【摘要】：目的:在世界范圍內(nèi),胃癌死亡率占惡性腫瘤死亡率的第二位。近幾十年來,胃癌的發(fā)生部位發(fā)生明顯變化,來源于胃遠端部位(胃竇)胃癌的發(fā)生率明顯下降,而食管胃交界部位(esophagogastric junction,EGJ)腫瘤(包括遠端食管腺癌和賁門腺癌)的發(fā)生率呈明顯增高趨勢。從上世紀90年代開始,河北省食管癌、胃癌高發(fā)區(qū)居民賁門腺癌的發(fā)病率呈現(xiàn)逐漸增高的趨勢。正常情況下,由于胃黏膜自身修復功能和各種胃黏膜保護因子的作用,胃黏膜在受到創(chuàng)傷時很快會愈合。然而,保護因子的減少或缺失會導致胃黏膜更多地暴露于有害物質(zhì),可能誘發(fā)胃癌相關基因表達的改變,促使胃癌的發(fā)生發(fā)展。胃動蛋白基因家族(Gastrokines,GKN)是僅有的胃組織特異的胃癌相關基因,在胃組織特異表達,并能夠顯著抑制胃癌細胞生長。Hp感染可導致GKN1、GKN2表達顯著下調(diào)及胃黏膜腺體基因改變,提示GKNs可能參與了Hp感染胃癌的發(fā)生。三葉草因子家族(trefoil factor family,TFF),包括TFF1、TFF2、TFF3三個成員,主要分泌于人體胃腸道組織粘液分泌細胞,其表達與粘蛋白MUC分泌細胞有關。TFFs的分泌可促進胃黏膜上皮細胞的移動,快速修復,防止炎癥的發(fā)生,以及調(diào)節(jié)胃黏膜上皮細胞的分化,與胃癌的發(fā)生密切相關。以往研究發(fā)現(xiàn),Hp感染可影響胃黏膜上皮細胞TFFs及GKN的表達。Hp感染引起胃黏膜損傷需要與TFF1結合形成二聚體,TFF1可能是Hp感染的受體。而且,TFF1可能與GKN2結合形成異二聚體復合物在正常胃黏膜上皮發(fā)揮保護作用,細胞中TFF1與GKN2解離可使TFF1、GKN2失去正常的功能,從而促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展。然而,尚無確切證據(jù)表明TFFs、GKN2在不同部位胃癌發(fā)生中的作用及機制,與不同部位胃癌發(fā)生中Hp感染的關系仍不清楚。因此,本研究采用免疫組化技術比較賁門腺癌與遠端胃腺癌中TFF1、TFF2和GKN2的表達情況;同時采用細胞培養(yǎng)及分子生物學及時觀察Hp主要致病蛋白對胃黏膜永生化細胞株(GES-1)細胞增殖及TFF1、TFF2、GKN2表達的影響,深入分析Hp感染與胃粘膜保護因子在胃癌發(fā)病中的作用及機制,為胃癌的合理防治提供科學的理論依據(jù)。方法:選取2011-2014年河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院手術切除胃癌組織標本共113例,其中賁門腺癌61例(腫瘤中心在Z線上1cm和下2cm以內(nèi)),遠端胃腺癌52例。另外選取同期胃癌手術切除殘端正常胃粘膜23例作為對照。運用免疫組織化學方法比較TFF1、TFF2及GKN2在賁門腺癌與遠端胃腺癌中的表達情況。采用細胞培養(yǎng)、Real-time PCR及Western Blot等技術探討Hp致病蛋白Cag A對GES-1細胞增殖及TFF1、TFF2和GKN2表達的影響。結果:1胃癌腫瘤組織中TFF1、TFF2、GKN2的表達情況TFF1、TFF2及GKN2免疫組化陽性產(chǎn)物呈棕黃色顆粒,定位于細胞漿。胃癌患者腫瘤組織中TFF1、TFF2及GKN2的表達分別為42.5%(48/113)、46.9%(53/113)及29.2%(33/113),均明顯低于正常胃黏膜中的表達(P0.05)。2比較賁門腺癌與遠端胃腺癌中TFF1、TFF2及GKN2的表達2.1比較TFF1在不同部位胃腺癌中的表達免疫組化結果顯示,賁門腺癌和正常對照組胃黏膜中TFF1陽性表達率分別為42.6%(26/61)、87.0%(20/23),二者相比具有顯著差異(P0.05)。遠端胃腺癌組織中TFF1表達42.3%(22/52)明顯低于正常對照胃粘膜87.0%(P0.05)。比較賁門腺癌與遠端胃腺癌中TFF1的表達,結果發(fā)現(xiàn)不同部位胃癌中TFF1的表達無明顯差異(P0.05)。在遠端胃腺癌患者中,TFF1的陽性表達與浸潤程度、淋巴結轉移密切相關(P0.05)。而在賁門腺癌患者中,TFF1的陽性表達與浸潤程度、淋巴結轉移無明顯關系。2.2 TFF2在不同部位胃腺癌中的表達免疫組化結果顯示,TFF2在賁門腺癌及遠端胃腺癌組織中的陽性表達率分別為49.2%(30/61)、44.2%(23/52),均明顯低于正常對照胃粘膜組織91.3%(P0.05),但賁門腺癌與遠端胃腺癌中TFF2的表達無明顯差異(P0.05)。在賁門腺癌及遠端胃腺癌中,TFF2的陽性表達與性別、年齡、浸潤程度、淋巴結轉移以及腫瘤分期均無明顯相關。2.3 GKN2在賁門腺癌與遠端胃腺癌組織中的表達賁門腺癌和正常對照胃粘膜中GKN2陽性表達率分別為29.5%(18/61)、77.3%(18/23),二者相比具有顯著差異(P0.05)。