【摘要】：背景:肝細(xì)胞癌(HCC)的發(fā)病率在全世界腫瘤中排名第五,死亡率位居世界第三。由于相當(dāng)數(shù)量的患者在診斷時(shí)已為晚期HCC或合并存在肝臟基礎(chǔ)疾病。這樣的患者已經(jīng)失去手術(shù)切除腫瘤的機(jī)會(huì)或進(jìn)行肝移植。在這種情況下,以索拉菲尼為主的分子靶向治療是一種重要的治療手段可有效延長(zhǎng)HCC患者的中位生存時(shí)間,但是耐藥性的產(chǎn)生成為其應(yīng)用的主要障礙。有相關(guān)研究表明,DNA甲基化可促進(jìn)腫瘤對(duì)化療藥物耐藥的發(fā)生。目的:在體外應(yīng)用索拉菲尼作用誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞系Hep3B和Huh7建立耐藥模型并檢測(cè)索拉菲尼耐藥細(xì)胞增殖特性;檢測(cè)索拉菲尼耐藥細(xì)胞系DNA甲基化水平包括DNMTs和總DNA甲基化水平。方法:本研究利用索拉菲尼間歇誘導(dǎo)方法,建立Hep3B和Huh7索拉菲尼耐藥細(xì)胞系。通過(guò)Western Blot,Dot Blot,CCK8和損傷愈合等實(shí)驗(yàn)及數(shù)據(jù)分析檢測(cè)和評(píng)估肝癌索拉菲尼親代細(xì)胞和耐藥細(xì)胞增殖和DNA甲基化方面的差異。使用Graph Pad Prism5軟件進(jìn)行差異性分析,兩組間比較應(yīng)用t/t’檢驗(yàn)方法(P0.05),明確肝癌索拉菲尼親代細(xì)胞及耐藥細(xì)胞數(shù)據(jù)差異及統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)在體外成功建立Hep3B和Huh7肝癌索拉菲尼耐藥模型,CCK-8實(shí)驗(yàn)及數(shù)據(jù)分析顯示:與索拉菲尼耐藥細(xì)胞,親代細(xì)胞增殖性可被索拉菲尼顯著抑制,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。腫瘤成球?qū)嶒?yàn)顯示,耐藥細(xì)胞的腫瘤成球能力更強(qiáng),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;劃痕-愈合實(shí)驗(yàn)表明,耐藥細(xì)胞表現(xiàn)出更強(qiáng)的遷移能力,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;蛋白印記實(shí)驗(yàn)表明耐藥細(xì)胞DNMTs表達(dá)上調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;斑點(diǎn)雜交實(shí)驗(yàn)顯示耐藥細(xì)胞總DNA 5mc水平更高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:建立肝癌索拉菲尼耐藥模型,耐藥細(xì)胞具有更高的增殖潛能;與親代細(xì)胞相比,耐藥細(xì)胞的DNA甲基化水平改變包括DNMTs上調(diào)、總DNA 5mc水平增強(qiáng)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.7
【圖文】：

圖 4.1 CCK8 法檢測(cè)索拉菲尼對(duì) Huh7 親代細(xì)胞以及耐藥細(xì)胞增殖特點(diǎn)4.3 索拉菲尼誘導(dǎo)的肝癌耐藥細(xì)胞的腫瘤成球能力更強(qiáng)如圖 4.2 所示，腫瘤細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)檢測(cè)親代細(xì)胞和耐藥細(xì)胞的自我更新能力，結(jié)果顯示，耐藥細(xì)胞成球顯著多于親代細(xì)胞，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＜ 0. 05) 。

4.1 CCK8 法檢測(cè)索拉菲尼對(duì) Huh7 親代細(xì)胞以及耐藥細(xì)胞增拉菲尼誘導(dǎo)的肝癌耐藥細(xì)胞的腫瘤成球能力更強(qiáng) 4.2 所示，腫瘤細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)檢測(cè)親代細(xì)胞和耐藥細(xì)胞的自我，耐藥細(xì)胞成球顯著多于親代細(xì)胞，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P

圖 4.3 劃痕-愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)親代細(xì)胞和耐藥細(xì)胞的遷移能力4.5 索拉菲尼誘導(dǎo)的肝癌耐藥細(xì)胞 DNMTs 上調(diào)蛋白印記實(shí)驗(yàn)顯示，索拉菲尼耐藥細(xì)胞系中 DNMTs 表達(dá)上調(diào)（圖 4.4），兩組比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異明顯。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Stefano Colagrande;Francesco Regini;Gian Giacomo Taliani;Cosimo Nardi;Andrea Lorenzo Inghilesi;;Advanced hepatocellular carcinoma and sorafenib: Diagnosis, indications, clinical and radiological follow-up[J];World Journal of Hepatology;2015年08期

本文編號(hào)：2787605