【摘要】：[目的]探討TEM8在NSCLC中的表達、生物學(xué)功能及分子作用機制。[方法]1.TEM8在NSCLC患者中的表達及其臨床意義研究收集67例NSCLC患者手術(shù)切除的肺癌組織石蠟標(biāo)本,應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法比較TEM8在NSCLC患者癌組織和癌旁組織中的表達,分析TEM8表達與患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。免疫組織化學(xué)染色法對67例NSCLC患者腫瘤組織切片進行CD34標(biāo)記并進行微血管計數(shù),初步探討TEM8表達與腫瘤血管生成的關(guān)系。收集21例NSCLC患者手術(shù)切除的肺癌組織新鮮標(biāo)本,分別應(yīng)用實時熒光定量PCR和蛋白印跡法比較患者癌組織和癌旁組織中TEM8表達情況。單因素生存分析NSCLC患者生存期與TEM8蛋白表達水平及臨床病理特征的關(guān)系,Cox回歸模型分析TEM8表達與NSCLC患者預(yù)后的影響因素。2.TEM8與NSCLC細胞生物學(xué)行為的關(guān)系及機制的體外研究應(yīng)用慢病毒表達載體構(gòu)建、篩選穩(wěn)定沉默和過表達TEM8的宣威肺腺癌XWLC-05細胞株。MTT法檢測沉默和過表達TEM8后肺癌細胞增殖能力,流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡及周期變化,掃描電鏡觀察細胞形態(tài)變化,劃痕實驗觀察細胞遷移能力,Transwell實驗觀察細胞侵襲能力,qRT-PCR和Western blot檢測ERK、BCL-2及cyclinD1等分子表達,初步探討TEM8的體外分子作用機制。3.TEM8對XWLC-05肺癌裸鼠移植瘤模型影響及機制的體內(nèi)研究將穩(wěn)定沉默TEM8的XWLC-05細胞接種裸鼠皮下,觀察裸鼠一般情況、成瘤情況及腫瘤生長情況。成功接種后的第28天處死裸鼠,測量離體腫瘤的體積和重量,計算腫瘤抑制率。離體腫瘤組織HE、免疫組化和免疫熒光檢測TEM8和CD34表達,通過微血管計數(shù)觀察TEM8表達與NSCLC腫瘤血管生成的關(guān)系。qRT-PCR和Western blot檢測ERK、BCL-2和cyclinD1等分子表達,初步探討TEM8的體內(nèi)分子作用機制。[結(jié)果]1..TEM8在NSCLC患者中的表達及其臨床意義研究67例NSCLC患者腫瘤組織免疫組化染色提示,TEM8在癌組織中的陽性表達率為52.23%(35/67),在癌旁組織中的陽性表達率為17.91%(12/67),兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。21例NSCLC患者腫瘤組織qRT-PCR和Western blot實驗證實:在mRNA和蛋白水平,TEM8在癌組織中的表達顯著高于癌旁組織,兩者之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。TEM8表達陽性的NSCLC患者腫瘤組織微血管密度顯著增大,與TEM8表達陰性患者的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),提示TEM8表達可促進NSCLC患者腫瘤血管生成。TEM8表達與NSCLC患者腫瘤分化程度、臨床分期、術(shù)后發(fā)生胸膜侵犯、術(shù)后出現(xiàn)遠處轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P0.05)。單因素生存分析結(jié)果顯示,NSCLC患者的生存期與TEM8蛋白表達水平、臨床分期、是否有遠處轉(zhuǎn)移相關(guān)(P0.05)。Cox回歸模型分析結(jié)果提示,TEM8蛋白表達水平、臨床分期、是否有遠處轉(zhuǎn)移是NSCLC患者預(yù)后的影響因素(P0.05)。