【摘要】：目的:在世界范圍內(nèi),胃癌死亡率占惡性腫瘤死亡率的第二位。近幾十年來(lái),胃癌的發(fā)生部位發(fā)生明顯變化,來(lái)源于胃遠(yuǎn)端部位(胃竇)胃癌的發(fā)生率明顯下降,而食管胃交界部位(esophagogastric junction,EGJ)腫瘤(包括遠(yuǎn)端食管腺癌和賁門腺癌)的發(fā)生率呈明顯增高趨勢(shì)。從上世紀(jì)90年代開(kāi)始,河北省食管癌、胃癌高發(fā)區(qū)居民賁門腺癌的發(fā)病率呈現(xiàn)逐漸增高的趨勢(shì)。正常情況下,由于胃黏膜自身修復(fù)功能和各種胃黏膜保護(hù)因子的作用,胃黏膜在受到創(chuàng)傷時(shí)很快會(huì)愈合。然而,保護(hù)因子的減少或缺失會(huì)導(dǎo)致胃黏膜更多地暴露于有害物質(zhì),可能誘發(fā)胃癌相關(guān)基因表達(dá)的改變,促使胃癌的發(fā)生發(fā)展。胃動(dòng)蛋白基因家族(Gastrokines,GKN)是僅有的胃組織特異的胃癌相關(guān)基因,在胃組織特異表達(dá),并能夠顯著抑制胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)。Hp感染可導(dǎo)致GKN1、GKN2表達(dá)顯著下調(diào)及胃黏膜腺體基因改變,提示GKNs可能參與了Hp感染胃癌的發(fā)生。三葉草因子家族(trefoil factor family,TFF),包括TFF1、TFF2、TFF3三個(gè)成員,主要分泌于人體胃腸道組織粘液分泌細(xì)胞,其表達(dá)與粘蛋白MUC分泌細(xì)胞有關(guān)。TFFs的分泌可促進(jìn)胃黏膜上皮細(xì)胞的移動(dòng),快速修復(fù),防止炎癥的發(fā)生,以及調(diào)節(jié)胃黏膜上皮細(xì)胞的分化,與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)。以往研究發(fā)現(xiàn),Hp感染可影響胃黏膜上皮細(xì)胞TFFs及GKN的表達(dá)。Hp感染引起胃黏膜損傷需要與TFF1結(jié)合形成二聚體,TFF1可能是Hp感染的受體。而且,TFF1可能與GKN2結(jié)合形成異二聚體復(fù)合物在正常胃黏膜上皮發(fā)揮保護(hù)作用,細(xì)胞中TFF1與GKN2解離可使TFF1、GKN2失去正常的功能,從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。然而,尚無(wú)確切證據(jù)表明TFFs、GKN2在不同部位胃癌發(fā)生中的作用及機(jī)制,與不同部位胃癌發(fā)生中Hp感染的關(guān)系仍不清楚。因此,本研究采用免疫組化技術(shù)比較賁門腺癌與遠(yuǎn)端胃腺癌中TFF1、TFF2和GKN2的表達(dá)情況;同時(shí)采用細(xì)胞培養(yǎng)及分子生物學(xué)及時(shí)觀察Hp主要致病蛋白對(duì)胃黏膜永生化細(xì)胞株(GES-1)細(xì)胞增殖及TFF1、TFF2、GKN2表達(dá)的影響,深入分析Hp感染與胃粘膜保護(hù)因子在胃癌發(fā)病中的作用及機(jī)制,為胃癌的合理防治提供科學(xué)的理論依據(jù)。方法:選取2011-2014年河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院手術(shù)切除胃癌組織標(biāo)本共113例,其中賁門腺癌61例(腫瘤中心在Z線上1cm和下2cm以內(nèi)),遠(yuǎn)端胃腺癌52例。另外選取同期胃癌手術(shù)切除殘端正常胃粘膜23例作為對(duì)照。運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法比較TFF1、TFF2及GKN2在賁門腺癌與遠(yuǎn)端胃腺癌中的表達(dá)情況。采用細(xì)胞培養(yǎng)、Real-time PCR及Western Blot等技術(shù)探討Hp致病蛋白Cag A對(duì)GES-1細(xì)胞增殖及TFF1、TFF2和GKN2表達(dá)的影響。結(jié)果:1胃癌腫瘤組織中TFF1、TFF2、GKN2的表達(dá)情況TFF1、TFF2及GKN2免疫組化陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕黃色顆粒,定位于細(xì)胞漿。胃癌患者腫瘤組織中TFF1、TFF2及GKN2的表達(dá)分別為42.5%(48/113)、46.9%(53/113)及29.2%(33/113),均明顯低于正常胃黏膜中的表達(dá)(P0.05)。2比較賁門腺癌與遠(yuǎn)端胃腺癌中TFF1、TFF2及GKN2的表達(dá)2.1比較TFF1在不同部位胃腺癌中的表達(dá)免疫組化結(jié)果顯示,賁門腺癌和正常對(duì)照組胃黏膜中TFF1陽(yáng)性表達(dá)率分別為42.6%(26/61)、87.0%(20/23),二者相比具有顯著差異(P0.05)。遠(yuǎn)端胃腺癌組織中TFF1表達(dá)42.3%(22/52)明顯低于正常對(duì)照胃粘膜87.0%(P0.05)。比較賁門腺癌與遠(yuǎn)端胃腺癌中TFF1的表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同部位胃癌中TFF1的表達(dá)無(wú)明顯差異(P0.05)。在遠(yuǎn)端胃腺癌患者中,TFF1的陽(yáng)性表達(dá)與浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P0.05)。而在賁門腺癌患者中,TFF1的陽(yáng)性表達(dá)與浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)明顯關(guān)系。