【摘要】：雖然近幾年結(jié)腸癌的發(fā)病率和死亡率有所降低,但在全世界范圍內(nèi),結(jié)腸癌仍是最為嚴(yán)重的惡性腫瘤之一。目前在臨床上治療結(jié)腸癌最有效的方法是化療,但化療后的遠(yuǎn)期生存仍不理想,很大程度上與腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān)。有研究表明,在腫瘤轉(zhuǎn)移與EMT過程中均發(fā)現(xiàn)了鈣信號的改變。因此我們從對鈣離子通透的瞬時感受器電位通道亞型C5(TrpC5)入手,探討TrpC5在結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移中的作用及調(diào)控機(jī)制,為臨床治療結(jié)腸癌提供一個新的靶點。本文首先探究了TrpC5與結(jié)腸癌的相關(guān)性,通過收集臨床結(jié)腸癌組織標(biāo)本,免疫組化和Western Blot實驗發(fā)現(xiàn)TrpC5在結(jié)腸癌組織中表達(dá)高于鄰近正常組織,且在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中表達(dá)更高,提示TrpC5的表達(dá)與結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移有關(guān)。通過臨床資料和免疫組化結(jié)果分析可知,TrpC5高表達(dá)患者的總生存率和無轉(zhuǎn)移生存率均較低。這些結(jié)果提示TrpC5在結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移中起著重要作用,并與不良的臨床預(yù)后相關(guān)。隨后我們研究了TrpC5對結(jié)腸癌細(xì)胞株轉(zhuǎn)移能力的影響,qRT-PCR及Western Blot發(fā)現(xiàn)在遷移和侵襲能力高的結(jié)腸癌細(xì)胞SW620(及RKO、SW1116)中TrpC5顯示高表達(dá),在遷移和侵襲能力低的結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116(及HT29)中TrpC5顯示低表達(dá);通過轉(zhuǎn)染病毒包被的特異性TrpC5 shRNA沉默SW620細(xì)胞中的TrpC5,免疫熒光、胞內(nèi)鈣離子濃度檢測、Transwell及劃痕實驗發(fā)現(xiàn),細(xì)胞中TrpC5蛋白和功能水平均降低,且細(xì)胞遷移和侵襲能力減弱;而在HCT116細(xì)胞中轉(zhuǎn)染TrpC5質(zhì)粒過表達(dá)TrpC5時,則出現(xiàn)了相反結(jié)果。以上結(jié)果說明TrpC5促進(jìn)了結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移和侵襲。接下來我們研究了TrpC5對細(xì)胞增殖能力的影響,在SW620細(xì)胞中抑制TrpC5表達(dá)后,MTT、體外平板成克隆實驗和體內(nèi)成瘤實驗均發(fā)現(xiàn)細(xì)胞增殖能力減弱,而HCT116中提高TrpC5表達(dá)后,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的增殖能力提高。這些結(jié)果揭示TrpC5在結(jié)腸癌細(xì)胞增殖過程中起著重要作用。進(jìn)一步,我們探究了細(xì)胞TrpC5表達(dá)水平與EMT的相關(guān)性。細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),SW620細(xì)胞中抑制TrpC5表達(dá)后,細(xì)胞形態(tài)呈上皮細(xì)胞表型,免疫熒光和Western Blot發(fā)現(xiàn)上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)升高,間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物N-cadherin和Vimentin表達(dá)降低;而HCT116細(xì)胞中過表達(dá)TrpC5后,細(xì)胞則呈現(xiàn)出紡錘狀樣的間充質(zhì)細(xì)胞形態(tài),E-cadherin表達(dá)降低,N-cadherin和Vimentin表達(dá)升高。以上結(jié)果說明TrpC5通過促進(jìn)EMT導(dǎo)致了結(jié)腸癌細(xì)胞株的遷移。最后,我們探討了TrpC5通過何種通路調(diào)節(jié)了EMT。Western Blot發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子Twist表達(dá)水平與TrpC5有關(guān),在分別沉默TrpC5、HIF-1α和Twist后,Western Blot、Transwell及劃痕實驗發(fā)現(xiàn),TrpC5通過HIF-1α-Twist信號途徑誘導(dǎo)了EMT,促進(jìn)了結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移和增殖。本文證明了TrpC5的表達(dá)水平與腫瘤的轉(zhuǎn)移相關(guān),并且可作為結(jié)腸癌患者生存的獨立預(yù)后因素。通過激活HIF-1α-Twist信號通路,TrpC5誘導(dǎo)EMT并促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移、侵襲和增殖。然而,TrpC5在結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移中的作用尚未完全了解,本文的發(fā)現(xiàn)僅部分揭示了TrpC5在EMT中的分子機(jī)制,因此需要進(jìn)一步的研究闡明TrpC5在結(jié)腸癌中的功能。本研究發(fā)現(xiàn)的TrpC5-HIF-1α-Twist信號通路,為治療結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移提供了新的分子機(jī)制,并提示Trp C5可能有希望成為結(jié)腸癌治療的新靶點。
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.35
【圖文】：

