【摘要】：研究背景胃癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,因腫瘤導(dǎo)致的死亡率長期居高不下,位列人類惡性腫瘤致死率第二位。由于進展期胃癌患者死亡率較高,預(yù)后較差,我們需要進一步研究胃癌的發(fā)生發(fā)展機制,并從胃癌組織和細胞中找尋新的診斷和治療靶點,進一步闡述胃癌的發(fā)病機制,并通過對相關(guān)靶點的進一步分析研究,來指導(dǎo)胃癌的臨床診斷和治療。惡性腫瘤能量代謝異常也被認為惡性腫瘤十大特征之一。新的觀點認為惡性腫瘤是一種代謝性疾病。旺盛的谷氨酰胺代謝是惡性腫瘤的重要特征。腫瘤由于其快速增殖,需要攝取更多的谷氨酰胺,而細胞外的谷氨酰胺必須借助于細胞膜上的一系列氨基酸轉(zhuǎn)運載體才能進入細胞內(nèi),因此,腫瘤組織可能通過高表達相關(guān)氨基酸轉(zhuǎn)運載體促進谷氨酰胺轉(zhuǎn)運。溶質(zhì)載體家族1成員5(Solute Carrier Family 1 Member SLC1A5),是氨基酸轉(zhuǎn)運載體家族中的重要一員。主要轉(zhuǎn)運包括谷氨酰胺在內(nèi)的多種小分子中性氨基酸。不少研究表明SLC1A5在多種惡性腫瘤組織和細胞中高表達,并且與腫瘤增殖、侵襲及預(yù)后不良有關(guān),體內(nèi)外研究表明抑制SLC1A5可抑制腫瘤細胞生長。目前尚無關(guān)于SLC1A5和胃癌的相關(guān)研究。本實驗分三個部分:第一部分研究SLC1A5蛋白表達與胃癌臨床病理特征的相關(guān)性;第二部分研究體外實驗中SLC1A5對胃癌細胞惡性生物學(xué)行為的影響及其分子機制;第三部分研究體內(nèi)實驗中SLC1A5對腫瘤生長的影響。第一部分SLC1A5蛋白表達與胃癌臨床病理特征的相關(guān)性分析目的:觀察SLC1A5蛋白在胃癌組織表達及其與胃癌臨床病理特征的相關(guān)性分析。方法:采集進展期胃癌病理組織及對應(yīng)癌旁組織70例,應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測SLC1A5在上述組織中的表達情況,并統(tǒng)計分析其表達強度與胃癌臨床病理特征的關(guān)系。并通過基因數(shù)據(jù)庫分析SLC1A5在胃癌組織和癌旁組織中表達情況及其對胃癌患者生存期的影響結(jié)果:與癌旁組織相比,胃癌組織中SLC1A5表達顯著增高(P0.0001)。GSE數(shù)據(jù)庫研究證實SLC1A5在胃癌組織中表達明顯升高(GSE 65801,P=0.0046;GSE63809,P0.0001;GSE 27342,P=0.0147)。胃癌組織中SLC1A5高表達與腫瘤大小(P0.05)、腫瘤浸潤深度(P0.001)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P0.05)、TNM分期(P0.05)和Ki-67(P0.01)相關(guān),而與年齡、性別、腫瘤位置及分化程度無關(guān)。SLC1A5表達強度與預(yù)后相關(guān),可明顯縮短患者的總體生存期(GSE 14210,P=0.0.011;GSE 22377,P=0.0.0015),同時縮短患者的無進展生存期(GSE 14210,P=0.0.0095;GSE 22377,P=0.0.0012)結(jié)論:SLC1A5蛋白在胃癌組織中表達升高,SLC1A5表達與腫瘤大小、腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期相關(guān)。SLC1A5可作為胃癌診斷和判斷預(yù)后的新靶點。第二部分SLC1A5對胃癌細胞惡性生物學(xué)行為的影響及其分子機制目的:研究SLC1A5對胃癌細胞增殖能力、細胞周期、細胞侵襲和遷移的影響,并探討SLC1A5與m TOR/p70S6K信號通路的關(guān)系。方法:通過免疫印跡法檢測五種不同胃癌細胞株中SLC1A5的蛋白表達水平差異。通過慢病毒載體感染胃癌細胞敲低SLC1A5基因后,用CCK-8法檢測SLC1A5對胃癌細胞增殖能力的影響,流式細胞術(shù)檢測SLC1A5對胃癌細胞周期的影響,Transwell小室實驗檢測SLC1A5對細胞侵襲和遷移的影響,免疫印跡法檢測SLC1A5對m TOR、p-m TOR、p70S6K、p-p70S6K、Cyclin D1蛋白表達的影響。結(jié)果:SLC1A5在胃癌細胞株HGC-27和MGC-803中表達較高。用慢病毒載體感染胃癌細胞敲低SLC1A5后可明顯降低胃癌細胞增殖能力,導(dǎo)致細胞G0/G1期阻滯,抑制細胞侵襲和遷移,抑制m TOR/p70S6K信號通路,并下調(diào)Cyclin D1蛋白表達。結(jié)論:SLC1A5可促進胃癌細胞生長和侵襲。其機制與促進m TOR/p70S6K信號通路有關(guān)。SLC1A5有望成為未來胃癌治療的新靶點。第三部分SLC1A5對小鼠體內(nèi)胃癌細胞生長的影響目的:研究SLC1A5對小鼠皮下胃癌細胞生長的影響。方法:選取4-6周齡雄性BALB/c裸小鼠,隨機分為兩組,分別在其背側(cè)肩胛下緣注射合成的陰性對照慢病毒轉(zhuǎn)染胃癌細胞株HGC-27懸液(對照組)和慢病毒轉(zhuǎn)染敲低SLC1A5后獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)的人胃腺癌細胞株HGC-27懸液(實驗組)。定期測量裸鼠腫瘤長徑和短徑,計算腫瘤體積;20天后處死裸鼠,分離腫瘤組織,用免疫印跡法檢測瘤體組織內(nèi)SLC1A5的蛋白表達情況。結(jié)果:SLC1A5可明顯促進胃癌細胞在小鼠體內(nèi)的生長(P0.0001),在荷瘤成功后第10天即有明顯差異(P0.0001)。免疫印跡法表明實驗組瘤體組織中的SLC1A5表達較對照組明顯下調(diào)。結(jié)論:SLC1A5可促進胃癌細胞在小鼠體內(nèi)的生長。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.2
【圖文】：