2.TEM8與NSCLC細胞生物學(xué)行為的關(guān)系及機制的體外研究沉默TEM8表達后,與空白對照組及陰性對照組相比,MTT檢測結(jié)果提示細胞增殖能力受到顯著抑制(P0.01);流式細胞凋亡檢測結(jié)果提示細胞凋亡率明顯上升,達(24.17±2.16)%(P0.01);掃描電鏡觀察顯示XWLC-05細胞呈現(xiàn)凋亡的形態(tài)學(xué)改變;流式細胞周期分析結(jié)果提示細胞周期被阻滯在G1期(P0.05),從而抑制細胞增殖活性;劃痕實驗結(jié)果提示細胞遷移能力受到顯著抑制(P0.01);Transwell實驗結(jié)果提示細胞侵襲能力受到顯著抑制(P0.01);qRT-PCR 和 Western blot 檢測結(jié)果提示:肺癌細胞 ERK(或 p-ERK1/2)表達顯著下調(diào)(P0.01),BCL-2、cyclinD1的表達亦顯著降低(P0.01)。過表達TEM8后,與空白對照組及陰性對照組相比,MTT檢測結(jié)果提示細胞增殖能力顯著增強(P0.01);流式細胞凋亡檢測結(jié)果提示細胞凋亡率未見明顯變化(P0.05);流式細胞周期分析結(jié)果提示細胞周期未被阻滯在G1期(P0.05),而是更多地進入了 G2期,提示肺癌細胞獲得了更強的增殖活性(P0.05);劃痕實驗結(jié)果提示細胞遷移能力顯著增強(P0.01);Transwell實驗結(jié)果提示細胞侵襲能力顯著增強(P0.01);qRT-PCR和Western blot檢測結(jié)果提示:肺癌細胞ERK(或p-ERK1/2)表達顯著上調(diào)(P0.01),BCL-2、cyclinD1的表達亦顯著增加(P0.01)。3.TEM8對XWLC-05肺癌裸鼠移植瘤模型影響及機制的體內(nèi)研究最早于接種后第7天出現(xiàn)肉眼可見的移植瘤,各組裸小鼠均成功成瘤,成瘤率100%。至實驗結(jié)束時,裸鼠全部存活。實驗觀察期間,各組小鼠的體重均有不同程度的增長,但組間比較無顯著差異(P0.05)。與空白對照組和陰性對照組相比,沉默TEM8表達后,實驗組裸鼠皮下移植瘤的生長受到明顯抑制,腫瘤抑制率為57.82%,其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。實驗組裸鼠離體腫瘤重量為(0.29±0.04)g,顯著低于陰性對照組[(0.58±0.08)g,P0.01]和空白對照組[(0.63±0.17)g,P0.01],空白對照組和陰性對照組腫瘤重量的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。實驗組裸鼠離體腫瘤體積(436.64±102.39)mm3明顯小于陰性對照組[(944.18±178.52)mm3,P0.01]和空白對照組[(988.68±128.43)mm3,P0.01],空白對照組與陰性對照組腫瘤體積差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。免疫組織化學(xué)及免疫熒光染色顯示:TEM8蛋白主要表達于腫瘤細胞膜,實驗組TEM8的表達顯著低于陰性對照組和空白對照組(P0.05)。CD34主要表達于荷瘤組織中血管內(nèi)膜,實驗組CD34表達顯著低于陰性對照組和空白對照組,微血管密度明顯低于對照組(P0.05),提示TEM8表達可促進肺癌荷瘤小鼠腫瘤血管生成。qRT-PCR和Western blot檢測結(jié)果提示:沉默TEM8表達后,與對照組相比,肺癌細胞ERK(或p-ERK1/2)表達顯著下調(diào)(P0.01),BCL-2、cyclinD1 的表達亦顯著降低(P0.01)。[結(jié)論]1.TEM8在NSCLC患者癌組織中存在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平的異常表達。2.癌組織中TEM8的表達水平結(jié)合臨床分期、是否有遠處轉(zhuǎn)移等,可作為NSCLC患者病情評估和預(yù)后判斷的參考指標(biāo),具有一定的臨床指導(dǎo)意義。3.TEM8可能通過ERK/BCL-2信號通路調(diào)控細胞周期蛋白cyclinD1和抗凋亡蛋白BCL-2表達水平,進而調(diào)節(jié)NSCLC細胞的增殖和凋亡。4.TEM8與NSCLC腫瘤血管生成有關(guān),可能是NSCLC抗腫瘤血管生成治療的靶點。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R734.2
【圖文】：

