【摘要】：目的:觀察紫草素聯(lián)合吉非替尼對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖的影響,探討其可能的作用機(jī)制。方法:1.Western blot檢測(cè)不同濃度吉非替尼處理A549細(xì)胞6h、12h后PKM2的表達(dá)水平;2.CCK-8檢測(cè)紫草素和/或吉非替尼對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用;3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)紫草素和/或吉非替尼對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)周期改變及對(duì)細(xì)胞凋亡的影響;4.Western blot檢測(cè)紫草素和/或吉非替尼處理A549細(xì)胞12h后PKM2表達(dá)水平,以及相關(guān)蛋白分子表達(dá)水平的變化;5.CRISPR/Cas9法建立細(xì)胞系A(chǔ)549/PKM2~-。結(jié)果:1.細(xì)胞型態(tài)改變不同濃度紫草素和/或吉非替尼作用A549、H1299不同時(shí)間,細(xì)胞數(shù)量明顯減少,且細(xì)胞間距增大、胞體變圓縮小,出現(xiàn)明顯的細(xì)胞凋亡現(xiàn)象,并具有明顯時(shí)間和劑量依賴性。2.細(xì)胞周期變化紫草素與吉非替尼聯(lián)合用藥組較對(duì)照組、吉非替尼組G0/G1期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)增加,G2/M期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)減少,聯(lián)合用藥對(duì)細(xì)胞周期的影響最明顯,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.細(xì)胞凋亡改變紫草素與吉非替尼聯(lián)合用藥能有效誘導(dǎo)A549、H1299發(fā)生凋亡,凋亡率明顯高于對(duì)照組、吉非替尼組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.PKM2表達(dá)改變用紫草素或吉非替尼處理A549細(xì)胞后,耐藥蛋白PKM2的表達(dá)水平均較對(duì)照組發(fā)生變化,其中單獨(dú)用10μg/ml吉非替尼處理A549細(xì)胞12h時(shí),PKM2表達(dá)水平明顯增強(qiáng);而高濃度紫草素和吉非替尼聯(lián)合用藥,細(xì)胞中PKM2表達(dá)水平顯著下降。5.PKM2敲除的影響PKM2敲除的A549細(xì)胞對(duì)吉非替尼敏感性較A549有所提高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:紫草素能夠增強(qiáng)非小細(xì)胞肺癌對(duì)吉非替尼的敏感性,其作用機(jī)制與下調(diào)PKM2的表達(dá)水平有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R734.2
【圖文】：

圖 1 不同濃度吉非替尼對(duì)不同 NSCLC 細(xì)胞增殖抑制作用hibitory effect of gefitinib at different concentrations on proliferation of N圖 2 不同濃度紫草素對(duì)不同 NSCLC 細(xì)胞增殖抑制作用hibitory effect of shikonin at different concentrations on proliferation of N

11圖 2 不同濃度紫草素對(duì)不同 NSCLC 細(xì)胞增殖抑制作用hibitory effect of shikonin at different concentrations on proliferation of N替尼對(duì) PKM2 表達(dá)的影響度 0、5、10μg/ml 的吉非替尼分別處理 A549 細(xì)胞 6h胞總蛋白，Bradford 法進(jìn)行蛋白質(zhì)定量，制備相同濃度blot 法檢測(cè) PKM2 表達(dá)，結(jié)果如圖 3。由圖 3 可見(jiàn)，用處理 A549 細(xì)胞 12h 時(shí)，細(xì)胞中 PKM2 的表達(dá)量顯著

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 朱夢(mèng)媛;王汝冰;周文;李紹順;;紫草素及其衍生物抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2012年05期

本文編號(hào)：2739212