【摘要】：【研究目的】探討膠質(zhì)瘤相關(guān)癌基因同源蛋白1(Gli1)及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相關(guān)蛋白Snail、E-cadherin及N-cadherin在非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表達及臨床意義,研究Hedgehoog信號通路調(diào)控非小細胞肺癌侵襲、轉(zhuǎn)移的分子機制,為非小細胞肺癌的診斷和治療提供新的靶點�！狙芯糠椒ā�1.采用免疫組織化學法檢測67例非小細胞肺癌組織及配對正常肺組織中Gli1、Snail、E-cadherin及N-cadherin蛋白的表達情況,分析其與患者臨床分期、病理類型、淋巴轉(zhuǎn)移和分化程度等臨床病理特征及預后的關(guān)系。2.采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(RT-PCR)法測定Gli1、Snail、E-cadherin及N-cadherin基因在20例非小細胞肺癌及其對應癌旁正常肺組織中mRNA的表達情況。3.根據(jù)Gli1在NSCLC細胞系A549和H1299中的表達水平,將Gli1表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至NSCLC細胞系A549和H1299中,使Gli1低表達的A549外源性過表達,Gli1高表達的H1299外源性降表達,利用Western blot檢測Gli1的轉(zhuǎn)染效果。4.利用細胞劃痕實驗檢測Gli1轉(zhuǎn)染后A549和H1299細胞遷移運動能力的變化情況,通過Transwell侵襲實驗檢測Gli1轉(zhuǎn)染后A549和H1299細胞侵襲能力的變化情況。5.利用Western blot實驗檢測Gli1轉(zhuǎn)染后A549和H1299細胞中EMT相關(guān)蛋白Snail、E-cadherin和N-cadherin的表達變化情況�！狙芯拷Y(jié)果】1.Gli1、Snail、E-cadherin及N-cadherin在NSCLC組織中的陽性表達率分別為61.2%(41/67)、50.8%(34/67)、56.7%(38/67)、53.7%(36/67),在正常肺組織中的陽性表達率為14.9%(10/67)、8.9%(6/67)、98.5%(66/67)、5.9%(4/67),Gli1、Snail及N-cadherin在非小細胞肺癌中的表達高于正常肺組織,E-cadherin在正常肺組織中的表達高于NSCLC,表達差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.患者癌組織中Gli1高表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度和臨床分期密切相關(guān)(P0.05),與性別、年齡、腫物大小和病理分型無相關(guān)性;Gli1的表達與E-cadherin的表達呈負相關(guān)(r=-0.325,P0.05),與Snail、N-cadherin的表達呈正相關(guān)(r=0.379、r=0.490,P0.05)。3.RT-PCR結(jié)果顯示,Gli1、Snail和N-cadherin在NSCLC中mRNA的表達量為(0.933±0.115vs0.656±0.014vs0.255±0.078),高于正常余肺組織(0.510±0.208 vs 0.086±0.362 vs 0.033±0.043,P0.05),E-cadherin在正常肺組織中mRNA的表達量為(0.811±0.180)高于癌組織(0.461±0.087)的表達量,(P0.05)。4.Gli1、Snail和N-cadherin高表達的患者表現(xiàn)出更差的預后和更低的生存率(P0.05),E-cadherin陰性組的患者較陽性組患者顯示出更差的預后和更低的生存率,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)),Cox比例風險回歸模型分析結(jié)果顯示,E-cadherin陰性、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分化程度是影響NSCLC患者預后的獨立危險因素。5.Western blot實驗結(jié)果顯示經(jīng)慢病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染并藥篩得到穩(wěn)定的Gli1外源性降表達的H1299和Gli1外源性過表達的A549細胞。6.細胞劃痕實驗結(jié)果顯示Gli1降表達的H1299細胞遷移運動能力顯著降低,而Gli1過表達的A549細胞遷移運動能力明顯提高。Transwell侵襲實驗顯示Gli1降表達的H1299細胞侵襲能力顯著降低,而Gli1過表達的A549細胞侵襲能力明顯提高。7.Western blot實驗結(jié)果顯示Gli1降表達的H1299細胞EMT相關(guān)蛋白Snail和N-cadherin表達降低,E-cadherin表達升高,而Gli1過表達的A549細胞EMT相關(guān)蛋白Snail和N-cadherin表達升高,E-cadherin表達降低�！狙芯拷Y(jié)論】1.E-cadherin在正常肺組織中的表達高于非小細胞肺癌組織,Gli1、Snail和N-cadherin在NSCLC中的表達高于正常肺組織,且Gli1的表達與Snail、N-cadherin的表達呈正相關(guān),與E-cadherin的表達呈負相關(guān),表明非小細胞肺癌中EMT的發(fā)生與Hedgehog通路的異常激活有關(guān)。2.不同分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否和臨床分期間Gli1及E-cadherin表達強度有差異,分化程度和臨床分期越高,Gli1的表達則越高,E-cadherin的表達越低,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者Gli1的表達高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者,E-cadherin的表達偏低。Snail、N-cadherin的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否和臨床分期有關(guān)。3.Gli1可促進NSCLC細胞的遷移和侵襲,Gli1可能是通過調(diào)節(jié)Snail的表達調(diào)節(jié)E-cadherin和N-cadherin的表達進而促進NSCLC細胞EMT的進程。4.在非小細胞肺癌中,Hh信號通路的異�；罨cEMT的存在密切相關(guān),Gli1與EMT相關(guān)蛋白的表達對判斷非小細胞肺癌患者的臨床特征及預后有一定提示作用。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R734.2
【圖文】：

