【摘要】：研究背景舌鱗狀細(xì)胞癌是口腔癌中最常見的類型,具有高度局部侵襲和向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的特點(diǎn),是頭頸部癌癥患者死亡率居高不下的主要原因。傳統(tǒng)的舌癌治療多是以手術(shù)為主、化療與放療為輔的綜合治療,由于手術(shù)涉及范圍大常導(dǎo)致患者咀嚼、吞咽及語音等功能受損,生活質(zhì)量和預(yù)后極差。而放化療藥物,無法有效區(qū)分癌細(xì)胞和正常細(xì)胞,常給正常組織器官帶來嚴(yán)重的副作用。因此,迫切需要開發(fā)一種具有新型作用的抗癌藥物,在準(zhǔn)確地殺死舌癌細(xì)胞同時(shí),維持健康的口腔組織結(jié)構(gòu)和功能。納米生物技術(shù)被認(rèn)為有潛力提供更有針對(duì)性的抗癌藥物,顯著提高癌癥患者的預(yù)后。作為一種多功能的納米金屬氧化物,納米氧化鋅在口腔醫(yī)學(xué)、化妝品等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。最近的研究中,納米氧化鋅被發(fā)現(xiàn)對(duì)一些腫瘤細(xì)胞具有毒性作用。那么納米氧化鋅是否會(huì)引起舌癌細(xì)胞的毒性?其毒性作用的機(jī)制又是什么?目前尚未有相關(guān)研究對(duì)其進(jìn)行探討。研究目的本項(xiàng)目以人舌鱗狀細(xì)胞癌CAL27細(xì)胞系為體外研究對(duì)象,通過分析對(duì)比納米氧化鋅處理組與對(duì)照組細(xì)胞的增殖、抑制率異同、兩組細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位的高低異同、細(xì)胞內(nèi)氧化還原指標(biāo)ROS的水平變化、細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白以及選擇性的線粒體自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)水平變化,來分析和探索納米氧化鋅致癌細(xì)胞CAL 27毒性的最佳濃度和作用時(shí)間,以及明確在其毒性作用過程中,PINK1/Parkin蛋白信號(hào)軸介導(dǎo)的線粒體自噬所扮演的角色。材料與方法首先,采用透射電鏡、動(dòng)態(tài)光散射儀,比表面積測(cè)量?jī)x等對(duì)實(shí)驗(yàn)中使用的市售納米氧化鋅顆粒的理化特征進(jìn)行分析;其次,用含不同濃度的納米氧化鋅溶液培養(yǎng)CAL27細(xì)胞,通過細(xì)胞增殖能力實(shí)驗(yàn)得到納米氧化鋅致細(xì)胞毒性的50%抑制濃度;然后,采用上述濃度分別處理細(xì)胞0、4、8、12、24h后,采用細(xì)胞內(nèi)活性氧熒光探針、線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞內(nèi)自噬溶酶體探針等手段檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的應(yīng)激性改變;最后,采用Western Blotting、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、細(xì)胞免疫熒光、透射電鏡、激光掃描共聚焦顯微鏡等動(dòng)態(tài)及靜態(tài)檢測(cè)并分析納米氧化鋅對(duì)細(xì)胞內(nèi)自噬體的數(shù)量的影響,以及對(duì)自噬相關(guān)蛋白LC3、P62、Beclin1、線粒體自噬相關(guān)蛋白PINK 1、Parkin表達(dá)水平的影響。結(jié)果1.納米氧化鋅原始顆粒呈六棱柱形,顆粒原始尺寸50nm左右,水合粒徑500.8 nm左右,Zeta電位32.9mV。衍射圖譜分析結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)品基本一致。2.納米氧化鋅致CAL27細(xì)胞抑制率與濃度成正相關(guān)關(guān)系,計(jì)算得出50%抑制濃度為25 μg/mL。3.25μg/mL納米氧化鋅可引起細(xì)胞內(nèi)活性氧水平顯著升高、線粒體膜電位減少、細(xì)胞內(nèi)自噬體熒光顆粒數(shù)量增加,且與刺激時(shí)長有相關(guān)關(guān)系;差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(均P0.01)4.25μg/mL納米氧化鋅刺激細(xì)胞不同時(shí)長后,細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示,LC3II、PINK1熒光顆粒數(shù)量增加(P0.05)。Western Blotting結(jié)果顯示自噬相關(guān)蛋白LC3II、Beclin1、PINK1表達(dá)顯著增加,P62表達(dá)顯著下調(diào)(P0.05)。線粒體自噬相關(guān)蛋白Parkin在胞漿的表達(dá)下降,而在線粒體的表達(dá)上調(diào)。激光掃描共聚焦結(jié)果發(fā)現(xiàn)處理組細(xì)胞內(nèi)存在較多的PINK1與GFP-LC3熒光顆粒共定位(P0.05)。透射電鏡結(jié)果在處理組細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)較多雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬體和腫脹變形的線粒體。結(jié)論1.50 nm粒徑納米氧化鋅顆粒對(duì)CAL 27細(xì)胞具有一定的細(xì)胞毒性。2.50 nm納米氧化鋅顆�？梢砸餋AL 27細(xì)胞線粒體損傷和氧化應(yīng)激。3.PINK1/Parkin通路介導(dǎo)的線粒體自噬的過度激活可能在納米氧化鋅引起的CAL 27細(xì)胞凋亡中起關(guān)鍵作用。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R739.86
【圖文】：

越來越多的研宄表明，線粒體自噬異常在腫瘤的發(fā)展過程中和腫瘤耐藥性逡逑產(chǎn)生過程中扮演重要的角色［２Ｇ］。線粒體自噬正在成為腫瘤治療的一個(gè)潛在靶點(diǎn)逡逑線粒體自噬在癌細(xì)胞發(fā)生發(fā)展中扮演著雙重角色（圖２），某些腫瘤細(xì)胞中，逡逑過度的誘導(dǎo)線粒體自噬會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞的凋亡，可以通過激活線粒體自噬的方式來逡逑阻止結(jié)腸炎癌癥的進(jìn)展［２２］。而也有研究發(fā)現(xiàn)，在某些腫瘤細(xì)胞中誘導(dǎo)的線粒體自逡逑噬卻促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展［２１，２３＞］。因此線粒體自噬在腫瘤的治療中宄竟應(yīng)該激逡逑發(fā)還是抑制，取決于腫瘤的類型。逡逑３逡逑

邐第一章納米氧化鋅顆粒表征邐逡逑２結(jié)果逡逑２．１邐ＺｎＯ邋ＮＰｓ原始尺寸及顆粒表面形貌逡逑從ＳＥＭ檢測(cè)獲得的圖像可以看出，ＺｎＯ邋ＮＰｓ呈現(xiàn)出縱向觀為柱形、橫向觀逡逑為六邊形的表面形貌特點(diǎn)，故顆粒形狀為典型的六棱柱形，從ＴＥＭ檢測(cè)獲得的逡逑圖像可以看出，ＺｎＯ邋ＮＰｓ的原始尺寸在５０邋ｎｍ左右（圖１－１）。逡逑

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Photocatalytic killing effect of TiO_2 nanoparticles on Is-174-t human colon carcinoma cells[J];World Journal of Gastroenterology;2004年21期

本文編號(hào)：2726990