【摘要】：目的:觀察紫草素聯(lián)合吉非替尼對非小細胞肺癌細胞增殖的影響,探討其可能的作用機制。方法:1.Western blot檢測不同濃度吉非替尼處理A549細胞6h、12h后PKM2的表達水平;2.CCK-8檢測紫草素和/或吉非替尼對非小細胞肺癌細胞生長的抑制作用;3.流式細胞術(shù)檢測紫草素和/或吉非替尼對非小細胞肺癌細胞生長周期改變及對細胞凋亡的影響;4.Western blot檢測紫草素和/或吉非替尼處理A549細胞12h后PKM2表達水平,以及相關(guān)蛋白分子表達水平的變化;5.CRISPR/Cas9法建立細胞系A(chǔ)549/PKM2~-。結(jié)果:1.細胞型態(tài)改變不同濃度紫草素和/或吉非替尼作用A549、H1299不同時間,細胞數(shù)量明顯減少,且細胞間距增大、胞體變圓縮小,出現(xiàn)明顯的細胞凋亡現(xiàn)象,并具有明顯時間和劑量依賴性。2.細胞周期變化紫草素與吉非替尼聯(lián)合用藥組較對照組、吉非替尼組G0/G1期細胞百分數(shù)增加,G2/M期細胞百分數(shù)減少,聯(lián)合用藥對細胞周期的影響最明顯,差異具有統(tǒng)計學意義。3.細胞凋亡改變紫草素與吉非替尼聯(lián)合用藥能有效誘導(dǎo)A549、H1299發(fā)生凋亡,凋亡率明顯高于對照組、吉非替尼組,差異有統(tǒng)計學意義。4.PKM2表達改變用紫草素或吉非替尼處理A549細胞后,耐藥蛋白PKM2的表達水平均較對照組發(fā)生變化,其中單獨用10μg/ml吉非替尼處理A549細胞12h時,PKM2表達水平明顯增強;而高濃度紫草素和吉非替尼聯(lián)合用藥,細胞中PKM2表達水平顯著下降。5.PKM2敲除的影響PKM2敲除的A549細胞對吉非替尼敏感性較A549有所提高,差異具有統(tǒng)計學意義。結(jié)論:紫草素能夠增強非小細胞肺癌對吉非替尼的敏感性,其作用機制與下調(diào)PKM2的表達水平有關(guān)。
【學位授予單位】：川北醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R734.2
【圖文】：

圖 1 不同濃度吉非替尼對不同 NSCLC 細胞增殖抑制作用hibitory effect of gefitinib at different concentrations on proliferation of N圖 2 不同濃度紫草素對不同 NSCLC 細胞增殖抑制作用hibitory effect of shikonin at different concentrations on proliferation of N

11圖 2 不同濃度紫草素對不同 NSCLC 細胞增殖抑制作用hibitory effect of shikonin at different concentrations on proliferation of N替尼對 PKM2 表達的影響度 0、5、10μg/ml 的吉非替尼分別處理 A549 細胞 6h胞總蛋白，Bradford 法進行蛋白質(zhì)定量，制備相同濃度blot 法檢測 PKM2 表達，結(jié)果如圖 3。由圖 3 可見，用處理 A549 細胞 12h 時，細胞中 PKM2 的表達量顯著

【參考文獻】

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1 朱夢媛;王汝冰;周文;李紹順;;紫草素及其衍生物抗腫瘤作用研究進展[J];藥學學報;2012年05期

本文編號：2739212