠(P0.05,P0.01),再次證明HBV可以在體內(nèi)調(diào)節(jié)肝細(xì)胞內(nèi)miR-155 表達(dá)。4.miR-155促進(jìn)體外肝癌細(xì)胞增殖眾多文獻(xiàn)提示miR-155調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng),參與腫瘤發(fā)生。為探究miR-155對(duì)肝癌細(xì)胞惡性增殖能力的影響,首先在SMMC7721細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)miR-155或抑制其表達(dá),通過EdU染色檢測(cè)EdU陽性染色細(xì)胞比例。同樣在三種肝癌細(xì)胞系Huh7、HepG2、SMMC7721 過表達(dá)或抑制 miR-155,Western blot 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)PCNA表達(dá)。結(jié)果顯示,過表達(dá)miR-155的細(xì)胞中EdU陽性細(xì)胞比例明顯升高且細(xì)胞內(nèi)PCNA表達(dá)水平升高,而抑制miR-155表達(dá)的細(xì)胞中EdU陽性細(xì)胞比例顯著降低且PCNA表達(dá)下降,提示miR-155能夠促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖。5.HBV陽性肝癌組織中PCNA和miR-155表達(dá)顯著高于HBV陰性肝癌組織為進(jìn)一步在臨床標(biāo)本中驗(yàn)證HBV-miR155在肝癌惡性增殖中的作用,收集臨床肝癌組織標(biāo)本,qRT-PCR檢測(cè)PCNA及miR-155表達(dá),并比較HBV陽性及HBV陰性肝癌組織中的差異。結(jié)果顯示,與HBV陰性肝癌患者相比較,HBV陽性患者的肝癌組織中PCNA和miR-155高水平表達(dá)比例均明顯升高(10/17,59%vs.2/7,29%,χ2=18.26,df=1,P0.0001),提示HBV陽性肝癌組織中細(xì)胞增殖能力較強(qiáng),并且miR-155在其中高水平表達(dá)。五、miR-155通過與ZHX2的3'UTR結(jié)合抑制其蛋白表達(dá)生物信息學(xué)分析顯示,ZHX2 3'UTR存在miR-155的種子序列,提示ZHX2是miR-155的靶分子。本研究通過體外實(shí)驗(yàn)結(jié)合報(bào)告基因檢測(cè)及臨床相關(guān)性分析,以驗(yàn)證上述假說。1.miR-155顯著抑制肝癌細(xì)胞系ZHX2蛋白表達(dá)利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染在Huh7、HepG2、SMMC7721肝癌細(xì)胞內(nèi)高表達(dá)或干擾miR-155,48h后收集細(xì)胞,Westernblot檢測(cè)ZHX2表達(dá)水平。結(jié)果表明,在三種檢測(cè)肝癌細(xì)胞系中,miR-155均可顯著抑制ZHX2的蛋白表達(dá)。2.miR-155 與 ZHX2 3'UTR 位點(diǎn)結(jié)合大量研究證明,microRNA通過與靶基因mRNA 3'UTR種子序列結(jié)合促進(jìn)mRNA降解或者抑制蛋白質(zhì)翻譯從而調(diào)控基因的表達(dá)。為探究miR-155對(duì)ZHX2的調(diào)控機(jī)制,本研究擴(kuò)增包含miR-155種子序列、長(zhǎng)度為603bp的ZHX2 3'UTR片段,并克隆于載體pGL4-promoterXbaI位點(diǎn),構(gòu)建報(bào)告基因質(zhì)粒pGL4-promoter-ZHX2 3'UTR,同時(shí)構(gòu)建miR-155種子序列點(diǎn)突變和缺失突變的兩種質(zhì)粒 pGL4-promoter-ZHX2 3'UTR site mut 和 pGL4-promoter-ZHX2 3'UTR del mut。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù),在HeLa細(xì)胞內(nèi)分別共轉(zhuǎn)染ZHX2 3'UTR、兩種突變質(zhì)粒以及miR-155模擬物,48小時(shí)后收取細(xì)胞蛋白,雙熒光素酶體系檢測(cè)熒光活性。結(jié)果顯示,miR-155過表達(dá)顯著抑制ZHX2 3'UTR介導(dǎo)的熒光活性(P0.01),但對(duì)ZHX2 3'UTR點(diǎn)突變和缺失突變質(zhì)粒介導(dǎo)的熒光活性無顯著影響,提示miR-155能夠結(jié)合于ZHX2 3'UTR的種子序列。