【摘要】：目的:基因芯片檢測(cè)研究發(fā)現(xiàn),hsa-mir-18b在正常腎組織與癌組織之間表達(dá)存在差異。對(duì)于雄激素受體(androgen receptor,AR)在腎癌中的表達(dá)及對(duì)腎癌發(fā)生發(fā)展的作用也有待商榷。本項(xiàng)目利用臨床腎癌組織標(biāo)本及腎癌細(xì)胞系,檢測(cè)hsa-mir-18b及AR的表達(dá),探討二者在腎癌增殖中的作用及關(guān)系,進(jìn)一步明確兩者在腎癌發(fā)生發(fā)展中的作用,為探索腎細(xì)胞癌新的可行的治療方法及潛在的靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。方法:選擇腎小管上皮細(xì)胞系HKC,腎癌細(xì)胞系OSRC-2與ACHN,通過蛋白印跡實(shí)驗(yàn)(Western blot)檢測(cè)細(xì)胞系中AR的表達(dá),選擇AR表達(dá)較高的OSRC-2細(xì)胞系,采用慢病毒感染進(jìn)行AR敲低。構(gòu)建四質(zhì)粒系統(tǒng)慢病毒載體,將慢病毒首先轉(zhuǎn)染于293T細(xì)胞,培養(yǎng)一定時(shí)間后收集病毒液。再將病毒液感染腎癌細(xì)胞系后繼續(xù)培養(yǎng)一定時(shí)間,之后用嘌呤霉素進(jìn)行篩選,來獲得AR降表達(dá)的穩(wěn)定細(xì)胞系。采用噻唑藍(lán)比色法(MTT)檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力。根據(jù)miRwalk網(wǎng)站預(yù)測(cè)的AR下游的靶microRNA,且根據(jù)參考文獻(xiàn)中基因芯片篩選出腎癌與腎組織中有差異表達(dá)的microRNA,選擇hsa-mir-18b進(jìn)行研究。探討AR與hsa-mir-18b表達(dá)的關(guān)系,檢測(cè)二者對(duì)腎癌細(xì)胞增殖的作用。收集腎透明細(xì)胞癌(clear cell carcinoma renal cell carcinoma,ccRCC)配對(duì)的癌組織及鄰近正常組織30例。采用Western blot及Real-time PCR檢測(cè)AR在腎癌及鄰近正常組織中的表達(dá)。同時(shí),用Real-time PCR檢測(cè)hsa-mir-18b的表達(dá),驗(yàn)證兩者之間的關(guān)系。結(jié)果:1.應(yīng)用Western blot檢測(cè)OSRC-2、ACHN及HKC三個(gè)細(xì)胞系中的AR的蛋白表達(dá)水平,結(jié)果顯示OSRC-2細(xì)胞系中的AR的表達(dá)量較高,HKC及ACHN細(xì)胞系中不表達(dá)AR;Real-time PCR檢測(cè)AR的轉(zhuǎn)錄水平,結(jié)果與蛋白水平一致。2.慢病毒轉(zhuǎn)染OSRC-2細(xì)胞系后,Western blot及Real-time PCR驗(yàn)證顯示AR的蛋白質(zhì)和轉(zhuǎn)錄水平均明顯降低,細(xì)胞系構(gòu)建成功。3.MTT實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)顯示OSRC-2-shAR細(xì)胞增殖能力較對(duì)照組相比明顯降低(P0.01)。4.利用miRwalk網(wǎng)站預(yù)測(cè)AR可能參與調(diào)控的micro-RNA,7個(gè)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行預(yù)測(cè),其中5個(gè)數(shù)據(jù)庫預(yù)測(cè)hsa-mir-18b可能為AR的靶microRNA。5.通過Real-time PCR檢測(cè)OSRC-2和OSRC-2-shAR細(xì)胞系中hsa-mir-18b的表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)敲低AR后hsa-mir-18b的表達(dá)量升高(P0.001)。6.MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)OSRC-2+hsa-mir-18b inhibitor、OSRC-2、OSRC-2-shAR+hsa-mir-18b inhibitor和OSRC-2-shAR四種細(xì)胞系中腎癌細(xì)胞增殖能力,結(jié)果顯示AR通過調(diào)控hsa-mir-18b參與調(diào)節(jié)腎癌細(xì)胞的增殖。7.檢測(cè)腎癌組織樣本及鄰近正常腎組織中hsa-mir-18b的表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)hsa-mir-18b在腎癌組織中較低,而相應(yīng)的鄰近正常腎組織表達(dá)較高,其中26對(duì)(86.7%)hsa-mir-18b表達(dá)下調(diào),4對(duì)(13.3%)表達(dá)上調(diào)(P0.01)。8.hsa-mir-18b的表達(dá)水平與腎癌TNM分期顯著相關(guān),但與患者的性別、年齡、腫瘤位置及大小、Furhman分級(jí)等因素?zé)o關(guān)。9.Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)30對(duì)臨床標(biāo)本中AR的蛋白表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)AR在腎癌組織中的表達(dá)比相應(yīng)的鄰近正常腎組織明顯降低(P0.01)。Real-time PCR方法測(cè)驗(yàn)30例配對(duì)組織中AR在mRNA水平的表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)癌組織中AR的表達(dá)明顯升高(P0.01)。結(jié)論:1.在腎癌組織中AR的蛋白與mRNA的表達(dá)水平不一致。2.腎癌組織中hsa-mir-18b的表達(dá)較鄰近正常腎組織中降低。3.相關(guān)的功能研究顯示腎癌細(xì)胞系中,AR降表達(dá)后腎癌細(xì)胞的增殖能力降低,hsa-mir-18b表達(dá)增高;抑制hsa-mir-18b表達(dá),腎癌細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)。4.AR通過調(diào)控hsa-mir-18b參與調(diào)節(jié)腎細(xì)胞癌的增殖。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.11
【圖文】：

