發(fā)布時間：2020-07-31 20:13

【摘要】：目的:異亮氨酰-tRNA合成酶2(isoleucyl-tRNA synthetase 2,IARS2)是1類氨�；�-tRNA合成酶,研究表明在白內(nèi)障、部分感音神經(jīng)性耳聾、生長激素缺乏的矮小癥、周圍神經(jīng)病變和Leigh綜合征患者中均有發(fā)現(xiàn)IARS2突變。近期研究表明,IARS2在包括非小細胞肺癌和結腸癌在內(nèi)的惡性腫瘤中扮演著原癌基因的作用,但其在胃癌組織中的表達及其表達與胃癌患者的臨床病理特征及預后關系尚不清楚。研究報道肌球蛋白VB(myosin VB,MYO5B)在胃癌中低表達,且分析數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)MYO5B可能是IARS2的下游作用蛋白,但兩者的關系尚無文獻報道。本研究通過檢測人胃癌組織及對應癌旁組織中IARS2及MYO5B的表達水平,明確IARS2及MYO5B在胃癌中的表達情況,探討IARS2與胃癌臨床特征的相關性及IARS2在胃癌中發(fā)揮作用的可能機制,為研究IARS2與胃癌的生長和轉(zhuǎn)移的研究提供理論基礎。方法:收集30對新鮮人胃癌組織及對應的癌旁組織,采用實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(real-time quantitative assay,qRT-PCR)及western blot技術檢測組織中IARS2及MYO5B的表達情況,進一步使用線性回歸模型(linear regression model)分析兩者mRNA表達的相關性。同時使用免疫組化方法檢測86對胃癌組織及癌旁組織中IARS2蛋白的表達情況,根據(jù)免疫組化IARS2表達情況將胃癌患者分為IARS2陽性組和陰性組,比較兩組患者臨床病理特征及預后情況。使用SPSS 17.0和GraphPad Prism 5處理數(shù)據(jù),采用χ~2檢驗分析組間數(shù)據(jù);Kaplan-Meier繪制生存曲線,Log-Rank檢驗進行生存分析。p0.05為有統(tǒng)計學意義。結果:胃癌組織及癌旁組織中IARS2及MYO5B均有表達。qRT-PCR的結果提示IARS2 mRNA在胃癌組織中的表達顯著高于其在癌旁組織的表達(P0.05),而MYO5B mRNA在胃癌組織中的表達顯著低于其在癌旁組織的表達(P0.05),進一步使用線性回歸模型分析發(fā)現(xiàn)兩者mRNA表達呈顯著負相關(r=0.5768,P=0.0008)。western blot的結果提示IARS2蛋白在胃癌組織中的表達顯著高于其在癌旁組織的表達(P0.05),MYO5B蛋白在胃癌組織中的表達顯著低于其在癌旁組織的表達(P0.05)。免疫組化結果提示IARS2蛋白在胃癌中表達顯著高于其在癌旁組織中的表達,且IARS2的表達水平與胃癌淋巴結轉(zhuǎn)移(P=0.041)、TNM分期(P=0.005)及患者術后5年總生存率(P=0.0006)顯著相關,與患者的年齡(P=0.330)、性別(P=0.265)、腫瘤大小(P=0.288)、浸潤深度(P=0.064)及遠處轉(zhuǎn)移(P=0.534)無顯著相關性。結論:1、IARS2及MYO5B在胃癌組織及癌旁組織中差異表達。2、IARS2可能通過靶向作用于MYO5B而發(fā)揮原癌基因的作用。3、IARS2陽性表達的胃癌患者腫瘤惡性程度高。4、IARS2陽性表達的胃癌患者預后差。5、IARS2可成為胃癌患者的預后指標。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R735.2
【圖文】：

2 結果2.1 IARS2 在胃癌組織中高表達使用 qRT-PCR 技術，使用 GAPDH 做內(nèi)參，檢測 30 例胃癌組織和中 IASR2 mRNA 的表達水平，發(fā)現(xiàn)較之癌旁組織，胃癌組織中 IASR表達（P＜0.05）（圖 1A）。使用 western-blot 技術，使用 β-actin 做內(nèi)30 例胃癌組織和癌旁組織中 IASR2 蛋白的表達水平，發(fā)現(xiàn)較之癌旁組組織中 IASR2 蛋白高表達（P＜0.05）（圖 1B）。同時，通過免疫組測 86 對胃癌組織和癌旁組織中 IARS2 蛋白表達情況，發(fā)現(xiàn) IARS2 陽性癌組織中的陽性例數(shù)為 61 例，陽性率為 70.9%，在癌旁組織的陽性例數(shù)陽性率為 29.1%；較之癌旁組織，胃癌組織中 IARS2 表達陽性率顯著1C）。以上結果提示，IARS2 在胃癌中高表達。

Figure 1 IARS2 is high expressed in gastric cancerNotes: A: The expression level of IARS2 mRNA in gastric and paracancer tissues were detectedby qRT-PCR （n=30); B: The expression level of IARS2 protein in gastric and paracancer tissueswere detected by western blot （n=30); C: The expression level of IARS2 protein in gastric andparacancer tissues were detected by immunohistochemical staining SP method （n=86); Results ofqRT-PCR is shown as the mean±SD; *** means P<0.0012.2 MYO5B 在胃癌組織中低表達使用 qRT-PCR 技術，使用 GAPDH 做內(nèi)參，檢測 30 對胃癌組織和癌旁組織中 MYO5B mRNA 的表達水平，發(fā)現(xiàn)較之癌旁組織，胃癌組織中 MYO5B mRNA低表達（P＜0.05）（圖 2A）。使用 western-blot 技術，使用 β-actin 做內(nèi)參，檢測 30 例胃癌組織和癌旁組織中 MYO5B 蛋白的表達水平，發(fā)現(xiàn)較之癌旁組織，胃癌組織中 MYO5B 蛋白低表達（P＜0.05）（圖 2B）。

學差異表示為**P<0.015B is low expressed in gastric cancerpression level of MYO5B mRNA and protein in gastric and paracanT-PCR （n=30); Results of qRT-PCR is shown as the mean±SD; **織中 IARS2 與 MYO5B 表達負相關光定量 RT-PCR 技術，檢測胃癌組織中 IARS2 與 MYO使用線性回歸模型分析 IARS2 和 MYO5B 間的關系。結 IARS2 與 MYO5B mRNA 的表達水平負相關（r=-0.576

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