南京醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文結(jié) 果1．SLC1A5 在進展期胃癌組織和癌旁組織中的表達情況觀察 SLC1A5 在進展期胃癌組織中的表達情況，癌旁組織作為對照組。與癌旁組織相比，胃癌組織中 SLC1A5 表達顯著增高（P<0.001）（圖 2A,2C,2D），SLC1A5 在組織中表達強度判定標準見圖 2B。GSE 數(shù)據(jù)庫（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/）數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析證實 SLC1A5 在胃癌組織中表達明顯升高（GSE 65801, P =0.0046；GSE63809，P<0.0001；GSE 27342，P=0.0147）（圖 2E,2F,2G）。

圖 3 胃癌中 SLC1A5 表達強度與患者預(yù)后的關(guān)系。胃癌 SLC1A5 表達強度越高，預(yù)越差�？傮w生存期（GSE 14210，P=0.0.011；GSE 22377，P=0.0.0015），無進展存期（GSE 14210，P=0.0.0095；GSE 22377，P=0.0.0012）討 論在我國，胃癌的發(fā)病率常年居高不下，發(fā)病率處于所有惡性腫瘤的第二位，

圖 1 SLC1A5 在不同胃癌細胞株中的表達情況慢病毒質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染SLC1A5表達較高的兩種細胞細胞株（HGC03）用慢病毒質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染兩種胃癌細胞株，轉(zhuǎn)染后觀察細胞熒光表達效率。（圖 2）

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 胡祥;;胃癌的臨床分期及其重要意義[J];中國實用外科雜志;2011年08期

本文編號：2758597