結(jié)果逡逑１．免疫組化比較ＴＥＭ８在６７例ＮＳＣＬＣ患者癌組織和癌旁組織中的表達逡逑在免疫組化實驗中，ＴＥＭ８蛋白陽性染色呈棕黃色顆粒．在組織中主要定位逡逑于細胞膜（如圖１－１所示），在ＮＳＣＬＣ患者癌組織中的陽性表達率為５２．２３％逡逑（３５／６７），在癌旁組織中的陽性表達率為１７．９１％邋（１２／６７），兩者比較差異顯著逡逑（尸＜０．０５）。逡逑

／＼邋Ｂａａｃ—Ｄ—ＥＢＨＦ邋Ｍ邋Ｇ邋■■邋Ｍ逡逑圖１－３：邋ｑＲＴ－ＰＣＲ擴增曲線逡逑Ｆｉｇ．邋１－３邋Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋ｑＲＴ－ＰＣＲ逡逑表Ｍ邋：邋ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測

—２８ｓ逡逑丨一１８ｓ逡逑圖１－２：邋ＮＳＣＬＣ患者癌組織和癌旁組織ＲＮＡ電泳圖逡逑（泳道１、２、３所示分別為３例ＮＳＣＬＣ患者腫瘤組織提取總ＲＮＡ）逡逑Ｆｉｇ．邋１－２邋ＲＮＡ邋ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ邋ｍａｐ邋ｏｆ邋ＮＳＣＬＣ邋ｓｕｒｇｉｃａｌ邋ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ．逡逑（Ｌａｎｅ邋１，２邋ａｎｄ邋３邋ｓｈｏｗｅｄ邋ｔｏｔａｌ邋ＲＮＡ邋ｅｘｔｒａｃｔｅｄ邋ｆｒｏｍ邋３邋ｃａｓｅｓ邋ｏｆ邋ＮＳＣＬＣ邋ｓｕｒｇｉｃａｌ逡逑ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ邋ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．）逡逑Ｏｕｒｖｅ逡逑ｉ：：ｒｉ逡逑一－」ｉ＼逡逑ｎ？邋Ｄ邋７0邋ｏ邋ｏ邋ｇｏ邋ｏ邋ａａ．ｏ邋ｏｏ邋ａ邋0？邋ｏ逡逑Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ邋ｆ＊Ｃ）逡逑／＼邋Ｂａａｃ—Ｄ—ＥＢＨＦ邋Ｍ邋Ｇ邋■■邋Ｍ逡逑圖１－３：邋ｑＲＴ－

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 韓慧;王秀問;;腫瘤血小板相關(guān)血管生成調(diào)節(jié)蛋白作用研究進展[J];中華腫瘤防治雜志;2018年14期

2 張碩;唐德才;郭秀霞;尹剛;;中藥抗腫瘤血管生成的信號通路研究[J];世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化;2016年10期

3 羅鋒;王力;;抗腫瘤血管生成,腫瘤免疫治療與腫瘤微環(huán)境的研究進展[J];腫瘤預(yù)防與治療;2016年06期

4 李海峰;蔣秋英;;涎腺粘液表皮樣癌COX-2表達與腫瘤血管生成[J];臨床醫(yī)藥文獻電子雜志;2017年07期

5 周舟;侯煒;李站;李錚;謝燕達;王家偉;伍曉慧;董廣通;;中藥抗腫瘤血管生成的治療現(xiàn)狀與展望[J];遼寧中醫(yī)雜志;2017年09期

6 朱振浩;陳家樂;伍麗青;陳志浩;孫嘉;;miRNA參與的血管內(nèi)皮生長因子及其信號通路調(diào)控在腫瘤血管生成中作用的研究進展[J];廣東醫(yī)學(xué);2016年01期

7 樊江浩;劉揆亮;吳靜;;蛋白多糖在腫瘤血管生成中的作用[J];臨床與病理雜志;2016年04期

8 程磊;鄧玉華;;具有抗腫瘤血管生成作用的三大類中藥研究現(xiàn)狀和思考[J];中國當(dāng)代醫(yī)藥;2014年19期

9 包鈺杰;陳培豐;;中藥抑制腫瘤血管生成研究進展[J];新中醫(yī);2013年09期

10 王娟;李培訓(xùn);;中藥抗腫瘤血管生成研究進展[J];實用中醫(yī)藥雜志;2012年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 付艷麗;王勝飛;王芹;許玲;;具有抗腫瘤血管生成作用的三大類中藥研究現(xiàn)狀和思考[A];發(fā)揮中醫(yī)優(yōu)勢，注重轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)——2013年全國中醫(yī)腫瘤學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2013年

2 蔡彥;許世雄;Quan Long;;力學(xué)環(huán)境影響下的實體腫瘤血管生成數(shù)值模擬[A];2008年全國生物流變學(xué)與生物力學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2008年

3 季宇彬;周婷婷;鄒翔;;腫瘤血管生成及其供血模式研究進展[A];全國第十一屆生化與分子藥理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

4 沈存思;陸茵;;抑癌基因PTEN與腫瘤血管生成研究進展[A];全國中藥藥理學(xué)會聯(lián)合會學(xué)術(shù)交流大會論文摘要匯編[C];2012年

5 沈存思;陸茵;;抑癌基因PTEN與腫瘤血管生成研究進展[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會中藥實驗藥理分會2012年學(xué)術(shù)年會論文摘要匯編[C];2012年

6 張敏鳴;;腫瘤血管生成的影像學(xué)研究進展[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三屆全國放射學(xué)大會論文匯編（上冊）[C];2006年

7 張敏鳴;;腫瘤血管生成的影像學(xué)研究進展[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三屆全國放射學(xué)大會論文匯編（下冊）[C];2006年

8 壽成超;;腫瘤血管生成與抗腫瘤小肽藥物的研發(fā)[A];2007醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