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,miR-155可以與ZHX2 3'UTR種子序列結(jié)合從而抑制其蛋白表達(dá)。3.ZHX2表達(dá)水平與miR-155表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系前述研究提示miR-155調(diào)控ZHX2表達(dá),為進(jìn)一步驗(yàn)證該結(jié)論,收集不同肝癌細(xì)胞系(HCCLM3、MHCC97H、BEL-7402、Huh7、SMMC7721、HepG2)及12例HBV陽性患者的癌旁組織,提取總RNA,通過qRT-PCR檢測(cè)miR-155和ZHX2 mRNA,結(jié)果表明不論是在肝癌細(xì)胞系還是肝組織中ZHX2表達(dá)均與miR-155表達(dá)水平負(fù)相關(guān)。六、HBx通過上調(diào)miR-155抑制ZHX2表達(dá)綜合以上結(jié)果表明,HBx可以促進(jìn)miR-155表達(dá)水平,同時(shí)miR-155能夠抑制ZHX2的表達(dá)。為了確定miR-155是HBx調(diào)控ZHX2的關(guān)鍵環(huán)節(jié),進(jìn)行如下拯救實(shí)驗(yàn):分別在肝癌細(xì)胞系HepG2、SMMC7721細(xì)胞中共同轉(zhuǎn)染pcDNA3+microRNA inhibitor control、pcDNA3-HBx+ microRNA inhibitor control、pcDNA3-HBx+miR-155 inhibitor,48h后收集細(xì)胞,qRT-PCR和Western blot檢測(cè)ZHX2表達(dá)情況。結(jié)果顯示,與陰性對(duì)照組相比,HBx能夠抑制ZHX2的表達(dá),miR-155抑制物則使得HBx對(duì)ZHX2的抑制作用消失,提示HBx通過上調(diào)miR-155從而抑制ZHX2的表達(dá)。結(jié)論及意義:綜上所述,本研究首次證明HBV尤其是HBx通過原癌microRNA miR-155抑制抑癌基因ZHX2的表達(dá),從而促進(jìn)肝細(xì)胞肝癌發(fā)展。本研究發(fā)現(xiàn)miR-155被HBx激活高表達(dá),并促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖的作用,并證實(shí)ZHX2是miR-155的新的靶基因。本研究提示miR-155水平升高和ZHX2表達(dá)降低可能是HBV相關(guān)肝細(xì)胞肝癌進(jìn)展的重要因素,為探尋相關(guān)治療方法提供了新的理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.7
【圖文】：
的感染促使ＺＨＸ２表達(dá)水平降低。ＨＢＶ陽性組織標(biāo)本的結(jié)果顯示，腫瘤組織內(nèi)高逡逑水平表達(dá)ＺＨＸ２的比例明顯低于癌旁組織（４／１６，邋２５％邋ｖｓ．邋９／１２，邋７５％，邋／邋２＝５０，邋ｄｆ＝１，逡逑Ｐ＜０．０００１）（圖１－１Ｂ），與ＺＨＸ２作為肝癌中的抑癌基因作用相一致。逡逑Ａ邐巳逡逑§■２００－，邋□邋ｌｏｗ邋ｌｅｖｅｌ邋ｏｆ邋ＺＨＸ２邐＾２００－．邋□邋ｌｏｗ邋ｌｅｖｅｌ邋ｏｆ邋ＺＨＸ２逡逑￡邐■邋ｈｉｇｈ邋ｌｅｖｅｌ邋ｏｆ邋ＺＨＸ２邐２邐Ｈｉ邋ｈｉｇｈ邋ｌｅｖｅｌ邋ｏｆ邋ＺＨＸ２逡逑0邋１５０－邐0邋１５０－逡逑ｓ邐ｓ逡逑１００－邋＿＿邋１００－邋＿＿逡逑５０－邐５０－逡逑ｓＳ邋0＇邋１邋Ｉ邋」邐邐．——Ｓ？邋ｏ－１—１邐１——１邐邐１邐＾逡逑ＨＢＶ（－）邐ＨＢＶ（＋）邐ｐａｒａｔｕｍｏｒ邐ｔｕｍｏｒ逡逑圖１－１．邋ＨＢＶ陽性肝癌組織內(nèi)ＺＨＸ２表達(dá)水平明顯降低。（Ａ）分別提取ＨＢＶ陰性和陽性逡逑肝癌組織的總ＲＮＡ，通過ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)ＺＨＸ２ｍＲＮＡ表達(dá)水平（１１／１７，邋６５％ｖｓ．邋１／７，邋１４％，逡逑／２＝５４．４２，邋ｄｆ＝１，邋Ｐ＜０．０００１），邋（Ｂ）并以相同方法檢測(cè)ＨＢＶ陽性肝癌組織與癌旁組織內(nèi)逡逑ＺＨＸ２邋ｍＲＮＡ邋表達(dá)（４／１６
