【摘要】：目的:白血病干細(xì)胞被認(rèn)為是臨床白血病反復(fù)耐藥、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的根源所在,只有靶向白血病干細(xì)胞的治療才能達(dá)到真正治愈白血病的目的。本研究通過磁珠分選出了白血病干細(xì)胞并進(jìn)行相關(guān)耐藥機(jī)制方面的研究,從轉(zhuǎn)錄水平深入探討了轉(zhuǎn)錄因子Sp1和c-Myc以及micro RNA對(duì)于白血病干細(xì)胞的調(diào)控作用。方法:①采用磁珠分選的方法從KG-1a和MOLM13細(xì)胞系中分離得到白血病干細(xì)胞并進(jìn)行無血清培養(yǎng)等一系列體內(nèi)外鑒定;②通過抗凋亡蛋白芯片的方式分析在白血病干細(xì)胞中特異性表達(dá)的蛋白Survivin,并通過細(xì)胞系和臨床標(biāo)本進(jìn)行驗(yàn)證;③雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)、突變載體、染色質(zhì)免疫共沉淀、熒光定量PCR及Western blotting實(shí)驗(yàn)分析轉(zhuǎn)錄調(diào)控方面的機(jī)制;④雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)、點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)檢測(cè)micro RNA對(duì)于白血病干細(xì)胞耐藥性及自我更新方面的調(diào)控作用。結(jié)果:①在細(xì)胞系水平和臨床標(biāo)本中都證實(shí)了Survivin在白血病干細(xì)胞中特異性地高表達(dá);②抑制Survivin可以明顯降低白血病干細(xì)胞的耐藥性并誘導(dǎo)凋亡發(fā)生;③轉(zhuǎn)錄因子Sp1和c-Myc負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄激活Survivin的表達(dá),并且c-Myc需要Sp1的功能完整性才能發(fā)揮其轉(zhuǎn)錄激活的作用;④ERK/MSK/Sp1信號(hào)軸調(diào)控Survivin的表達(dá);⑤mi R-203靶向Survivin和Bmi-1的3’-UTR區(qū)域調(diào)控白血病干細(xì)胞的耐藥性和自我更新的能力。結(jié)論:ERK/MSK/Sp1信號(hào)軸是調(diào)控Survivin表達(dá)的關(guān)鍵信號(hào)通路,這也為今后的靶向治療提供了新的靶點(diǎn)和選擇。此外,mi R-203在調(diào)控白血病干細(xì)胞方面也發(fā)揮著重要的作用,提示我們細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和傳遞是多因素、多方位的復(fù)雜過程。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.7
【圖文】：

HSC）的部分免疫標(biāo)志和特性，具有較強(qiáng)的自我更新、無限增殖和多向分化的潛能，是腫瘤負(fù)荷形成的基礎(chǔ)（圖2）[40-43]。與此同時(shí)，LSC高表達(dá)與多藥耐藥有關(guān)的蛋白，具有異常強(qiáng)大的抗凋亡能力，并且其主要處于細(xì)胞靜止期（G0期），對(duì)普通化療藥物針對(duì)細(xì)胞周期活躍期的機(jī)制不敏感，能逃逸化療和放療，一旦進(jìn)入細(xì)胞周期，就會(huì)大量增殖，成為白血病復(fù)發(fā)的根源，這也是維持白血病病理狀態(tài)的首要和必要條件[44-52]。因此，白血病干細(xì)胞的耐藥性是白血病治療抗性的關(guān)鍵[53-56]。圖2白血病干細(xì)胞是白血病耐藥的主要原因[40-42]3. Sp1和c-Myc的生物學(xué)特性腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素、多階段、多層次的復(fù)雜過程。而轉(zhuǎn)錄因子在腫瘤的進(jìn)展過程中扮演中至關(guān)重要的作用，其不僅可以在細(xì)胞核內(nèi)調(diào)控各種原癌基因、抑癌基因和細(xì)胞周期相關(guān)的因子，發(fā)揮轉(zhuǎn)錄激活或抑制的作用，還可以直接或間接調(diào)控腫瘤的血管新生、細(xì)胞凋亡、應(yīng)激反應(yīng)、侵襲轉(zhuǎn)移等過程

轉(zhuǎn)錄因子Sp1（Special protein 1）屬于SP/KLF家族，是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)并克隆出來的轉(zhuǎn)錄因子，可以特異性地結(jié)合到富含GC/CT序列的基因啟動(dòng)子區(qū)域進(jìn)而發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控的作用，其廣泛存在于絕大部分組織的細(xì)胞核中，參與眾多生理和病理的調(diào)控過程[63-65]。Sp1蛋白根據(jù)功能的不同可以分為3個(gè)結(jié)構(gòu)域：DNA結(jié)合區(qū)域、轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域、核定位信號(hào)區(qū)域（圖3）[66]。DNA結(jié)合區(qū)域位于羧基（C基）末端，含有3個(gè)Cys2His2 的鋅指結(jié)構(gòu)，這種特殊的鋅指結(jié)構(gòu)使得Sp1可以有效的結(jié)合到染色體特定序列的GC盒位點(diǎn)，進(jìn)而調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄過程。轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域位于氨基（N基）末端，主要通過和其他輔助因子（或轉(zhuǎn)錄復(fù)合物）共同調(diào)控轉(zhuǎn)錄的起始。由于Sp家族中各個(gè)蛋白的氨基端差別較大，從而導(dǎo)致不同的轉(zhuǎn)錄功能和作用。例如Sp1是較強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄激活因子，而Sp3則同時(shí)扮演著轉(zhuǎn)錄激活和轉(zhuǎn)錄抑制的角色。核定位信號(hào)則主要位于鋅指結(jié)構(gòu)區(qū)域內(nèi)，通過主動(dòng)運(yùn)輸?shù)姆绞綄p1蛋白運(yùn)輸?shù)胶藘?nèi)發(fā)揮作用[67-72]。

暨南大學(xué)博士學(xué)位論文3.2 Myc的生物學(xué)特性Myc癌基因首先是從禽類髓細(xì)胞病毒(AMN-MC29)中鑒定和克隆出來的，其主要成員有cell-Myc(c-Myc)、human-Myc(N-Myc)、myc-related-gene(L-Myc)等，在細(xì)胞核內(nèi)作為轉(zhuǎn)錄因子可與Max、Mxd或Mnt等組成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，調(diào)控眾多基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)[84-86]。與此同時(shí)，Myc還可以調(diào)控核酶、蛋白質(zhì)、線粒體的合成，激活細(xì)胞內(nèi)各種通道的代謝網(wǎng)絡(luò)與應(yīng)激過程，參與DNA的復(fù)制并維持基因組的穩(wěn)定性，并且在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中也扮演著至關(guān)重要的作用[87-88]。最近，研究發(fā)現(xiàn)Myc基因還可以調(diào)節(jié)干細(xì)胞的干性，抑制干細(xì)胞分化，并維持干細(xì)胞的自我更新能力和多向分化的潛能[89-92]。由此可見，Myc在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮著各種各樣的作用和角色，可以預(yù)見到的是，Myc在細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)維持和整個(gè)細(xì)胞組織的微環(huán)境方面也必將發(fā)揮著重要作用（圖5）[93]。

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 嚴(yán)威;吳國洋;;肝癌干細(xì)胞分離鑒定研究進(jìn)展[J];肝膽外科雜志;2010年03期

2 岳r

本文編號(hào)：2785646