【摘要】：[目的]檢測(cè)候選抑癌基因SASH1和抑癌基因E-cadherin、p53在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)水平和BRAF基因突變情況,探討四者關(guān)系以及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系,嘗試探索四者在甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生過(guò)程中的作用。[方法]第一部分,選擇甲狀腺乳頭狀癌病例59例,使用免疫組織化學(xué)染色手段,觀察SASH1、E-cadherin、p53在甲狀腺乳頭狀癌癌細(xì)胞和癌旁細(xì)胞中的表達(dá)情況。對(duì)表達(dá)在胞漿的SASH1蛋白和胞膜的E-cadherin蛋白記錄平均光密度,表達(dá)于胞核的p53蛋白記錄平均陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。使用SPSS統(tǒng)計(jì)SASH1、E-cadherin平均光密度和p53陽(yáng)性表達(dá)比例與臨床病理參數(shù)的關(guān)系以及互相之間表達(dá)情況的關(guān)系。第二部分,選擇36例患者,使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)對(duì)腫瘤細(xì)胞DNA進(jìn)行擴(kuò)增,檢測(cè)BRAF基因突變率,分析其與臨床病理參數(shù)及 SASH1、p53、E-cadherin 的關(guān)系。[結(jié)果]第一部分:(1)59例患者中,免疫組化顯示,SASH1在甲狀腺乳頭狀癌癌細(xì)胞中表達(dá)平均光密度為0.03369±0.02473,癌旁濾泡上皮細(xì)胞平均光密度為0.04283±0.03208,癌細(xì)胞的SASH1表達(dá)低于癌旁濾泡上皮細(xì)胞,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.246,p=0.0290.05)。E-cadherin在甲狀腺乳頭狀癌癌細(xì)胞中表達(dá)平均光密度為0.05027±0.02803,癌旁濾泡上皮細(xì)胞平均光密度為0.06272±0.03475,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意(t=2.203,p=0.0320.05)。(2)癌細(xì)胞SASH1蛋白表達(dá)與腫瘤是否為多灶發(fā)病,是否局限于單側(cè)有關(guān)(r=0.325,p=0.0120.05),單側(cè)多灶甲狀腺乳頭狀癌平均光密度為0.03485±0.02597,雙側(cè)多灶甲狀腺乳頭狀癌平均光密度為0.02639±0.02258,單側(cè)單發(fā)甲狀腺乳頭狀癌平均光密度為0.04420±0.02402,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。SASH1蛋白表達(dá)水平與患者性別、年齡、腫瘤最大徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血清促甲狀腺素.(Thyroid Stimulating Hormone,TSH)、TNM 分期、是否伴包膜及周?chē)M織侵犯無(wú)相關(guān)性(p0.05)。Logistic回歸顯示SASH1蛋白表達(dá)水平是多灶發(fā)病的保護(hù)因素,而腫瘤大小(1.10± 1.06)為多灶發(fā)病的危險(xiǎn)因素。癌細(xì)胞E-cadherin蛋白平均光密度在年齡大于45歲患者中為0.05944±0.03457,高于年齡不滿45歲患者的平均光密度0.04442±0.02146,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)且與年齡存在正相關(guān)性(相關(guān)系數(shù)r=0.294,p0.05),.并與TSH水平存在正相關(guān)性(相關(guān)系數(shù)r=0.339,p0.05)。癌細(xì)胞E-cadherin平均光密度與性別、腫瘤直徑、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤多灶性、腫瘤多中心性、是否伴包膜及周?chē)M織侵犯無(wú)關(guān)(p0.05)。Logistic回歸顯示腫瘤細(xì)胞E-cadherin平均光密度是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的保護(hù)因素,而腫瘤大小(1.10± 1.06 cm)是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因素。SASH1與E-cadherin的蛋白表達(dá)之間并無(wú)顯著相關(guān)性(p0.05)。(3)59例患者p53檢測(cè)陽(yáng)性21例,陰性38例。p53表達(dá)與TNM分期、年齡、性別、腫瘤直徑、多灶性、淋巴轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(p0.05)。p53陽(yáng)性組與陰性組的SASH1平均光密度和E-cadherin平均光密度均無(wú)顯著差異。但p53陽(yáng)性組的癌旁正常細(xì)胞表達(dá)SASH1的平均光密度0.05402±0.03606,較陰性組平均光密度 0.03647±0.02815 更高,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.058,p=0.040.05)。第二部分:36例患者中,伴有BRAF V600E位點(diǎn)突變患者29例,BRAF V600E野生型7例,突變率高達(dá)80.6%。突變組患者術(shù)前血清TSH為2.2675±1.630,野生型組患者術(shù)前血清TSH為1.102±0.644,突變組患者血清TSH較高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,(t=2.647,p=0.0170.05),而性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、多灶性、多中心性、年齡、腫瘤直徑、TNM分期、SASH1表達(dá)、E-cadherin表達(dá)、p53陽(yáng)性率并沒(méi)有顯著的差異(p0.05)。[結(jié)論]1.SASH1在甲狀腺乳頭狀癌腫瘤細(xì)胞中表達(dá)低于癌旁正常細(xì)胞,多灶性甲狀腺乳頭狀癌的SASH1表達(dá)低于單灶性甲狀腺乳頭狀癌。SASH1有可能是引起甲狀腺乳頭狀癌多灶發(fā)病的原因之一,可能作為分子標(biāo)記用于甲狀腺乳頭狀癌的治療和診斷。2.E-cadherin在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)低于癌旁細(xì)胞,表達(dá)情況與年齡呈正相關(guān),是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的保護(hù)因素。3.p53在甲狀腺乳頭狀癌表達(dá)陽(yáng)性組與陰性組間間的臨床參數(shù)并沒(méi)有顯著區(qū)別,腫瘤細(xì)胞表達(dá)SASH1程度、E-cadherin程度無(wú)顯著差異。4.BRAF(V600E)位點(diǎn)突變率在甲狀腺乳頭狀癌中較高,TSH水平在突變組與野生型組間存在差異,結(jié)合TSH水平和BRAF突變情況,對(duì)于甲狀腺乳頭狀癌的診斷具有積極意義。但組間SASH1、E-cadherin、p53的表達(dá)沒(méi)有顯著差異。5.SASH1、E-cadherin、p53、BRAF突變可能通過(guò)不同的信號(hào)通路參與了甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生發(fā)展。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R736.1
【圖文】：