的感染促使ＺＨＸ２表達(dá)水平降低。ＨＢＶ陽性組織標(biāo)本的結(jié)果顯示，腫瘤組織內(nèi)高逡逑水平表達(dá)ＺＨＸ２的比例明顯低于癌旁組織（４／１６，邋２５％邋ｖｓ．邋９／１２，邋７５％，邋／邋２＝５０，邋ｄｆ＝１，逡逑Ｐ＜０．０００１）（圖１－１Ｂ），與ＺＨＸ２作為肝癌中的抑癌基因作用相一致。逡逑Ａ邐巳逡逑§■２００－，邋□邋ｌｏｗ邋ｌｅｖｅｌ邋ｏｆ邋ＺＨＸ２邐＾２００－．邋□邋ｌｏｗ邋ｌｅｖｅｌ邋ｏｆ邋ＺＨＸ２逡逑￡邐■邋ｈｉｇｈ邋ｌｅｖｅｌ邋ｏｆ邋ＺＨＸ２邐２邐Ｈｉ邋ｈｉｇｈ邋ｌｅｖｅｌ邋ｏｆ邋ＺＨＸ２逡逑0邋１５０－邐0邋１５０－逡逑ｓ邐ｓ逡逑１００－邋＿＿邋１００－邋＿＿逡逑５０－邐５０－逡逑ｓＳ邋0＇邋１邋Ｉ邋」邐邐．——Ｓ？邋ｏ－１—１邐１——１邐邐１邐＾逡逑ＨＢＶ（－）邐ＨＢＶ（＋）邐ｐａｒａｔｕｍｏｒ邐ｔｕｍｏｒ逡逑圖１－１．邋ＨＢＶ陽性肝癌組織內(nèi)ＺＨＸ２表達(dá)水平明顯降低。（Ａ）分別提�。龋拢株幮院完栃藻义细伟┙M織的總ＲＮＡ，通過ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)ＺＨＸ２ｍＲＮＡ表達(dá)水平（１１／１７，邋６５％ｖｓ．邋１／７，邋１４％，逡逑／２＝５４．４２，邋ｄｆ＝１，邋Ｐ＜０．０００１），邋（Ｂ）并以相同方法檢測(cè)ＨＢＶ陽性肝癌組織與癌旁組織內(nèi)逡逑ＺＨＸ２邋ｍＲＮＡ邋表達(dá)（４／１６
逑胞和上清。ＥＬＩＳＡ結(jié)果顯示，ＨＢＶ感染后細(xì)胞上清中ＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）逡逑含量顯著升高（圖２－１Ａ），提示，ＨＢＶ感染模型成功，進(jìn)一步的ＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果驗(yàn)逡逑證了這一結(jié)論：ＨＢＶ感染后ＨｅｐＧ２－ＮＴＣＰ細(xì)胞顯著高表達(dá)ＨＢｘ及ｐｇＲＮＡ邋（圖逡逑２－１Ｂ）。比較ＨＢＶ感染前后ＨｅｐＧ２－ＮＴＣＰ細(xì)胞中ＺＨＸ２表達(dá)水平，ｑＲＴ－ＰＣＲ和逡逑Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ結(jié)果顯示，與未感染ＨＢＶ的細(xì)胞相比，感染３天和５天后的細(xì)胞內(nèi)逡逑ＺＨＸ２邋ｍＲＮＡ邋（圖２－１Ｃ）和蛋白（圖２－１Ｄ）表達(dá)水平均明顯下降（＊＊Ｐ＜０．０１，逡逑＊＊＊Ｐ＜０．００１邋）。逡逑Ａ邐口邋ＢＬＡＮＫ邐Ｂ逡逑４．0１邋■邋ＨＢＶ逡逑它邋３＿５＿邐｜邐＊＊邐｜邐｜邐｜邐ＢＬＡＮＫ邋ＨＢＶ邋ＢＬＡＮＫ邋ＨＢＶ逡逑0邐ｐｇＲＮＡ邋■逡逑１０．０１０＾邐■邐■邋ＨＢｘ邋ＵＳ逡逑＞邋０．００６－邐丁邐ｐ－ａｃｔｉｎ逡逑§邋０．００４－邐ｒ—ｉ逡逑0邋０．００２－邐■邐■邐Ｄａｙｓ邋Ｄａｙｓ逡逑０．０００－Ｊ邐邐—逡逑Ｄａｙ邋３邐Ｄａｙ邋５逡逑Ｃ邋ｉｓ－
【相似文獻(xiàn)】
相關(guān)期刊論文 前10條
1 ;編者按[J];肝癌電子雜志;2019年01期
2 李捷;朱玲燕;左大明;張麗蕓;盧曉;陳政良;周嘉;;肝細(xì)胞肝癌患者血漿中甘露聚糖結(jié)合凝集素和甘露聚糖結(jié)合凝集素相關(guān)絲氨酸蛋白酶-2的表達(dá)水平[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2017年12期
3 張玲;張?zhí)m鳳;周曉梅;;索拉非尼對(duì)中晚期肝細(xì)胞肝癌患者近期生活質(zhì)量影響[J];中西醫(yī)結(jié)合護(hù)理(中英文);2016年12期
4 魏濤;馬海慶;池永娥;;經(jīng)皮微波消融治療早期肝細(xì)胞肝癌患者38例的遠(yuǎn)期療效觀察[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2015年02期
5 陸美芹;蔡守平;沈茜;;索拉非尼治療肝細(xì)胞肝癌不良反應(yīng)的護(hù)理[J];實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志;2013年04期
6 陳孝平;張志偉;楊甲梅;沈鋒;;肝細(xì)胞肝癌外科治療方法的選擇[J];中華普通外科學(xué)文獻(xiàn)(電子版);2010年01期
7 常清;劉長(zhǎng)安;;肝細(xì)胞肝癌基因治療研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2010年13期
8 戴映;潘躍銀;陳振東;;中晚期肝細(xì)胞肝癌的靶向治療動(dòng)態(tài)[J];中華腫瘤防治雜志;2010年15期
9 趙占考;孫保存;孫濤;趙秀蘭;古強(qiáng);車娜;董學(xué)易;孫丹;;肝細(xì)胞肝癌中微血管密度及MMP-2和MMP-9的表達(dá)與術(shù)后轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系[J];中國腫瘤臨床;2010年07期
10 陳孝平;張志偉;楊甲梅;沈鋒;;肝細(xì)胞肝癌外科治療方法的選擇[J];中華普通外科學(xué)文獻(xiàn)(電子版);2009年02期
相關(guān)會(huì)議論文 前10條