究背景腸癌流行病學(xué)癥是全球主要的公共衛(wèi)生問題，也是美國第二大死亡原因[1]。在上世紀(jì) 4初，結(jié)腸癌是最常見的癌癥死亡原因，但由于患病風(fēng)險因素的歷史性變少、紅肉消費的下降、阿司匹林使用的增加），以及早期篩查和早期診、治療手段的改善，都降低了結(jié)腸癌的發(fā)病率和死亡率[2, 3]。但 CA CA 2017 年公布的最新數(shù)據(jù)表明（圖 1-1），目前美國的癌癥患者中，結(jié)發(fā)病率排第三位（前列腺癌第一位，肺癌第二位），但死亡率卻升至第癌；在女性中的發(fā)病率和死亡率均排第三位（前兩位是乳腺癌和肺癌）手段降低了其發(fā)病率和死亡率，但結(jié)腸癌仍是目前最為嚴(yán)重的惡性腫瘤臨床上治療結(jié)腸癌最有效的手段是化療，但患者化療后的遠(yuǎn)期生存率仍率很大程度上與腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān)[5]。雖然對結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移的研究已進(jìn)行了很雜機(jī)制尚未完全明晰。

第一章 緒論t 是一種基本的螺旋-環(huán)-螺旋（bHLH）轉(zhuǎn)錄因子，是 EMT 過程中主要監(jiān)種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑（如 AKT、STAT3、Ras 和 Wnt 信號）可以激活 Twist基因（TWIST1）位于染色體 7p21 上，含有 2 個外顯子和 1 個內(nèi)含子[26]色體顯性遺傳性疾病 Saethre-Chotzen 綜合癥有關(guān)[27]。t 最初被發(fā)現(xiàn)可以抑制細(xì)胞粘附與腫瘤抑制因子 E-cadherin 的表達(dá)，后種信號途徑參與了腫瘤的轉(zhuǎn)移[28]。Twist 在腫瘤中的作用機(jī)制大概可以分活化的 Twist 信號通過下游途徑誘導(dǎo) EMT，從而誘發(fā)癌癥的轉(zhuǎn)移，②T成、外滲、血管生成擬態(tài)等一些在轉(zhuǎn)移過程中起關(guān)鍵作用的生理過程，腫瘤細(xì)胞的干性和耐藥性，及抑制癌細(xì)胞的凋亡，④除 Twist 的過表達(dá)高甲基化也有助于轉(zhuǎn)移的形成。

江南大學(xué)碩士學(xué)位論文第三章 實驗結(jié)果與討論3.1 TrpC5 與結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移及臨床預(yù)后的相關(guān)性研究3.1.1 免疫組化分析臨床結(jié)腸癌組織中 TrpC5 蛋白表達(dá)水平腫瘤轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致化療失敗的主要原因，課題組前期研究發(fā)現(xiàn) TrpC5 通過 Ca2+/Wnt5a信號通路調(diào)節(jié)了結(jié)直腸癌的分化。為判斷 TrpC5 是否參與了結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移過程，本課題首先探討了 TrpC5 在臨床結(jié)腸癌患者組織中的表達(dá)情況。我們收集了 127 例患者原發(fā)性結(jié)腸癌組織及相鄰正常組織，另外包括 46 例結(jié)腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織標(biāo)本，通過免疫組化實驗，來分析 TrpC5 在組織中的表達(dá)水平。實驗結(jié)果如圖 3-1 所示，與相鄰正常組織相比，結(jié)腸癌原位癌組織中 TrpC5 顯著高表達(dá)；而 46 例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織標(biāo)本的結(jié)果顯示，與對應(yīng)結(jié)腸癌組織相比，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中 TrpC5 的表達(dá)水平有明顯升高（圖 3-1 和表3-1）。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 Francesco Moccia;Roberto Berra-Romani;Franco Tanzi;;Update on vascular endothelial Ca~(2+) signalling:A tale of ion channels,pumps and transporters[J];World Journal of Biological Chemistry;2012年07期

2 ;Effect and mechanism of the Twist gene on invasion and metastasis of gastric carcinoma cells[J];World Journal of Gastroenterology;2008年16期

3 朱倩;徐湖波;徐倩;晏維;田德安;;Expression of Twist Gene in Human Hepatocellular Carcinoma Cell Strains of Different Metastatic Potential[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2008年02期

本文編號：2758205