遠端胃腺癌組織中GKN2表達28.8%(15/52)明顯低于正常對照胃粘膜77.3%(18/23,P0.05)。不同部位胃腺癌中GKN2表達無明顯差異(P0.05)。在遠端胃腺癌患者中,GKN2的陽性表達與淋巴結轉移密切相關(P0.05)。而在賁門腺癌患者中,GKN2的陽性表達與淋巴結轉移無明顯關系。3賁門腺癌和遠端胃腺癌中Hp感染對于TFF1、TFF2及GKN2表達的影響在113例樣本中,賁門腺癌61例,其中Hp陽性45例。伴有Hp感染患者TFF1陽性表達率為33.3%,明顯低于未感染Hp患者組68.8%(P0.05)。在Hp感染胃癌患者腫瘤組織中TFF2陽性表達率明顯低于未感染者(40.0%vs 75.0%,P0.05)。Hp感染賁門腺癌患者GKN2蛋白陽性表達為22.3%,明顯低于未感染組50%(P0.05)。在52例遠端胃腺癌中,伴有Hp感染者40例。Hp感染胃癌患者TFF1、TFF2及GKN2蛋白陽性表達率分別為32.5%、35.0%、20.0%,均明顯低于Hp未感染患者組(P0.05)。4 Hp主要致病蛋白Cag A對GES-1細胞增殖的影響4.1 MTT檢測結果MTT檢測結果顯示,不同濃度Cag A蛋白處理GES-1細胞24h后,GES-1細胞增生明顯,且呈劑量依賴性,在10μg/ml細胞增生達到高峰。然后隨著干預藥物劑量的增加,細胞增生逐漸降低。4.2 Cag A對細胞CDK4、Cyclin B1、PCNA表達的影響采用不同濃度Cag A蛋白刺激GES-1細胞,Real-time PCR結果顯示,CDK4、Cyclin B1、PCNA在2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml組中的表達均明顯高于對照組(P0.05)。Western blot結果發(fā)現(xiàn)各個濃度干預組CDK4、Cyclin B1、PCNA蛋白表達均比對照組明顯升高。5 Cag A對GES-1細胞中TFF1、TFF2及GKN2表達的影響5.1 GES-1細胞中TFF1、TFF2及GKN2 mRNA水平變化Real-time PCR結果顯示,Cag A干預3h時,10μg/ml組TFF1、TFF2及GKN2表達均明顯高于其它濃度組(P0.05)。而干預6h后,10μg/ml組TFF1、TFF2及GKN2表達卻明顯低于其它濃度組(P0.05)。24h時,Cag A2.5μg/ml干預組TFF1、TFF2及GKN2表達水平較對照組明顯降低(P0.05)。結果提示,Cag A不同的干預濃度及作用時間可影響胃黏膜保護因子m RNA水平的變化,降低其保護作用。5.2 TFF1、TFF2、GKN2蛋白水平表達情況Western blot結果表明,經(jīng)Cag A蛋白處理GES-1細胞24h后,2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml組TFF1、TFF2及GKN2蛋白表達均較對照組明顯降低。結論:1胃癌組織中TFF1、TFF2、GKN2的表達明顯低于正常胃粘膜組織,在賁門腺癌及遠端胃腺癌間無明顯差異,提示胃粘膜保護因子的缺失可能在胃癌的發(fā)生中發(fā)揮重要作用,但與發(fā)病部位無明顯相關。2幽門螺桿菌感染可明顯抑制GES-1細胞中TFF1、TFF2及GKN2的表達,提示Hp感染可能通過降低胃黏膜保護因子的生成,加重胃粘膜損傷,進而導致胃癌的發(fā)生。3小劑量Cag A蛋白干預GES-1細胞,細胞增生明顯,CDK4、Cyclin B1、PCNA表達明顯增多,結果提示Hp感染可影響胃粘膜上皮細胞的增殖活性,進而導致細胞損傷。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.2
【圖文】：

1 TFF1、TFF2 和 GKN2 在胃癌中的表達 IHC 40pression of TFF1, TFF2 and GKN2 in gastric cancer I

圖 1 TFF1、TFF2 和 GKN2 在胃癌中的表達 IHC 400×Fig.1 Expression of TFF1, TFF2 and GKN2 in gastric cancer IHC 400×圖 2 TFF1 在賁門腺癌及非癌胃粘膜中的表達 IHC 200×

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

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相關會議論文 前1條

1 薛麗英;邢凌霄;李月紅;吳文新;王俊靈;嚴霞;張祥宏;;賁門腺癌與遠端胃腺癌CKs和MUCs免疫表型的差異[A];中華醫(yī)學會病理學分會2010年學術年會日程及論文匯編[C];2010年

相關博士學位論文 前1條

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相關碩士學位論文 前2條

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本文編號：2739009