1 吳健雄;;中央型肝細(xì)胞肝癌的新定義:一項(xiàng)單中心回顧對(duì)照研究[A];第十五屆全國肝癌學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2015年
2 曾昭沖;;肝細(xì)胞肝癌放射治療中山醫(yī)院10年總結(jié)、現(xiàn)狀與展望[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)放射腫瘤治療學(xué)分會(huì)六屆二次暨中國抗癌協(xié)會(huì)腫瘤放療專業(yè)委員會(huì)二屆二次學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年
3 曾昭沖;;肝細(xì)胞肝癌放射治療中山醫(yī)院10年總結(jié)、現(xiàn)狀與展望[A];第十二屆全國肝癌學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年
4 郭洪生;杜智;高英堂;薛春祥;張勤;朱爭(zhēng)艷;王偉麗;;磷脂酰肌醇蛋白聚糖3在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及意義[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第29屆學(xué)術(shù)年會(huì)暨首屆生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會(huì)論文集[C];2009年
5 肖光勤;嚴(yán)律南;李波;曾勇;文天夫;趙紀(jì)春;王文濤;徐明清;楊家印;陳哲宇;吳泓;魏永剛;;術(shù)前中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值對(duì)肝細(xì)胞肝癌活體肝移植術(shù)預(yù)后的影響——對(duì)66例乙肝病毒所致的肝細(xì)胞肝癌的回顧性研究[A];2012中國器官移植大會(huì)論文匯編[C];2012年
6 賀良;耿小平;趙紅川;趙義軍;張志功;劉付寶;王國斌;謝坤;;肝細(xì)胞肝癌中乙型肝炎病毒基因整合位點(diǎn)及臨床病理分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十六次全國病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年
7 丁明權(quán);;核苷(酸)類似物在乙肝相關(guān)肝細(xì)胞肝癌防治中的作用[A];第四屆全國病毒性肝炎慢性化、重癥化基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2014年
8 范上達(dá);;治療肝細(xì)胞肝癌的肝臟移植——香港經(jīng)驗(yàn)[A];第八屆全國肝癌學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年
9 康曉楠;劉銀坤;張予;陳軍;謝裕安;梁安民;;用表面增強(qiáng)激光輔助解吸附/離子化蛋白質(zhì)飛行質(zhì)譜儀初探肝細(xì)胞肝癌血清學(xué)診斷[A];中國蛋白質(zhì)組學(xué)第二屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要論文集[C];2004年
10 黃智銘;楊旭;吳金明;吳建波;陳向榮;吳建勝;韓清錫;陳民新;余正平;宋其同;徐正鏗;徐昌隆;;肝細(xì)胞肝癌的組織蛋白酶B及其基因表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系[A];2006華東地區(qū)消化病學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（浙江省分冊(cè)）[C];2006年
相關(guān)重要報(bào)紙文章 前3條
1 記者 張晶;中美科學(xué)家攜手發(fā)現(xiàn)肝癌抑癌基因[N];科技日?qǐng)?bào);2011年
2 管j;新技術(shù)：呼氣就能測(cè)肝功[N];健康報(bào);2006年
3 徐永茂;雙介入聯(lián)合CIK細(xì)胞治療肝癌[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年
相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條
1 郭猛;靶向GPC3的CAR-NK細(xì)胞在肝細(xì)胞肝癌免疫治療中的研究[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué);2019年
