【摘要】：研究目的：闡明肝細胞癌組織表達共刺激分子B7-H3的特點及與患者臨床特征、預后的關系,探討B(tài)7-H3分子對肝癌細胞生物學行為的影響及其機制。研究方法：1.通過免疫組化檢測116例肝癌患者組織B7-H3的表達水平和特點,并比較不同分組間B7-H3的表達差異。通過Kaplan-Meier生存分析比較不同B7-H3表達水平患者總體預后的差異并采用Cox風險模型進行預后因素分析。2.構建B7-H3-shRNA沉默質(zhì)粒,下調(diào)肝癌細胞系HepG2和SMMC7721的B7-H3基因表達,通過MTT實驗和ELISA凋亡試劑盒檢測細胞增殖能力和凋亡水平變化,通過劃痕實驗檢測細胞平面運動能力變化,通過transwell實驗檢測對細胞侵襲能力的影響。3.通過、Western blot實驗檢測沉默B7-H3基因后侵襲相關分子MMP-2、 MMP-9, EMT相關分子E-cadherin、Vimenti、N-cadherin,以及JAK/Stat信號通路分子p-stat3、p-JAK2和EMT相關轉錄因子Slug和Snail的表達變化。4.通過免疫組織化學方法檢測CD68陽性腫瘤浸潤巨噬細胞在116例肝癌患者組織中的分布及特點,分析TAMs浸潤數(shù)量與B7-H3表達的相關性,以及TAMs數(shù)量與預后的關系。5.分別將HepG2細胞與PMA誘導的THP-1細胞采用接觸共育和非接觸共育培養(yǎng),通過RT-PCR和western b lot實驗檢測M1型巨噬細胞特征性分子HLA-DR、iNOS和TNF-α,以及M2型分子Argl、VEGF和CCL22的表達。6.在接觸共育培養(yǎng)體系中,采用B7-H3-shRNA沉默質(zhì)粒下調(diào)HepG2細胞B7-H3基因表達,通過RT-PCR和western blot實驗檢測M1型分子HLA-DR、iNOS和]TNF-α,M2型分子Argl、VEGF口CCL22的表達。并進一步通過加入外源重組B7-H3蛋白,觀察是否可逆轉沉默B7-H3對巨噬細胞極化的影響。研究結果：1.116例肝癌組織標本中,109例可檢測到強弱不等的B7-H3表達。B7-H3的表達水平在不同TNM分期及按是否存在淋巴結轉移分組,組間有顯著性差異。生存分析提示B7-H3低表達組有更高的生存率,B7-H3高表達提示預后不良。2.采用B7-H3-shRNA沉默質(zhì)粒下調(diào)HepG2和SMMC7721細胞B7-H3基因表達后：1)細胞增殖和凋亡水平無明顯變化；2)平面移行能力和侵襲能力顯著下降；3)EMT機制受到抑制,表現(xiàn)為E-鈣粘蛋白表達升高,而波形蛋白、N-鈣粘蛋白表達下降；4)MMP-2、MMP-9的表達水平和活性下降；5) p-stat3和p-JAK2及EMT相關轉錄因子Slug的表達下調(diào)。3.116例肝癌組織標本中,94.8%可檢測到以CD68為標志的TAMs浸潤,顯著高于癌旁和正常肝組織,且浸潤水平與TNM分期、淋巴結轉移和預后密切相關。B7-H3的表達水平和TAMs的浸潤數(shù)量呈顯著正相關。6.采用非接觸共育培養(yǎng)和接觸共育培養(yǎng),HepG2細胞均可誘導THP-1來源的巨噬細胞發(fā)生M2亞型極化,表現(xiàn)為HLA-DR、iNOS和TNF-α表達下降,而Arg1、VEGF和CCL22表達升高,其中接觸共育的誘導作用更為明顯。7.采用B7-H3-shRNA沉默質(zhì)粒下調(diào)B7-H3基因表達可抑制HepG2細胞誘導THP-1來源的巨噬細胞發(fā)生M2亞型極化,而加入外源重組B7-H3蛋白可一定程度逆轉siRNA的沉默作用。結論：1.B7-H3在肝癌組織表達明顯升高,且與腫瘤分期、轉移和預后密切相關。2.B7-H3的表達增強了肝癌細胞的侵襲、轉移能力。3.B7-H3對肝癌的侵襲、轉移能力的影響與通過JAK-2/Stat-3/Slu g通路介導上皮間質(zhì)轉化機制有關。4.肝癌組織腫瘤相關巨噬細胞的浸潤水平與疾病進程和預后密切相關,且與組織B7-H3的表達呈顯著正相關。5.肝癌細胞可通過B7-H3誘導腫瘤相關巨噬細胞發(fā)生M2亞型極化。
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 Luigi Rossi;Federica Zoratto;Anselmo Papa;Francesca Iodice;Marina Minozzi;Luigi Frati;Silverio Tomao;;Current approach in the treatment of hepatocellular ca[J];World Journal of Gastrointestinal Oncology;2010年09期

本文編號：2729578