天津醫(yī)科大學碩士學位論文 一、Gli1 與 EMT 相關(guān)蛋白在 NSCLC 組織中的表達及臨床意義1.2 結(jié)果1.2.1 NSCLC 中肺腺癌及肺鱗癌分化程度的判讀腺癌和鱗癌是 NSCLC 中最常見的兩種組織類型,參照 2015 版 WHO 肺癌組織學分類的標準，本研究中對肺腺癌的分化程度的判讀標準為：組織類型以附壁樣腺癌為主的為高分化腺癌；組織類型腺泡狀和乳頭狀腺癌為主的為中分化腺癌；組織類型以實性腺癌和微乳頭腺癌為主的為低分化腺癌；對肺鱗癌的判讀標準為：高分化肺鱗癌癌巢中多有角化珠形；中分化肺鱗癌中有角化現(xiàn)象但是不形成角化珠；低分化肺鱗癌細胞異型性明顯，且無角化珠（圖 1.2.1）。

13A. Gli-1; B. Snail; C. E-cadherin; D. N-cadherin圖 1.2.2 免疫組織化學染色檢測非小細胞肺癌中 Gli-1,Snail,E-cadherin 和N-cadherin 的表達（SP×400）1.2.3 Gli1 及 EMT 相關(guān)蛋白的表達與 NSCLC 患者臨床病理特征的關(guān)系67 例 NSCLC 組織進行免疫組織化學染色分析，發(fā)現(xiàn)癌組織中 Gli1 及E-cadherin 的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度和臨床分期密切相關(guān)（P<0.05），與性別、年齡、腫物大小和病理分型無相關(guān)性；Snail 及 N-cadherin 的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期相關(guān)（P<0.05），與性別、年齡、腫物大小、分化程度和病理分型無相關(guān)性（表 1.2.3）；Spearman 等級相關(guān)分析顯示 Gli1 的表達與 E-cadherin的表達呈負相關(guān)（r=-0.325,P<0.05）,與 Snail、N-cadherin 的表達呈正相關(guān)（ r=0.379,r=0.490,P<0.05 ） ； Snail 與 E-cadherin 的 表 達 呈 負 相 關(guān)（r=-0.318,P<0.05）。

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本文編號：2717296