2.2 TFF2在不同部位胃腺癌中的表達(dá)免疫組化結(jié)果顯示,TFF2在賁門腺癌及遠(yuǎn)端胃腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為49.2%(30/61)、44.2%(23/52),均明顯低于正常對(duì)照胃粘膜組織91.3%(P0.05),但賁門腺癌與遠(yuǎn)端胃腺癌中TFF2的表達(dá)無(wú)明顯差異(P0.05)。在賁門腺癌及遠(yuǎn)端胃腺癌中,TFF2的陽(yáng)性表達(dá)與性別、年齡、浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及腫瘤分期均無(wú)明顯相關(guān)。2.3 GKN2在賁門腺癌與遠(yuǎn)端胃腺癌組織中的表達(dá)賁門腺癌和正常對(duì)照胃粘膜中GKN2陽(yáng)性表達(dá)率分別為29.5%(18/61)、77.3%(18/23),二者相比具有顯著差異(P0.05)。遠(yuǎn)端胃腺癌組織中GKN2表達(dá)28.8%(15/52)明顯低于正常對(duì)照胃粘膜77.3%(18/23,P0.05)。不同部位胃腺癌中GKN2表達(dá)無(wú)明顯差異(P0.05)。在遠(yuǎn)端胃腺癌患者中,GKN2的陽(yáng)性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P0.05)。而在賁門腺癌患者中,GKN2的陽(yáng)性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)明顯關(guān)系。3賁門腺癌和遠(yuǎn)端胃腺癌中Hp感染對(duì)于TFF1、TFF2及GKN2表達(dá)的影響在113例樣本中,賁門腺癌61例,其中Hp陽(yáng)性45例。伴有Hp感染患者TFF1陽(yáng)性表達(dá)率為33.3%,明顯低于未感染Hp患者組68.8%(P0.05)。在Hp感染胃癌患者腫瘤組織中TFF2陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于未感染者(40.0%vs 75.0%,P0.05)。Hp感染賁門腺癌患者GKN2蛋白陽(yáng)性表達(dá)為22.3%,明顯低于未感染組50%(P0.05)。在52例遠(yuǎn)端胃腺癌中,伴有Hp感染者40例。Hp感染胃癌患者TFF1、TFF2及GKN2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為32.5%、35.0%、20.0%,均明顯低于Hp未感染患者組(P0.05)。4 Hp主要致病蛋白Cag A對(duì)GES-1細(xì)胞增殖的影響4.1 MTT檢測(cè)結(jié)果MTT檢測(cè)結(jié)果顯示,不同濃度Cag A蛋白處理GES-1細(xì)胞24h后,GES-1細(xì)胞增生明顯,且呈劑量依賴性,在10μg/ml細(xì)胞增生達(dá)到高峰。然后隨著干預(yù)藥物劑量的增加,細(xì)胞增生逐漸降低。4.2 Cag A對(duì)細(xì)胞CDK4、Cyclin B1、PCNA表達(dá)的影響采用不同濃度Cag A蛋白刺激GES-1細(xì)胞,Real-time PCR結(jié)果顯示,CDK4、Cyclin B1、PCNA在2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml組中的表達(dá)均明顯高于對(duì)照組(P0.05)。Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)各個(gè)濃度干預(yù)組CDK4、Cyclin B1、PCNA蛋白表達(dá)均比對(duì)照組明顯升高。5 Cag A對(duì)GES-1細(xì)胞中TFF1、TFF2及GKN2表達(dá)的影響5.1 GES-1細(xì)胞中TFF1、TFF2及GKN2 mRNA水平變化Real-time PCR結(jié)果顯示,Cag A干預(yù)3h時(shí),10μg/ml組TFF1、TFF2及GKN2表達(dá)均明顯高于其它濃度組(P0.05)。而干預(yù)6h后,10μg/ml組TFF1、TFF2及GKN2表達(dá)卻明顯低于其它濃度組(P0.05)。24h時(shí),Cag A2.5μg/ml干預(yù)組TFF1、TFF2及GKN2表達(dá)水平較對(duì)照組明顯降低(P0.05)。結(jié)果提示,Cag A不同的干預(yù)濃度及作用時(shí)間可影響胃黏膜保護(hù)因子m RNA水平的變化,降低其保護(hù)作用。5.2 TFF1、TFF2、GKN2蛋白水平表達(dá)情況Western blot結(jié)果表明,經(jīng)Cag A蛋白處理GES-1細(xì)胞24h后,2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml組TFF1、TFF2及GKN2蛋白表達(dá)均較對(duì)照組明顯降低。結(jié)論:1胃癌組織中TFF1、TFF2、GKN2的表達(dá)明顯低于正常胃粘膜組織,在賁門腺癌及遠(yuǎn)端胃腺癌間無(wú)明顯差異,提示胃粘膜保護(hù)因子的缺失可能在胃癌的發(fā)生中發(fā)揮重要作用,但與發(fā)病部位無(wú)明顯相關(guān)。2幽門螺桿菌感染可明顯抑制GES-1細(xì)胞中TFF1、TFF2及GKN2的表達(dá),提示Hp感染可能通過(guò)降低胃黏膜保護(hù)因子的生成,加重胃粘膜損傷,進(jìn)而導(dǎo)致胃癌的發(fā)生。3小劑量Cag A蛋白干預(yù)GES-1細(xì)胞,細(xì)胞增生明顯,CDK4、Cyclin B1、PCNA表達(dá)明顯增多,結(jié)果提示Hp感染可影響胃粘膜上皮細(xì)胞的增殖活性,進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞損傷。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.2
【圖文】：