2 姚溯;Erbin在肝細(xì)胞肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年
3 劉永浩;IL-23在小鼠肝細(xì)胞肝癌發(fā)展中的作用及機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2018年
4 潘琦;基于高通量測(cè)序技術(shù)鑒定肝細(xì)胞肝癌的遺傳變異和功能基因[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年
5 劉峗;Shc3通過激活MEK/ERK影響肝細(xì)胞肝癌增殖和轉(zhuǎn)移的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2018年
6 林巍;干擾素誘導(dǎo)蛋白IFI16及其炎性復(fù)合體在肝細(xì)胞肝癌發(fā)病機(jī)制中的研究[D];山東大學(xué);2018年
7 宋曉佳;HBV通過miR-155調(diào)控ZHX2促進(jìn)肝細(xì)胞肝癌生長(zhǎng)的作用與機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2018年
8 陳衛(wèi)波;Prrxl在肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移進(jìn)程中的作用和機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2015年
9 胡海明;Clorf61基因在人肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)和功能研究[D];武漢大學(xué);2012年
10 蘇芳;三維適形放療在不同病期肝細(xì)胞肝癌中治療價(jià)值的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2017年
相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條
1 施豪波;體素內(nèi)不相干運(yùn)動(dòng)擴(kuò)散加權(quán)成像技術(shù)對(duì)肝細(xì)胞肝癌非手術(shù)治療后療效評(píng)價(jià)的臨床研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2019年
2 錢妍至;缺氧微環(huán)境中AQP9表達(dá)的變化對(duì)肝細(xì)胞肝癌的增殖的影響及機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年
3 龔成武;非染色體結(jié)構(gòu)維護(hù)凝縮蛋白I復(fù)合體G亞基通過PI3K/AKT/FOXO4信號(hào)軸促進(jìn)肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞的增殖能力[D];南昌大學(xué);2019年
4 梁運(yùn)田;長(zhǎng)鏈非編碼RNA LIMT在肝細(xì)胞肝癌TGF-β1信號(hào)通路及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用研究[D];鄭州大學(xué);2019年
5 薛晨;β-內(nèi)酰胺酶在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及臨床意義[D];鄭州大學(xué);2019年
6 陳思玉;長(zhǎng)鏈非編碼RNA HCG18促進(jìn)肝細(xì)胞肝癌發(fā)生發(fā)展[D];鄭州大學(xué);2019年
7 翟振勝;環(huán)狀RNA hsa-circ-0046600在肝細(xì)胞肝癌中的臨床意義及生物學(xué)機(jī)制[D];鄭州大學(xué);2019年
8 陸謙;PSMB4在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及其對(duì)肝癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響研究[D];南通大學(xué);2018年
9 郭素清;~(11)C-膽堿聯(lián)合~(18)F-FDG PET-CT診斷肝細(xì)胞肝癌的價(jià)值[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2019年
10 賈鵬沖;肝激酶B1與β連環(huán)蛋白在肝細(xì)胞肝癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[D];鄭州大學(xué);2019年
本文編號(hào)：
2791016