9 蘇亞輝;馮勤;宋述梅;安平;雷和田;姜北海;壽成超;;腫瘤血管生成與抗腫瘤小肽藥物的研發(fā)[A];2008年中國病理生理學(xué)會第十一屆腫瘤和第十二屆免疫專業(yè)委員會學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

10 高昊;許世雄;趙改平;王慶偉;瀏丹;Collins MW;;腫瘤血管生成的二維數(shù)值模擬和血液動力學(xué)[A];中國力學(xué)學(xué)會學(xué)術(shù)大會'2005論文摘要集（上）[C];2005年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 記者 李穎;抗腫瘤血管生成藥安維汀被廣泛應(yīng)用[N];科技日報;2011年

2 白京麗;中醫(yī)防治腫瘤大有可為[N];中國醫(yī)藥報;2001年

3 ;新世紀(jì)腫瘤治療出現(xiàn)三大新動向[N];中國醫(yī)藥報;2002年

4 解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院腫瘤科主任 肖文華　整理 張獻懷;抗腫瘤血管生成可能有助消腹水[N];健康報;2008年

5 張前 趙言群 解華;研究表明多種中藥對腫瘤血管生成有影響[N];中國醫(yī)藥報;2006年

6 記者 顧泳;首個抗腫瘤血管生成藥國內(nèi)上市[N];解放日報;2010年

7 閔建穎邋記者 胡德榮;抑制腫瘤血管生成找到新靶點[N];健康報;2007年

8 本報記者 譚嘉 張磊 通訊員 馮毅;擒獲腫瘤血管生成元兇[N];健康報;2013年

9 張旭;“安維汀中外學(xué)者交流計劃”正式啟動[N];中國醫(yī)藥報;2010年

10 鄒爭春 記者 陳磊;我科學(xué)家用基因靶向抑制腫瘤血管生成[N];科技日報;2013年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 龔泉;TEM8在NSCLC中的表達及其作用機制的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2018年

2 葛文杰;腫瘤細胞中iASPP抑制ROS的作用及其分子機制研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2018年

3 劉為民;TIPE1抑制胃癌腫瘤血管生成的作用及機制研究[D];暨南大學(xué);2018年

4 廖振林;以Tie2為靶標(biāo)的抗腫瘤血管生成的研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

5 辛華;腫瘤細胞向血管外游走過程中內(nèi)皮細胞功能調(diào)控的研究[D];吉林大學(xué);2004年

6 許傳杰;基質(zhì)金屬蛋白酶-2C端片斷PEX克隆、表達及其抑制腫瘤的作用[D];吉林大學(xué);2004年

7 秦軍;抑制COX-2表達對逆轉(zhuǎn)膀胱癌惡性生物學(xué)行為的影響[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

8 劉浩;中藥注射劑調(diào)控腫瘤血管生成信號傳導(dǎo)通路的機制研究[D];中國中醫(yī)研究院;2005年

9 王志學(xué);艾康顆粒抑制腫瘤血管生成及抗轉(zhuǎn)移作用的基礎(chǔ)與臨床研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2005年

10 蔣凱;三羥異黃酮對光動力學(xué)療法抗腫瘤治療的增效作用及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 劉東洋;H_2S和腫瘤新生血管關(guān)系研究進展[D];河北醫(yī)科大學(xué);2018年

2 張怡青;以TSP50 mRNA 3'UTR為靶點的抗腫瘤藥物篩選及其抗腫瘤作用研究[D];東北師范大學(xué);2018年

3 傅宣皓;基于mTOR信號通路探討氯化兩面針堿的抗腫瘤血管生成作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2017年

4 高子翔;Fucoidan對人胃腺癌SGC7901細胞誘導(dǎo)的淋巴管生成的抑制作用[D];大連醫(yī)科大學(xué);2018年

5 趙菁;腫瘤血管特異性趨化CTL納米系統(tǒng)抗腫瘤研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

6 柴小平;FAPα激活式BF211系列前藥的體內(nèi)外抗腫瘤藥效評價[D];華東師范大學(xué);2017年

7 韓東冬;GBEE抑制Lewis肺癌腫瘤血管生成及其對Wnt/β-catenin-VEGF信號通路的影響[D];揚州大學(xué);2017年

8 蘇碩楠;海洋抗腫瘤多肽CS5931靶向作用于Enolase1抑制結(jié)腸癌生長與轉(zhuǎn)移的分子機制研究[D];首都醫(yī)科大學(xué);2017年

9 張福華;芥子堿的抗腫瘤血管生成作用及其機制探討[D];福建師范大學(xué);2012年

10 王志強;異甘草素抗腫瘤血管生成的作用研究[D];蘭州大學(xué);2012年

本文編號：2753176