1 TFF1、TFF2 和 GKN2 在胃癌中的表達(dá) IHC 40pression of TFF1, TFF2 and GKN2 in gastric cancer I

圖 1 TFF1、TFF2 和 GKN2 在胃癌中的表達(dá) IHC 400×Fig.1 Expression of TFF1, TFF2 and GKN2 in gastric cancer IHC 400×圖 2 TFF1 在賁門腺癌及非癌胃粘膜中的表達(dá) IHC 200×

【參考文獻(xiàn)】

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1 ;Expression of trefoil factors 1 and 2 in precancerous condition and gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2006年19期

2 趙晨燕;張祥宏;薛麗英;邢凌霄;王俊靈;李學(xué)民;米建民;靳國(guó)梁;;河北省食管癌和胃癌高發(fā)區(qū)居民胃癌發(fā)生部位的變化及趨勢(shì)分析[J];中華腫瘤雜志;2008年11期

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1 薛麗英;邢凌霄;李月紅;吳文新;王俊靈;嚴(yán)霞;張祥宏;;賁門腺癌與遠(yuǎn)端胃腺癌CKs和MUCs免疫表型的差異[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)日程及論文匯編[C];2010年

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1 薛麗英;賁門腺癌與遠(yuǎn)端胃腺癌免疫表型及p14~（AFR）和p16~（INK4a）基因變化的對(duì)比研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

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1 婁蕾;賁門癌和遠(yuǎn)端胃癌Pim-3相關(guān)分子表達(dá)的對(duì)比研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

2 趙晨燕;食管胃交界腺癌發(fā)生情況及與遠(yuǎn)端胃癌的對(duì)比研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

本文編號(hào)：2739009