現(xiàn)結(jié)晶全部溶解；7)用酶標(biāo)免疫檢測(cè)儀在570nm處測(cè)吸光度，計(jì)算每個(gè)孔的值并求平均值，每天重復(fù)計(jì)數(shù)，連續(xù)3或6天。1.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用 SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)本研究所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，應(yīng)用配對(duì) t 檢驗(yàn)及卡方檢驗(yàn)，其中 P<0.05 代表差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義。1.2 結(jié)果1.2.1 腎小管上皮細(xì)胞及腎癌細(xì)胞系 AR 的表達(dá)為了選擇 AR 表達(dá)較高的腎細(xì)胞系，我們采用免疫印跡 Western blot 實(shí)驗(yàn)方法對(duì)腎小管上皮細(xì)胞 HKC 及腎癌 OSRC-2、ACHN 細(xì)胞系中 AR 的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示 AR 在 OSRC-2 細(xì)胞系中表達(dá)較高，在人正常腎小管上皮細(xì)胞及 ACHN 細(xì)胞中不表達(dá)(圖 1.1 A)。同時(shí)為了判斷 AR 在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)情況，我們通過 Real-time PCR 對(duì)以上三種細(xì)胞系進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果與蛋白表達(dá)水平一致(圖 1.1 B)。

Western blot及Real-time PCR實(shí)驗(yàn)對(duì)敲低效果進(jìn)行檢驗(yàn)。其中，導(dǎo)入AR敲低質(zhì)粒組與未處理的OSRC-2細(xì)胞系相比，AR的表達(dá)明顯降低；導(dǎo)入空質(zhì)粒scramble(scr)組與未處理的OSRC-2細(xì)胞系相比，AR的表達(dá)無明顯差異(圖1.2)。這提示AR降表達(dá)的穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建成功，能夠用來進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。圖 1.2 慢病毒轉(zhuǎn)染后 AR 敲低效果左圖為利用 Western blot 檢測(cè) AR 在細(xì)胞系中蛋白水平的表達(dá)，以 GAPDH當(dāng)作內(nèi)參；OSRC-2 表示未經(jīng)處理的腎癌細(xì)胞，OSRC-2-scr 表示轉(zhuǎn)入無序質(zhì)粒的腎癌細(xì)胞，sh-AR 表示轉(zhuǎn)入 AR 降表達(dá)質(zhì)粒的腎癌細(xì)胞。右圖為利用 Real-timePCR 方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞系中 AR 的 mRNA 表達(dá)水平，以 GAPDH 作為內(nèi)參，**代表 P<0.01。1.2.3 AR 降表達(dá)后細(xì)胞增殖能力降低通過體外 MTT 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的方法檢測(cè) AR 對(duì)腎癌細(xì)胞增殖的影響。其中，未處理的 OSRC-2 實(shí)驗(yàn)組與轉(zhuǎn)入空質(zhì)粒的對(duì)照組對(duì)比

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8 編譯 Seven;一個(gè)新藥30多年的發(fā)現(xiàn)歷史與無與倫比的未來[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2010年

9 徐述湘;對(duì)疑難癌癥的診治也應(yīng)給予關(guān)注[N];中國醫(yī)藥報(bào);2008年

10 華訊;《財(cái)富》：今年五種藥品可能熱銷[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

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本文編號(hào)：2732530