通過(guò)對(duì)大數(shù)據(jù)庫(kù)ＴＣＧＡ數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以得到大量ＲＮＡ水平相關(guān)性，再逡逑根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)，選擇查看ＳＡＳＨ１與ＣＤＨ１邋（Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ）和ＴＰ５３邋（ｐ５３）的ＲＮＡ水平相逡逑關(guān)性（圖１）。可見(jiàn)，在ＲＮＡ７Ｋ平，ＳＡＳＨ１與ＣＤＨ１為正相關(guān)，與ＴＰ５３負(fù)相關(guān)。逡逑ＳＡＳＨ１邋（ＳＡＭ－ａｎｄ邋ＳＨ３－ｄｏｍａｉｎ邋ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ邋１）是邋２００３邋年由邋Ｚｅｌｌｅｒ邋等研究乳腺逡逑癌細(xì)胞雜交性丟失時(shí)發(fā)現(xiàn)的基因，位于人染色體６ｑ２４．邋３位點(diǎn)［５］。ＳＡＳＨ１基因含逡逑２７９７４６個(gè)堿基對(duì)，包括２２個(gè)外顯子、２１個(gè)內(nèi)含子，其轉(zhuǎn)錄ｍＲＮＡ產(chǎn)物有兩種，逡逑長(zhǎng)度分別為７．邋５ｋｂ和４．邋４ｋｂ，其中７．邋５ｋｂ產(chǎn)物表達(dá)較少，僅在腦組織中大量表達(dá)，逡逑而４．邋４ｋｂ產(chǎn)物則在除淋巴細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞以外的正常組織內(nèi)大量表達(dá)。ＳＡＳＨ１編逡逑碼蛋白含有１２４７個(gè)l#基酸，分子量１４０ｋｄａ，含有兩個(gè)ＳＡＭ（ｓｔｅｒｉｌｅａｍｏｄｕｌｅ）逡逑８逡逑

逡逑２．邋４統(tǒng)計(jì)學(xué)處理逡逑使用ＳＰＳＳ邋２２．０軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用ｘ±ｓ表示，計(jì)數(shù)資料用百逡逑分?jǐn)?shù)表示，可信區(qū)間為９５％，邋ｐ＜０．邋０５有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。計(jì)量資料比較使用ｔ檢驗(yàn)，逡逑多組資料比較使用方差分析和秩和檢驗(yàn)，使用Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回歸分析危險(xiǎn)因素。逡逑結(jié)果逡逑１臨床資料逡逑男性１？例，占１６．邋９％，女性４９例，占７３．邋１％。不滿４５歲３６例占６１．０％，大逡逑于４５歲２３例，占３９．邋０％。逡逑２邋ＨＥ染色結(jié)果逡逑５９例均取得癌旁組織和病灶組織（圖３）。鏡下見(jiàn)腫瘤細(xì)胞排列為不規(guī)則乳逡逑頭狀。腫瘤細(xì)胞胞漿淺染，胞核肥大呈毛玻璃狀，５９例均為經(jīng)典甲狀腺乳頭狀逡逑癌，未見(jiàn)特殊亞型。逡逑

３．１邋ＳＡＳＨ１在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)情況逡逑ＳＡＳＨ１蛋白主要在甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)，出現(xiàn)棕色深黃色顆粒逡逑（圖４）。本實(shí)驗(yàn)中，入組的５９例甲狀腺乳頭狀癌癌細(xì)胞均有強(qiáng)弱不等的表達(dá)，逡逑在癌旁正常濾泡組織中，普遍表達(dá)（圖５）。逡逑‘ｒ0l#沿：ｗ、‘邐ｙ邋ｖ逡逑？１邋＃邋＾邋Ｊ－邐＾邋ＩＬｖ－邋％邐＼邐｜ＬＶ逡逑丨？、？邋．邐＾邋ｆ邋＾Ｗｋ邋ｌｙ逡逑？邐＊邋＾邋４邋４？ｖ邋■邋＇Ｍ邋Ｈ邋１邋－＇５－邐＜邐＾邐、逡逑ｒ＂邋、，邐’}恪潰恚�，覌偓ｉ逦０櫫x希掊危㈠緯у澹罰澹垮澹蟈澹椋駑危緬義賢跡矗澹櫻粒櫻齲敝琢魷赴澩錚兀玻埃板甕跡擔(dān)澹櫻粒櫻齲卑┡韻赴澩錚兀玻埃板義賢ü觳庀赴兇厴帕Ｏ嘍雜諳赴寤鈉驕餉芏齲員勸┡宰櫓氚╁義舷赴鈉驕餉芏齲⑾鄭矗襖頰甙┫赴驕餉芏冉習(xí)┡韻赴餉芏鵲�，１９辶x俠頰甙┫赴驕餉芏冉習(xí)┡韻赴啾雀

本文編號(hào)：2755733